La lesione da ischemia-riperfusione è la causa principale del fallimento del lembo nella microchirurgia ricostruttiva. Questo video descrive un modello animale pre-clinico per lo studio di questa fisiopatologia. Questo modello di lembo cutaneo libero basato sui vasi epigastrici caudali superficiali nel ratto può consentire la valutazione di diverse terapie e composti per contrastare i danni correlati alle lesioni da ischemia-riperfusione.
Le ricostruzioni microchirurgiche sono ideali per un'ampia varietà di difetti. Tuttavia, queste procedure garantiscono un periodo obbligatorio di ischemia seguito dalla riperfusione. Questo periodo è solitamente ben tollerato e il tasso di successo delle procedure microchirurgiche supera il 90%Tuttavia, solo il 73,7% dei lembi che richiedono una revisione chirurgica può essere completamente sicuro.
Inoltre, in caso di reimpianto di lesioni da avulsione delle dita, il tasso di successo è di circa il 60% e nei casi di ritrasmissione di tessuti compositi, le percentuali di proiezione di lesioni da ischemia-riperfusione aumentano poiché la lesione attiva l'immunità innata. Pertanto, lo studio di questo fenomeno fisiopatico è di interesse. Per iniziare questa procedura, utilizzare un marcatore chirurgico per disegnare un lembo di tre centimetri per sei centimetri, assicurandosi che uno dei lati di sei centimetri corrisponda alla linea mediana dell'addome.
Successivamente, fai un'incisione cutanea di sei centimetri sulla linea mediana dell'addome, due incisioni perpendicolari di tre centimetri, oltre a uno di sei centimetri parallelo alla prima incisione. Per iniziare a sezionare il lembo della pelle designato, utilizzare forbici e forcep Adson per sollevare il lembo. Tirare delicatamente il lembo dalla zona cranici verso l'area caudale.
Sezionare il pedicolo del lembo senza toccarlo o afferrando l'adventitia il meno possibile per evitare di danneggiare la parete del vaso. Utilizzare 8-0 suture di nylon per occludio da legature i vasi safenosi, i vasi femorali circonflessi laterale e i vasi femorali caudali prossimali. Bloccare il pedicolo vascolare e quindi tagliarlo per iniziare il periodo di ischemia di otto ore.
Utilizzare una soluzione salina eparinizzata per perfondere il lembo, quindi rimuovere il sangue stagnante dal microcircolo. Utilizzare 10-0 suture in nylon per eseguire le anastomosi microchirurgiche. Dopo otto ore di ischemia, riperfondare il lembo rimuovendo i morsetti microvascolari e controllare la permanenza vascolare.
In primo luogo, valutare il flusso sanguigno utilizzando un flussometro ad ultrasuoni in tempo di transito e sonde microchirurgiche. Posizionare il contenitore di destinazione nella finestra di rilevamento ad ultrasuoni della sonda di flusso per quantificare il volume del flusso. Quando si ottiene un buon accoppiamento e la nave viene posizionata nella finestra acustica senza alcuna tensione, fare clic sul pulsante di registrazione sul display per memorizzare i dati.
Dopo questo, utilizzare 4-0 suture assorbibili per chiudere la pelle. Per valutare il microcircolo del lembo, utilizzare l'analisi del contrasto della macchie laser. Crea una nuova registrazione per ogni campione e per ogni studio di follow-up cliccando sul file, nuova registrazione.
Si aprirà una nuova finestra che visualizza il pannello di configurazione. In questo caso, modificare le informazioni relative al nome del progetto, all'oggetto, all'operatore e al nome della registrazione. Regolare la distanza di lavoro spostando il laser in relazione al tessuto.
Ingrandire la testa laser verso il tessuto di interesse. Nella configurazione dell'immagine, standardizzare l'area di misurazione immettendo la larghezza e l'altezza desiderate. Impostare la densità del punto su alta.
Durante la configurazione dell'acquisizione dell'immagine, selezionare la frequenza fotogrammi e la durata della registrazione. Quindi, fare clic sul pulsante registra per avviare la registrazione. Il pannello di configurazione viene sostituito dal pannello di registrazione e i dati vengono salvati automaticamente.
Scatta istantanee durante la procedura per consentire un ulteriore confronto. Successivamente, utilizzare il software ImageJ per misurare le aree di sopravvivenza e necrosi posizionando prima un righello nel sito del lembo e scattando foto di controllo per la misurazione macroscopica. Nella casella degli strumenti ImageJ selezionare linea retta e disegnare una linea su un centimetro del righello.
Fare clic su analizza, impostare la scala e nella casella di testo per la distanza nota immettere il valore di un centimetro. Fate clic sullo strumento di selezione poligonale e disegnate le linee poligonali sul lembo per calcolare l'area vitale. Clicca su analizza, misura per ottenere il valore dell'area.
Quindi, posizionare una medicazione postoperatoria sull'animale prima dell'alloggiamento per prevenire l'automutilazione. Sette giorni dopo l'intervento, fotografare l'area chirurgica per consentire misurazioni macroscopiche delle aree di sopravvivenza e necrosi del lembo. Utilizzando la tecnica di analisi del contrasto speckle laser precedentemente descritta, visualizzare e quantificare le differenze di perfusione per valutare il microcircolo del lembo.
Dopo l'analisi macroscopica, rimuovere le suture 4-0, sollevare il lembo e utilizzare gli ultrasuoni transit-time per rivalutare il flusso sanguigno del pedicolo vascolare. Eseguire il campionamento dei tessuti dividendo longitudinalmente il lembo in due parti che misurano 1,5 centimetri per sei centimetri. Subito dopo la creazione delle anastomosi microchirurgiche, abbiamo ottenuto valori di flusso sanguigno più elevati rispetto ai flussi minimi raccomandati in letteratura.
Pertanto, tutte le anastomosi microchirurgiche erano brevettate una settimana dopo l'intervento chirurgico. L'osservazione della depravazione microcircolatoria del flusso sanguigno durante l'insulto ischemico è stata possibile con la tecnica di analisi del contrasto delle macchie laser. Ciò include l'iperperfusione immediata durante la riperfusione del lembo e, perioperatoriamente, le diverse aree con meno perfusione avevano un rischio più elevato di necrosi postoperatoria del lembo che erano effettivamente necrotizzate sette giorni dopo la fine dello studio.
L'area di sopravvivenza del lembo dopo otto ore di ischemia e la sua successiva riperfusione è stata di circa il 40%I risultati pubblicati in precedenza mostrano differenze statisticamente significative quando questo modello viene confrontato con lembi in cui non viene inflitto alcun insulto ischemico. Ricordarsi di sezionare il pedicolo del lembo senza toccarlo o afferrando l'adventitia il meno possibile per evitare di danneggiare la parete del vaso, nonché eseguire corretta anastomosi microchirurgiche al fine di evitare complicazioni dovute alla tecnica chirurgica. In modo intraoperatorio, la tecnologia ad ultrasuoni transit-time ci consente di quantificare il flusso sanguigno delle anastomosi microchirurgiche e quindi prevedere la perfusione del lembo.
Postoperatoriamente, l'analisi del contrasto delle macchie laser consente una semi-continuità della mappatura in tempo reale del flusso all'interno di lembi liberi. Si tratta di una tecnica promettente, tuttavia sono necessarie ulteriori ricerche. Questo video ha descritto il protocollo di un modello adatto per valutare gli agenti terapeutici per contrastare la lesione da ischemia-riperfusione nel campo della microchirurgia ricostruttiva.
