La stenosi venosa centrale può causare sia fistola aortocavale, sia AVF, insufficienza primaria di maturazione, così come un successivo fallimento in una fistola funzionante. Questa tecnica utilizza una versione modificata di un modello AVF murino stabilito che riassume il decorso clinico dell'AVF umano ed è facilmente padroneggiabile attraverso diversi passaggi critici. Prima di iniziare la procedura, confermare la mancanza di risposta al dito del dito in un topo C57-Black/6 di nove-11 settimane e posizionare il mouse nella posizione supina nell'area chirurgica.
Applicare un unguento agli occhi dell'animale e rimuovere la pelliccia dal lato ventrale del collo all'addome inferiore. Quindi pulire e disinfettare il sito chirurgico con tre scrub sequenziali 10%povidone-iodio e 70% isopropanolo e posizionare un drappo chirurgico sull'animale. Per l'esposizione al sito di morsetto e puntura, posizionare il mouse sotto un microscopio sezionante e, utilizzando una tecnica sterile e un bisturi, fare un'incisione addominale profonda, mediana e della pelle dal bordo inferiore del fegato a appena sopra il pube.
Tagliare la muscolatura con le forbici per aprire la cavità addominale e inserire un retrattile nell'addome. Spostare le viscere sul lato destro e avvolgerle in una garza imbevuta di salina. Spostare la vescica e le vescicole seminali sul lato caudale dell'animale e utilizzare un supporto per microneedle per sezionare il mesenterio tra il retto e il retroperitoneo per garantire una visione completa dell'aorta e della vena cava inferiore, o IVC.
Quindi utilizzare il supporto del microneedle per sezionare l'aorta infrarenale e l'IVC in blocco dai tessuti retroperitoneali circostanti lateralmente e dorsali per incrociare i tessuti e sezionare i tessuti circostanti per esporre il sito di puntura aortica a circa tre quarti della distanza dalla vena renale sinistra alla biforcazione aortica. Per l'isolamento dell'IVC, sezionare tra l'IVC infrarenale e l'aorta immediatamente distale alla vena renale sinistra ed estendere la dissezione distally a metà strada tra la vena renale sinistra e la biforcazione aortica per l'osservazione IVC infrarenale post-operatoria. Creare una finestra per separare l'IVC dall'aorta e sezionare l'IVC dal tessuto circostante.
Quindi posizionare con cura un 8-0 sutura monofilamento di poliammide sotto l'IVC e l'aorta prima di tirare l'estremità della sutura attraverso la finestra per posizionare la sutura solo sotto l'IVC. Per creare l'AVF, piega prima un ago calibro 25 con un angolo da 45 a 60 gradi a quattro millimetri dalla punta dell'ago e blocca l'aorta infrarenale e l'IVC con una clip microchirurgica. Afferrando il tessuto connettivo che circonda la biforcazione, ruotare l'aorta medialmente e caudally per esporre il sito di puntura dell'aorta leggermente allungato al lato ventrale e utilizzare l'ago calibro 25 per forare attraverso l'aorta nell'IVC.
Quando il tessuto è stato perforato, rilasciare l'aorta e tirare su dal lato sinistro dell'aorta per coprire il sito di puntura con il tessuto circostante. Quindi rimuovere l'ago e premere delicatamente il sito di puntura con un tampone con punta di cotone per l'emostasi. Per la creazione di stenosi IVC, posizionare longitudinalmente la punta di un catetere endovenoso calibro 22 sull'IVC e ligare il catetere all'IVC con un Sutura.
Una volta posizionata la sutura, rimuovere il catetere e confermare l'emostasi primaria prima di rimuovere l'aorta e l'IVC. Coprire il sito di puntura per un altro minuto per assicurarsi l'emostasi e riportare gli organi nella loro cavità addominale prima di chiudere l'addome con 6-0 suture. Quindi posizionare il mouse in una gabbia individuale senza letti su un dispositivo di supporto termico con monitoraggio fino al pieno recupero e utilizzare l'ecografia Doppler per confermare la pervietà della fistola.
Il settimo giorno dopo la procedura chirurgica, le aree della fistola e della stenosi dell'IVC sono facilmente rilevabili nella vista longitudinale. Nei topi che portano una stenosi senza AVF, il segmento della stenosi mostra una forma d'onda venosa con un allargamento più spettrale rispetto ai topi a farsa ma senza molta pulsatilità. Nei topi con AVF e stenosi, il segmento della stenosi mostra una forma d'onda pulsatile oltre all'allargamento spettrale e la velocità massima media nel tempo del flusso alla stenosi nei topi che hanno una fecondazione in vitro con stenosi è significativamente più alta che nei topi con stenosi da soli.
Il diametro medio IVC alla stenosi nei topi con stenosi da solo è simile a quello osservato nei topi con AVF e stenosi. Inoltre, utilizzando il segmento a monte o a valle come riferimento, la stenosi percentuale è significativamente maggiore nei topi con AVF oltre a una stenosi. Quando si legano insieme il catetere IV e l'IVC, è importante legarli strettamente per creare una stenosi riproducibile.
L'applicazione di questa procedura al modello di impianto di innesto venoso murino potrebbe rispondere a come superare l'occlusione della stenosi dell'innesto venoso.
