Questo protocollo può essere utilizzato per quantificare il sonno e l'attività in qualsiasi popolazione ittica e ha il potenziale per espandere il numero di sistemi modello utilizzati per studiare la regolazione del sonno. Il vantaggio di questa tecnica è la sua flessibilità. Ad esempio, i pesci possono essere monitorati in una varietà di dimensioni dell'arena o in esperimenti ospitati singolarmente o ospitati in gruppo.
Un punto di forza nella misurazione del sonno in questo sistema è la misurabilità del metodo per il farmaco ad alta produttività o lo screening genetico. Abbiamo applicato questo metodo allo studio dell'evoluzione del sonno in due diverse popolazioni di pesci grotta che dimostrano fenotipi del sonno drammaticamente diversi. Sebbene possa essere difficile stabilire un sistema per l'imaging comportamentale, il nostro sistema fornisce un metodo conveniente per lo studio dei pesci larvali e adulti.
Per costruire il sistema per tracciare con precisione il comportamento locomotore per lo studio del sonno e dei ritmi circadiani nel larvale A.mexicanus, usa l'acrilico del segno bianco spesso 0,33 centimetri per costruire una piattaforma per il sistema di tracciamento larvale. Posizionare la piattaforma di registrazione sopra il dissipatore di calore quadrato illuminato su cui risiederanno arene contenenti pesci durante gli esperimenti di tracciamento comportamentale e posizionare un secondo acrilico all'interno della scatola tra le luci nell'alloggiamento degli animali per diffondere l'infrarosso per un'illuminazione e un contrasto ottimali. Posizionare l'intera fase di tracciamento larvale e l'illuminazione impostata all'interno di un tubo di plastica chiuso.
Utilizzare uno strumento rotativo per rimuovere l'obiettivo da una webcam adatta sperimentalmente. Rimuovere le piccole viti sul retro della fotocamera per rimuovere l'alloggiamento interno e rimuovere le piccole viti all'interno del corpo della fotocamera per allentare il resto dell'obiettivo. Utilizzare un piccolo cacciavite per rimuovere eventuali parti dell'alloggiamento dell'obiettivo lasciate dopo aver tagliato l'obiettivo.
E rimuovere il diodo blu che emette luce sulla parte superiore del dispositivo accoppiato alla carica o dell'alloggiamento CCD. Quindi, riportare l'alloggiamento interno al suo orientamento originale prima di avvitare le due viti esterne nelle loro posizioni originali. Utilizzare una piccola sega per instradare l'interno della fotocamera per consentire alla fotocamera di essere dotata di un bit di instradamento di plastica arrotondato che leviga la plastica extra fino a quando non può accompagnare un adattatore per obiettivo.
Installare un filtro passa infrarosso all'interno della fotocamera il più vicino possibile al CCD senza entrare in contatto diretto con la fotocamera e avvitare l'adattatore di un obiettivo fisso di 35 millimetri nella parte anteriore della fotocamera nella parte posteriore dell'obiettivo. Quindi posizionare la fotocamera e l'obiettivo nel foro praticato nel coperchio nella parte superiore del tubo che ospita il palco e le luci e collegare l'USB al computer su cui verranno registrati gli animali. Per costruire un sistema di sonno per pesci adulti, tagliare prima le strisce infrarosse a intervalli di circa 46 centimetri.
E posizionare un foglio acrilico di segno bianco 46 per cinque per 0,32 centimetri e 9%leggero direttamente davanti a ogni striscia luminosa infrarossa per diffondere la luce infrarossa. Quindi posizionare tutti i serbatoi su un rack che supporta l'illuminazione a infrarossi montata sul retro e utilizzare divisori in plastica opachi e serbatoi di vetro da 10 litri per creare arene individuali. Per registrare l'attività locomotoria del tetra pesce messicano, posizionare il giorno da quattro a sei pesci post-fecondazione in singoli pozzi di una piastra tissutale da 24 pozzi e giorni da 20 a 30 post-fecondazione in singoli pozzi di una piastra tissutale a sei pozzi.
Per registrare il sonno e l'attività tetra adulti in una casa di ambiente sociale fino a cinque adulti per serbatoio da 10 litri con o senza i divisori. In questo esperimento rappresentativo i pesci larvali di tre popolazioni indipendenti di pesci delle caverne hanno mostrato una significativa riduzione del sonno rispetto ai pesci di superficie. Questa produzione di sonno è coerente in tutte le età testate poiché il sonno è stato significativamente ridotto anche nei pesci delle caverne adulti Pachon, Molino e Tinaja rispetto ai pesci di superficie.
In particolare, l'edilizia popolare riduceva notevolmente il sonno nei pesci di superficie senza influire sul sonno nei pesci delle caverne di Pacho probabilmente a causa di un effetto seminterrato nelle popolazioni di pesci delle caverne. Durante la registrazione del pesce si deve fare attenzione a garantire che l'illuminazione della fotocamera sia ottimale per migliorare il segnale del pesce rispetto allo sfondo. Per questo protocollo è necessaria una codifica della riga di comando di base che è completamente descritta nel testo e deve essere adattabile a qualsiasi impostazione del lab.
Questo protocollo ha portato a numerose domande sull'evoluzione del sonno ed è attualmente utilizzato per schermi di farmaci, tenere traccia del comportamento del sonno e capire come il comportamento sociale influisce sul sonno.
