Inizia indossando una maschera, una copertura per capelli e un camice o un camice da laboratorio pulito. Successivamente, posizionare il topo anestetizzato su una superficie pulita separata dall'area chirurgica e adattarlo con un cono nasale che eroga l'1,5% di isoflurano con il 21% di ossigeno. Quindi iniettare buprenorfina per via sottocutanea nella zona toracica cervicale dorsale.
Iniettare anche eparina per via intraperitoneale per prevenire la formazione di trombi durante il periodo di occlusione. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per prevenire danni alla cornea e rimuovere i peli dall'addome ventrale utilizzando un tagliacapelli. Sposta il mouse sulla coperta d'acqua riscaldata nell'area chirurgica.
Ancora una volta, montalo con un cono nasale che rilascia isoflurano. Successivamente, posizionare il topo in decubito dorsale e fissare gli arti al tavolo con del nastro chirurgico. Monitorare la temperatura corporea dell'animale utilizzando un termometro rettale specifico per roditori.
Dopo aver disinfettato accuratamente l'addome, eseguire un test di pizzicamento delle dita dei piedi per assicurarsi che l'animale sia completamente anestetizzato. Infine, indossare guanti sterili e drappeggiare in modo asettico il sito chirurgico. Innanzitutto, fai un'incisione addominale ventrale da tre a cinque centimetri sulla linea mediana nella pelle usando una lama di bisturi numero 15.
Separare 0,5 centimetri del bordo della pelle dalla fascia muscolare sottostante per consentire il posizionamento delle graffette in un secondo momento. Quindi continuare l'incisione attraverso la parete addominale lungo l'alba lineare utilizzando microforbici a molla e posizionare un divaricatore. Posizionare garze sterili inumidite con soluzione salina sterile calda intorno all'area operatoria.
Rimuovere l'intestino tenue dalla cavità addominale. Capovolgilo cranialmente e alla sinistra dell'animale e posizionalo sui cuscinetti inumiditi. Metti un'altra garza inumidita sui tessuti per evitare l'essiccazione.
Localizzare l'arteria mesenterica superiore, o SMA, ventrale alla vena cava inferiore, caudale all'arteria celiaca e craniale all'arteria renale. Sezionarlo lontano dal tessuto connettivo circostante. Posizionare una clip microvascolare atraumatica lungo la base della SMA nel punto in cui si dirama dall'aorta addominale.
Verificare l'ischemia dell'intestino tenue notando il cambiamento di colore dal rosa al bianco pallido. Riportare i visceri nella loro posizione originale all'interno della cavità addominale per tutta la durata del periodo ischemico. Rimuovere il divaricatore e coprire l'incisione con una garza umida.
Dopo un periodo di ischemia di 45 minuti, rimuovere la clip occludente. Verificare il ripristino del flusso sanguigno osservando una pulsazione mesenterica e un colore arrossato. Applicare soluzione salina sterile calda per via intraperitoneale per mantenere un'adeguata idratazione.
Quindi chiudere i muscoli addominali con una sutura 6-0 polyglactin 910. Somministrare bupivacaina per via topica lungo la linea di incisione muscolare per alleviare il dolore. Chiudere la pelle con graffette chirurgiche o clip per ferite.
Rimetti il topo in una camera calda su una coperta d'acqua circolante. Lascia che il topo si riprenda per 90 minuti e monitora il topo per segni di dolore o angoscia. Dopo aver eseguito l'eutanasia umana, raccogliere i tessuti desiderati come i lobi del fegato, compresi i lobi laterale sinistro, mediano sinistro e mediano destro.
Quindi raccogli entrambi i reni. Tagliare longitudinalmente il rene sinistro e il rene destro come sezione trasversale. Infine, raccogli l'intera lunghezza dell'intestino tenue e crasso.
Per dividere i segmenti dell'intestino tenue in sezioni di uguale lunghezza, piegare l'intestino tenue a forma di Z in cui la linea superiore è il duodeno, la linea centrale è il digiuno e la linea inferiore è l'ileo. La restante parte dell'intestino è il colon. Sciacquare il lume dei segmenti intestinali con soluzione fisiologica utilizzando una siringa da 10 millilitri fissata con un angiocatetere calibro 20.
Quindi, taglia la lunghezza dell'intestino usando le forbici da micro dissezione e appoggia ogni segmento intestinale in piano con il lato luminale rivolto verso l'alto. Utilizzando una siringa da tre millilitri fissata con un ago calibro 27, applicare generosamente formalina tamponata al 10% goccia a goccia per rivestire l'intera lunghezza della mucosa. Quindi arrotolare ogni segmento circonferenzialmente attorno a uno stuzzicadenti, assicurandosi che la porzione prossimale formi la parte interna del rotolo e che il lume sia rivolto verso l'interno.
Dopo il rotolamento, l'intestino dovrebbe assomigliare a un rotolo svizzero. Posizionare la spirale del singolo rotolo svizzero rivolta verso l'alto all'interno delle cassette di tessuto etichettate separate. Infine, posizionare i fazzoletti in fiale etichettate riempite con formalina tamponata al 10% per fissarli a temperatura ambiente.
Dopo IRI intestinale, la colorazione H&E del digiuno e dell'ileo dei topi del gruppo sham ha mostrato villi lunghi e sottili senza distorsioni. Mentre le sezioni dei topi del gruppo IRI mostravano aree di necrosi ed emorragia con ottundimento e distorsione dei villi rimanenti. Inoltre, il danno microscopico a tutti e tre i segmenti intestinali tenue per gli animali sottoposti a IRI è stato significativamente aumentato rispetto a quelli sottoposti a laparotomia fittizia.
