Forniamo un protocollo per stabilire un'emorragia pontina massiccia in un topo. Questo modello è facile da stabilire, ripetibile e di grande successo. L'iniezione distillata di metodo autologo del ratto potrebbe essere utilizzata per fare emorragia in una qualsiasi delle regioni cerebrali.
Le persone che vogliono provare queste tecniche dovrebbero imparare a usare una cornice stereotassica ed avere familiarità con l'anatomia pontina. Inizia posizionando un drappo chirurgico sul topo. Fai un'incisione con un bisturi lungo la linea mediana marcata.
Utilizzare un batuffolo di cotone per rimuovere qualsiasi potenziale sangue. Quindi posizionare un pezzo di forcep su ciascun lato del lembo del cuoio capelluto per esporre il cranio. Immergere un batuffolo di cotone nello 0,9% di soluzione salina e rimuovere delicatamente i tessuti connettivi dall'osso cranica.
Utilizzare una penna marcatore per contrassegnare il punto centrale del bregma come punto di origine. Eseguire una craniotomia utilizzando un micro trapano, procedendo con attenzione. Al termine rimuovere il micro trapano dal telaio stereotassico.
Mettere una siringa Hamilton da 100 microliter nel supporto stereotassico. Accendere l'interruttore della pompa di iniezione. Fare clic sul pulsante di inalazione rapida.
Quindi aspirare la soluzione di eparina a 100 microlitri e scaricarla completamente. Applicare la clorexidina e lo scrub chirurgico al 75% di alcol su tutto il racconto dalla radice alla punta almeno tre volte per disinfettare la pelle, ammorbidire l'horniness e dilatare la vena della coda per aumentare il tasso di successo dell'iniezione. Attaccare un'agopuntura del cuoio capelluto a una siringa millilitro, quindi inserire l'agopuntura del cuoio capelluto in una vena laterale della coda a tre centimetri dalla punta della coda e assumere 150 microlitri di sangue.
Rimuovere l'agopuntura del cuoio capelluto dalla siringa da un millilitro e trasferire il sangue in un tubo. Lavorare rapidamente per prevenire la coagulazione del sangue. Cambia i guanti chirurgici.
Selezionare la modalità di ritiro. Impostare il volume su 100 microlitri e impostare la velocità su 200 microlitri al minuto. Fare clic sul pulsante di corsa e aspirare 100 microlitri di sangue nella siringa Hamilton.
Passare alla modalità infuso e impostare la velocità su un microliter al minuto. Far avanzare la siringa fino a raggiungere i 9,2 millimetri sotto la superficie del cervello e iniettare i primi 10 microlitri di sangue. Clicca sul pulsante esegui.
Interrompere l'iniezione e lasciare la siringa in posizione per 20 minuti per evitare che il sangue flui nello spazio subaracnoideo. Ritrarre la siringa fino a quando la punta arriva a nove millimetri sotto la superficie del cervello, quindi riavviare l'iniezione alla stessa velocità di un microlitro al minuto fino a quando il sangue residuo non è stato iniettato completamente. Lasciare la siringa in posizione per 10 minuti per evitare il riflusso sanguigno.
Rimuovere lentamente la siringa dal cervello. Quindi utilizzare cemento osseo per coprire il foro di craniotomia. Quando il cemento asciuga la sutura la ferita con un filamento di sutura di poliammide a quattro zero.
Dopo aver cucito tre o quattro punti legare 2 nodi chirurgici standard uno-uno. Osservare il topo ogni 15 minuti fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia, quindi restituirlo alla gabbia originale con una pastiglia riscaldante sotto. Fornire al topo libero accesso a cibo e acqua.
Un totale di 25 animali sono stati utilizzati per il controllo di 30 microliter, 60 microliter e 100 iniezioni di sangue di microliter. I test comportamentali sono stati condotti nei giorni uno, tre, sette e 14 dopo l'intervento chirurgico. L'emorragia pontina causò deficit neurologici come un riflesso corneale diminuito e un cerchio.
L'iniezione di 100 microlitri di sangue ha anche indotto la miotonia. La risonanza testurica è stata eseguita 24 ore dopo l'intervento chirurgico. Nei gruppi di iniezione di sangue, l'emorragia è stata rilevata come un bordo di ipointense con un nucleo ISO a leggermente iperintense nella parte basiler degli stagni.
Il volume dell'emorragia è aumentato con il volume dell'iniezione. I ratti sono stati sacrificati a 24 ore e 14 giorni dopo l'intervento chirurgico. E sono state realizzate due sezioni spesse due millimetri.
È stata rilevata un'emorragia che circonda il sito di iniezione e si distribuisce nella base degli stagni. C'è stato un leggero edema intorno all'emorragia nel gruppo di iniezione di sangue da 100 microliter. Alcuni ratti sono stati sacrificati tre giorni dopo l'intervento chirurgico e le sezioni di paraffina sono state fatte per la colorazione HE.
I risultati hanno mostrato che nei gruppi di iniezione del sangue le cellule infiammatorie arricchite nella zona di para emorragia l'emoglobina è rimasta contenuta con globuli rossi intatti. Quando si tenta questo protocollo assicurarsi di ricordare la posizione di iniezione. Questo metodo può essere utilizzato per indurre un'emorragia in qualsiasi specifica regione cerebrale.
