Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sui meccanismi di guarigione delle anastomosi colo-coloniche e può fornire un modello per ridurre i tassi di perdite anastomotiche e le loro conseguenze potenzialmente devastanti. La nostra tecnica offre un metodo relativamente semplice e riproducibile per eseguire anastomosi colo-colonica o colo-rettale in un modello animale con tassi di perdita clinica simili a quello dei pazienti umani. Inizia fissando gli arti di un topo anestetizzato sulla superficie chirurgica e disinfettando l'addome esposto con clorexidina.
Quindi posiziona un drappo sterile sull'animale e fai un'incisione della pelle lungo la linea mediana dell'addome inferiore fino allo xifoide. Utilizzare le forcep per sollevare la linea mediana della parete addominale e fare attenzione a non ferire le strutture intra-addominali per incidere la lunghezza della fascia addominale della linea mediana. Quando l'intestino è esposto, localizzare il cieco e l'intestino piccolo e ruotare medialmente i visceri laterali sinistro per esporre il colon discendente e sigmoide.
Quindi coprire i visceri con garza umida e sterile. Rivestire una punta della sonda smussata con gelatina lubrificante e far avanzare attentamente la sonda nel retto per aiutare l'identificazione del colon sigmoideo discendente. Una volta identificato il colon, ritirare parzialmente la sonda e utilizzare le forcep atraumatiche per afferrare delicatamente il colon sigmoide superiore all'ingresso pelvico.
Usando micro forbici affilate, fare un taglio lungo il colon sigmoideo, perpendicolare al tessuto intestinale, e che si estende dall'80 al 90% su tutta la larghezza del colon. Se un vaso sanguigno mesenterico viene ferito durante il corso della rotazione viscerale o della colotomia, applicare delicatamente pressione alla vista della lesione per un massimo di due minuti. Per riparare la colotomia sigmoide, utilizzare un driver dell'ago castroviejo e da cinque a sei semplici punti in polipropilene non assorbibili interrotti per riparare la colostomia.
Eseguire l'anastomosi al confine mesentere e raggiungere bilateralmente il confine anti-mesentere aiuta a garantire un brevetto e un'anastomosi non stenosi. Man mano che la riparazione progredisce, far avanzare la sonda di dissezione anale e smussata per coprire la riparazione prima che le suture iniziali siano posizionate per aiutare a prevenire una riparazione troppo stretta e per ridurre i tassi di rigore anastomotico. Quando tutte le suture sono state posizionate, utilizzare una siringa da 10 millilitri riempita con soluzione salina sterile riscaldata per irrigare l'addome più volte.
Durante l'irrigazione finale riempire l'addome con soluzione salina sterile e avanzare con cura un angiocatetere lubrificato da 18 gage nel retto per gonfiare il colon con 5-un centimetro cubo d'aria, per l'identificazione di una perdita all'interno dell'anastomosi. Quindi posizionare una sutura aggiuntiva per la riparazione e gonfiare nuovamente i due punti per assicurarsi che non ci siano perdite. Sgonfiare il colon con l'angiocatetere prima della rimozione e riportare delicatamente i visceri medializzati alla sua normale posizione anatomica.
Utilizzare quattro suture intrecciate assorbibili O per chiudere l'incisione addominale, con una sutura di corsa lungo lo strato muscolare della parete addominale, a partire dalla parte superiore dell'incisione e finendo all'aspetto inferiore dell'incisione. Quindi utilizzare una sutura monofilamento a quattro O per chiudere la pelle e monitorare il mouse fino a quando non si è completamente ripreso dall'anestesia. Nel punto finale sperimentale appropriato, sterilizzare l'addome con clorexidina e 70% di etanolo e utilizzare forbici affilate per re-incidere l'incisione mediana originale.
Utilizzare le forbici per tagliare lo strato muscolare ed eseguire attentamente una rotazione viscerale mediale sinistra per esporre il colon sigmoide riparato. Identificare la vista di riparazione individuando le code della sutura in polipropilene utilizzata per la riparazione. Sezionare delicatamente e senza mezzi termini qualsiasi intestino alle aderenze intestinali lontano dalla vista della riparazione, facendo attenzione a non interrompere l'anastomosi.
Utilizzare una penna di marcatura per delimitare il bordo antimesenterico dei due punti, prima della rimozione del segmento dei due punti. Successivamente, usa le forbici per trasversalmente traslict attraverso il colon discendente, a un centimetro dalla coppia, fino a un centimetro distale dalla vista dell'anastomosi. I tessuti post operatori tendono ad essere estremamente fragili e gli anelli chirurgici, nonché una manipolazione delicata e meticolosa dei tessuti, aiutano a garantire contro l'interruzione dell'anastomosi chirurgica.
Utilizzare forbici fini per sezionare bruscamente il colon dal mesenterio attaccato lungo il bordo posteriore dei due punti per rimuovere il segmento sigmoidale. E tagliare lungo la lunghezza del bordo mesenterico in modo longitudinale, per creare una sezione rettangolare di due punti dall'esemplare cilindrico precedentemente rimosso. E fare un taglio longitudinale lungo la lunghezza del colon, di fronte alla marcatura.
Quindi fissare, imbed e tagliare il tessuto campione se necessario per l'istologia e o l'immunosocienza. L'analisi istologica, sette giorni dopo l'infortunio, rivela una risposta di guarigione fibrotica, mediata da miofibroblasti positivi agli alfa muscolari lisci. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di eseguire un test di insufflazione con l'anastomosi sommersa sotto la normale soluzione salina, di confermare la persistenza dell'anastomosi e di assicurarsi che non sia presente alcuna perdita.
Questa procedura può essere eseguita su topi geneticamente modificati o patogeni con disturbi della guarigione delle ferite, come topi diabetici o immunopressi, per rispondere a domande aggiuntive sui fattori che contribuiscono a una perdita anastomotica. Seguendo questa procedura, l'immunoistochimica e la coltura cellulare possono essere eseguite da tessuto anastomotico raccolto in specifici punti di tempo dopo l'intervento chirurgico, per fornire una migliore comprensione delle cellule coinvolte e del loro ruolo nel processo di guarigione anastomotica. Non dimenticare che lavorare con Isoflurane può essere estremamente pericoloso e che le precauzioni, come l'uso di cappe di filtrazione e ventilazione del carbonio, dovrebbero sempre essere prese durante l'esecuzione di questa procedura.
