Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sul trattamento basato sulle cellule staminali delle neuropatie periferiche, in particolare per la neuropatia laringea ricorrente equina. I principali vantaggi di questa tecnica sono che il raccolto di cellule staminali è minimamente invasivo e che il metodo di iniezione può anche essere trasferito ad altre neuropatie periferiche. Le implicazioni di questa tecnica si estendono ad altri studi di altri tipi di cellule, poiché le cellule staminali possono essere differenziate in altre cellule di interesse prima dell'iniezione.
La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché il controllo endoscopico video dei movimenti laringei e la manipolazione delle tecniche di stimolatore nervoso possono essere difficili da imparare. Identificare il sito campione nella lunga testa del muscolo tricipite mediante ispezione visiva e palpazione, circa la linea mediana tra il punto del gomito e il punto della spalla. Utilizzare le tosaerba elettriche per radere un'area di circa due per due centimetri e applicare uno scrub chirurgico costituito da sapone liquido poli-ioduro e impacchi di alcol per un minuto sulla pelle esposta.
Utilizzando un ago calibro 25, iniettare per via sottocutanea un millilitro di soluzione di lidocaina al centro dell'area disinfettata. Dopo aver disinfettato con sapone mani antibatterico pulito e indossare guanti sterili, posizionare un ago semiautomatico di biopsia calibro 14 su un drappo sterile monouso e tirare il meccanismo a molla per armare l'ago. Assemblare una cannula e un otturatore nella posizione bloccata per formare un trochar e introdurre il trochar perpendicolarmente attraverso la pelle desensibilizzata, circa 1,5 centimetri nel tessuto muscolare sottostante.
Quindi rimuovere il trochar e posizionare l'otturatore su un drappo sterile. Introdurre l'ago attraverso la cannula. Successivamente, introdurre l'ago e la cannula attraverso l'incisione cutanea nel muscolo, fino a quando la punta dell'ago è nel mezzo della lunga testa del muscolo tricipite.
Quindi rilasciare l'ago della biopsia, estrarre l'ago e la cannula dal muscolo insieme e rimuovere l'ago dalla cannula. Tirare la molla con una mano tenendo l'ago con l'altra mano, fino a quando il campione diventa visibile sulla punta dell'ago della biopsia. Con l'aiuto di un assistente, aprire un tubo campione contenente il mezzo campione e utilizzare un ago ipodermico calibro 19 per trasferire il piccolo pezzo muscolare dall'ago della biopsia nel mezzo di campionamento.
Chiudere il tubo con il tappo a vite e inclinare delicatamente il tubo due volte per assicurarsi che il campione galleggia nel mezzo. Quindi riaccendere l'ago della biopsia e reintrodurre la cannula attraverso l'incisione cutanea per raccogliere da due a tre campioni in più fino a quando non sono stati acquisiti circa 20 milligrammi di tessuto muscolare. Per iniettare le cellule, dopo aver riscaldato la sospensione cellulare a temperatura ambiente, aspirare un millilitro di cellule in una siringa da due millilitri e confermare che il cavallo si trova nella posizione a testa in giù che è indicativa della sedazione completa.
Successivamente, ritagliare un'area di venti per dieci centimetri sulla regione laringea sinistra e applicare uno scrub chirurgico di sapone poli-ioduro e alcol sulla regione esposta. Posizionare un endoscopio video standard flessibile attraverso il laccio sinistro del cavallo verso il nasofaringe, regolando la posizione dell'endoscopio fino a ottenere una visione completa sia delle cartilagine aritenoidi che dell'epiglottide. Collegare l'ago di iniezione di stimolazione all'elettrodo negativo dello stimolatore nervoso.
Collegare la siringa contenente la sospensione cellulare alla linea di iniezione e pre-riempire il tubo per scaricare l'aria dal sistema. Collegare l'elettrodo positivo dello stimolatore nervoso a un cerotto dell'elettrodo che rimarrà attaccato all'area della pelle esposta. Caricare una siringa con un volume di soluzione salina sterile pari al volume preriempito del tubo e introdurre l'ago di iniezione di stimolazione verso l'aspetto dorsolaterale della laringe, avviando lo stimolatore nervoso in una modalità di stimolazione Hertz, con una corrente di due milliarti all'avvicinarsi dell'aspetto laterale dorsale della laringe.
Spostare delicatamente l'ago verso il nervo laringeo ricorrente. Non appena il movimento di rapimento della cartilagine aritenoide sinistra è visibile, ridurre la corrente, fino a quando il movimento scompare, mantenendo l'ago in posizione. Quando si osserva una perdita di risposta motoria a 0,5 milliambi, mantenere la posizione dell'ago e iniettare un millilitro delle cellule staminali autologhe, seguito dall'intero volume di salina pre-preparata.
Mantenere l'ago in una posizione stabile durante questo processo, poiché la distanza dai nervi è controllata dalle correnti che producono una risposta motoria e piccoli movimenti dell'ago possono produrre un'improvvisa perdita di risposta. Quindi rimuovere l'ago e l'endoscopio e consentire al cavallo di riprendersi con il monitoraggio. In studi precedenti non sono state osservate reazioni avverse durante o dopo il campionamento, né è stata osservata alcuna infiammazione durante o dopo la stimolazione o l'iniezione delle cellule staminali.
Inoltre, non sono state misurate differenze tra i punteggi pre-iniezione delle funzioni laringee e i punteggi ottenuti nei giorni uno, sette e 28 dopo l'iniezione di cellule staminali. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che la procedura di raccolta delle cellule staminali non è invasiva e consente la coltura di un numero enorme di cellule staminali mesenchimali autologhe in un breve lasso di tempo. Seguendo questa procedura, altri metodi, come l'iniezione di cellule pre-differenziate, possono essere eseguiti per rispondere a ulteriori domande sul fatto che le cellule di Schwann hanno maggiori probabilità di contribuire alla determinazione dei nervi.
Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori in medicina rigenerativa per esplorare l'uso delle cellule staminali nella neuropatia laringea ricorrente equina.
