Questo modello di emorragia subaracnoidea ci aiuta a comprendere meglio i meccanismi fisiopatologici e le conseguenze. Si spera che ciò si traduca nella generazione di terapie, riducendo l'onere della malattia nei pazienti afflitti. Il principale vantaggio di questa tecnica è la sua altamente riproducibile, poiché viene iniettata una quantità fissa di sangue.
Inoltre, assomiglia a un'emorragia subaracnoidea umana nei parametri chiave. Per realizzare la sonda ICP, bruciare un'estremità di un tubo di polietilene da 20 millimetri, creando una piastra circolare e mantenendo aperto il lume. Quindi far scivolare un anello di tubo in silicone di un millimetro sul tubo in polietilene prima di collegare un pezzo di tubo in silicone da 10 millimetri all'estremità del tubo in polietilene.
Successivamente, anestetizzare, intubare e cateterizzare un ratto Sprague Dawley prima di posizionarlo in una cornice stereotassica. Dopo la somministrazione di anestesia locale, effettuare un'incisione cutanea di otto millimetri caudalmente dalla puntura dell'ago nella linea mediana. Sotto un microscopio da dissezione, sezionare tutti i muscoli senza mezzi termini a strati per identificare la membrana atlantooccipitale.
Quindi utilizzare il divaricatore del braccio per trattenere la muscolatura del collo, posizionando il riavvolgitore caudalmente se necessario. Dopo aver verificato che la sonda ICP sterile sia collegata al trasduttore ICP, lavare la sonda ICP con soluzione salina, assicurandosi che non vi siano bolle d'aria nella sonda. Utilizzando un ago di calibro 23, incidere la membrana atlanto-occipitale, praticando un foro per indurre delicatamente la sonda ICP attraverso la membrana.
Tirare leggermente la sonda e assicurarsi che mostri una curva pulsante compresa tra zero e cinque millimetri di mercurio. In caso contrario, rimuovere la sonda, ricontrollare la connessione al trasduttore e confermare il flusso attraverso il lume. Nell'area in cui la membrana atlantooccipitale avvolge la sonda, applicare due gocce di colla tissutale.
Quindi spostare il tubo di silicone di un millimetro in avanti verso la membrana, prima di applicare ulteriore colla per ridurre al minimo il rischio di spostamento della sonda ICP. Una volta incollata la sonda ICP, rimuovere il riavvolgitore. Quindi, utilizzando una sutura monofilamento 4-0 non riassorbibile, posizionare una sutura orizzontale del materasso all'estremità caudale dell'incisione e una semplice sutura interrotta all'estremità cefalica.
Per posizionare la sonda laser-doppler, praticare un'incisione caudale di 15 millimetri nella linea mediana, iniziando appena anteriormente agli occhi. Dopo aver rimosso il tessuto connettivo e i muscoli con una pinza, utilizzare l'estremità di un batuffolo di cotone sterile come rougine per identificare il bregma e le suture coronali. Dopo aver posizionato il divaricatore armato, posizionare un ago spinale di calibro 25 nel telaio stereotassico esattamente sul bregma e annotare la posizione.
Quindi, rimuovere l'ago dal bregma. Spostare il fotogramma anteriormente di 6,5 millimetri. Quindi sostituire l'ago nella linea mediana per contrassegnare il lato della perforazione.
Perforare fino a quando la dura madre non viene identificata sotto l'osso. Usando una pinza dritta, rimuovere delicatamente i frammenti ossei. Quindi riempire la cavità con cera ossea.
Successivamente, tre o quattro millimetri lateralmente a destra del bregma e appena anteriormente alla sutura coronale per il laser-doppler, praticare un altro foro. Facendo attenzione a non penetrare nella dura madre. Cerca i vasi in cui il laser-doppler può misurare il flusso sanguigno.
Posizionare il laser doppler e controllare i valori. È richiesto un valore minimo di 100 unità di flusso. Se i valori rimangono accettabili dopo aver rimosso il microscopio, aggiungere una goccia di colla per fissare la sonda.
Ricontrollare per confermare se il valore è superiore a 80 unità di flusso. Per indurre l'emorragia subaracnoidea, inserire delicatamente l'ago attraverso il cranio nella linea mediana tra gli emisferi fino a quando non si avverte resistenza a causa della base del cranio. Ritrarre l'ago di un millimetro per garantire il corretto posizionamento appena anteriormente al chiasma ottico.
Per garantire il risultato più omogeneo durante l'iniezione del sangue, ruotare l'ago in senso orario di 90 gradi in modo tale che la punta dell'ago punti verso destra. Quindi rimuovere lo stiletto. Dopo un equilibrio di 15 minuti, regolare il livello di anestesia per ottenere una pressione arteriosa media nell'intervallo da 80 a 100 millimetri di mercurio.
Quindi eseguire un'analisi dei gas del sangue per confermare che il pH, la pressione parziale dell'anidride carbonica e la pressione parziale dell'ossigeno rientrano nei parametri fisiologici. Successivamente, utilizzando una siringa da un millilitro con un ago smussato da 23 gauge, prelevare 500 microlitri di sangue dal catetere di coda. Per evitare l'iniezione di aria, riempire lo spazio morto della camera dell'ago spinale con sangue.
Dopo aver regolato il volume del sangue nella siringa a 300 microlitri, collegare la siringa all'ago spinale. Quindi, afferrando saldamente la siringa, iniettare il sangue manualmente per superare la pressione arteriosa media. Osservare un forte aumento della pressione intracerebrale e una concomitante forte caduta del flusso sanguigno cerebrale.
30 minuti dopo l'induzione dell'emorragia subaracnoidea, rimuovere l'ago e la sonda laser-doppler. E riempi le cavità con cera ossea. Utilizzando una sutura monofilamento 4-0 non riassorbibile, chiudere l'incisione con due suture orizzontali del materasso.
Per utilizzare la sonda ICP per iniezioni nella cisterna magna, rimuovere il tubo in silicone e inserire un adattatore per porta pin al tubo in polietilene. Per eseguire una somministrazione intratecale mentre l'animale è sveglio, posizionare un iniettore con porta pin su una siringa di precisione. Quindi somministrare il trattamento tramite l'adattatore della porta pin.
Se non è necessario eseguire somministrazioni intratecali, tagliare la semplice sutura interrotta. Quindi, usando le forbici, accorciare il più possibile la sonda ICP e incollare l'estremità per evitare perdite di liquido cerebrospinale. Chiudere l'incisione con una sutura monofilamento 4-0 non assorbibile.
Nella valutazione della funzione motoria sensoriale grossolana utilizzando il test del polo rotante, i ratti con emorragia subaracnoidea indotta sperimentalmente hanno ottenuto risultati significativamente peggiori 24 e 48 ore dopo l'intervento chirurgico rispetto agli animali finti. La sensibilità all'endotelina-1, un agonista per la famiglia dei recettori dell'endotelina-1, è aumentata significativamente due giorni dopo l'emorragia subaracnoidea nelle arterie cerebrali basilari e medie dei ratti sperimentali rispetto a quelle dei controlli fittizi. Entrambe le arterie dei ratti sperimentali hanno anche mostrato un simile aumento della sensibilità alla 5-carbossamidotryptamina, un agonista per la famiglia dei recettori 5-idrossitriptamine.
Seguendo la procedura, i test neurocomportamentali e l'analisi dei tessuti tra cui immunoistochimica, PCR, analizzatore western blotting possono essere eseguiti per analizzare conseguenze e meccanismi.
