La privazione visiva monoculare è un eccellente protocollo sperimentale per indurre la plasticità della risposta corticale visiva primaria. Normalmente, i neuroni nel segmento binoculare della corteccia visiva primaria nel topo rispondono circa il doppio della stimolazione dell'occhio contralaterale rispetto all'occhio ipsilaterale. Tuttavia, suturando chiuso l'occhio contralaterale durante il periodo critico per la plasticità dominanza oculare si traducono nella rapida perdita di reattività da parte dei neuroni V1 alla stimolazione oculare contralaterale e anche seguita da un successivo aumento della risposta all'occhio ipsilaterale.
Qui, introduciamo il protocollo sperimentale per la deprivazione monoculare e suggeriamo un metodo comunemente usato per analizzare la tendenza nella dominanza oculare durante la privazione visiva. Metti gli strumenti chirurgici in una scatola di alluminio e autoclavati sotto i 120 gradi centigradi per mezz'ora. Preparare la soluzione di agarosio al 2% nel bollitore per il bagno d'acqua e mantenerla a 75 gradi centigradi.
Applicare un sottile strato di unguento per gli occhi su entrambi gli occhi. Al microscopio anatomico con illuminazione, suturare le palpebre. Fai circa quattro punti.
Creare da due a tre nodi del thread. Applicare tre microlitri di colla ad asciugatura istantanea 502 sulla testa del nodo per aumentare la stabilità del nodo. Quindi tagliare il filo abbastanza corto.
Quando il topo è completamente sveglio, posizionalo in una gabbia di attesa separata. Prima della registrazione elettrofisiologia, utilizzare l'isoflurane per anestetizzare il mouse. Rimuovere i punti ed esporre il bulbo oculare.
Tagliare con cura la palpebra. Lava gli occhi con soluzioni di lenti a contatto e controlla gli occhi per chiarezza. È possibile utilizzare solo il mouse con buone condizioni dei bulbi oculari.
Dopo aver anestetizzato il mouse, posizionare il mouse su una cornice stereotassica. Utilizzare una pastiglia riscaldante per mantenere la temperatura corporea durante tutta la procedura. Applicare l'unguento per gli occhi sulla superficie degli occhi per mantenerlo umido.
Rimuovere i capelli del mouse per esporre la sua pelle. Incidere un otto millimetri moltiplicato per otto millimetri di area della pelle tra entrambe le orecchie per esporre il cranio e rimuovere il tessuto del cuoio capelluto. Quindi rimuovere il tessuto connettivo sovrascriente con perossido di idrogeno.
Praticare un buco nel cranio sopra il cervelletto. Fissare una piccola vite ossea nel foro come riferimento. Eseguire una piccola craniotomia di un millimetro di diametro nella regione binoculare V1.
Rimuovere con cura il frammento di cranio senza ferire il cervello. Coprire la superficie corticale esposta con il 2%di agarosio per evitare l'essiccazione. Fissare un elettrodo di tungsteno sul telaio stereotassico.
Posizionare l'elettrodo di tungsteno verticalmente sulla regione V1 binoculare per assicurarsi che le cellule registrate reagiscano a entrambi gli occhi. Lo stimolo è separato di 30 gradi in un blocco casuale. In ogni misurazione sono stati presentati da tre a cinque blocchi.
Maschera un occhio con una piastra di plastica non trasparente. Presenta LCD1 da posizionare in 23 centimetri dagli occhi del mouse. Far avanzare lentamente il microelettrodo dal micromanipolatore idraulico dell'olio.
Interrompere l'avanzamento segnale ad alto rapporto di rumore del segnale quando l'elettrodo è avanzato allo strato quattro e iniziare la misurazione. Amplificamo le attività di spike a un fattore 1.000 e lo filtriamo da 300 a 10 kilohertz e poi lo assaggiamo a 40 kilohertz. Quindi mascherare l'altro occhio e misurare la risposta dell'occhio contralaterale.
I segnali misurati da singoli elettrodi sono attività della popolazione. Utilizzare il software per separare picchi di celle diverse. Per prima cosa, filtra il segnale da 500 a 5.000 hertz.
Impostare due cursori, uno per la deflessione positiva e uno per i picchi di deflessione negativi. Configurare i modelli di picco. Impostare l'area dei modelli in cui viene visualizzata la variazione maggiore tra le diverse classi di picchi.
Utilizzare l'analisi dei componenti principali per separarli in cluster. Classificare i picchi di un limite usando l'algoritmo K means. Correlare l'orientamento con la velocità di fuoco a picco e tracciare le curve di regolazione dell'orientamento per gli occhi ipsilateri e contralaterali.
Quindi calcolare l'indice OD per le singole celle che rappresenta la risposta contralaterale e ipsilaterale Assegnare un punteggio OD per ogni cella in base all'indice OD. Calcolare l'indice di distorsione contralaterale in base alla formula. Questo diagramma mostra le curve di regolazione dell'orientamento dell'occhio ipsilaterale e contralaterale nel topo monocolare privato e non privato.
Questo protocollo consente di avere successo nella privazione visiva monoculare e nella misurazione della dominanza oculare da un topo privato e non privato in un periodo critico. Vi abbiamo appena mostrato come realizzare questo esperimento e abbiamo analizzato il cambiamento del dominio oculare durante la privazione visiva. Durante l'esperimento, è importante evitare l'infezione nel processo di sutura e l'interazione durante la registrazione elettrofisiologia.
Grazie per aver guardato il nostro video.
