La ricerca a lungo termine e l'uso di un agente di biocontrollo dipendono dalla disponibilità di tecniche di allevamento efficaci ed economiche, e questo protocollo si è dimostrato efficiente per l'allevamento di questo parassitoide. Attualmente c'è un enorme interesse nell'allevamento di questo parassitoide per la ricerca o il rilascio sul campo, e il protocollo andrà a beneficio della futura ricerca a lungo termine e dell'uso di questo promettente agente di biocontrollo. I primi utenti potrebbero aver bisogno di comprendere alcune biologie di base degli insetti coinvolti attraverso la lettura dei riferimenti pertinenti forniti nell'articolo e alcune pratiche dei metodi.
Per fare la dieta ospite, in primo luogo, preparare la parte liquida della dieta come descritto nel manoscritto. Quindi, aggiungere da 25 a 30 grammi di purè di mirtilli in un pallone vuoto da 250 millilitri. Quindi, versare il liquido nel pallone con il liquido che copre solo la parte superiore del purè di mirtilli.
Successivamente, per allevare l'ospite Drosophila suzuki, prima tagliare un pezzo di tovagliolo di carta assorbente e ruotarlo al centro. Quindi, posizionare la sezione centrale contorta del tovagliolo di carta nel pallone dietetico. Per trattenere l'umidità, utilizzare acqua distillata per bagnare il tovagliolo di carta e la dieta.
Quindi, per trasferire mosche adulte sessualmente mature, rimuovere con cura il tappo di una fiaschetta della colonia di mosche e invertirlo nel pallone dietetico. Dopo una settimana di questa esposizione, tenere le mosche in una camera ambientale per tre settimane per l'emergenza della mosca. Per esporre la larva ospite ai parassitoidi, rimuovere prima le mosche adulte e il tovagliolo di carta dal pallone, lasciando le uova e le larve della mosca.
Per fungere da substrato di pupa per le larve, piegare un nuovo tovagliolo di carta assorbente e inserirlo nel pallone. Quindi aspirare sei coppie femminili e maschili del parassitoide G3 Ganaspis brasiliensis nel pallone e strisciare un sottile strato di miele sul fondo del tappo di schiuma. Per raccogliere e conservare i parassitoidi, rimuovere gli adulti dopo cinque giorni.
Quindi conservare il pallone nella camera ambientale per 35 giorni nelle condizioni menzionate in precedenza. Con l'emergere di vespe adulte, aspirarle tre volte a settimana. Per tenere le vespe, prima posizionare un tovagliolo di carta inumidito ma non saturo di acqua distillata sul fondo di una fiala di Drosophila di 2,5 per 9,5 centimetri quadrati.
Quindi, trasferire circa 60 vespe alla fiala e segnare la data di emergenza. Conservare il flaconcino nella camera ambientale. Due volte a settimana, strisciare un sottile strato di miele sul fondo del tappo di schiuma delle fiale.
In primo luogo, organizzare l'allevamento su larga scala di Drosophila suzuki posizionando da 1.500 a 2.000 mosche adulte sessualmente mature con un rapporto sessuale 50: 50 in una grande gabbia a maglia coperta di rete. Quindi, posizionare un piatto con cotone imbevuto d'acqua e da quattro a sei piastre di Petri con mezzo Standard Drosophila nella gabbia. Due volte alla settimana, sostituire le piastre di Petri esposte con quelle fresche.
Metti ogni capsula di Petri infestata senza coperchio in un bicchiere di plastica da 800 millilitri e copri la tazza con una rete sottile. Quindi, incubare le tazze a 23 gradi Celsius e 75% di umidità relativa per 12-15 giorni. Dopo l'incubazione, trasferire Drosophila suzuki adulta appena schiusa in una gabbia di allevamento.
Quindi, iniziare a preparare le larve ospiti risciacquando i mirtilli in acqua fredda per un minuto e immergere i frutti in una bacinella piena di una soluzione di candeggina, diluita al 5% per tre minuti. Quindi, riempire le piastre di Petri di nove centimetri con i mirtilli lavati. Nelle ore del tardo pomeriggio, metti le piastre di Petri nella gabbia di allevamento e lasciale durante la notte.
La mattina dopo, picchietta delicatamente le piastre di Petri per rimuovere le mosche dai frutti e rimuovere i frutti dalla gabbia di allevamento. Nel frattempo, prepara una gabbia per parassitismo e una gabbia di emergenza per vespa per il parassitoide G1 Ganaspis brasiliensis. Entrambe le gabbie dovrebbero avere una corda sottile sotto il soffitto per sospendere uno o più alimentatori.
In ogni gabbia, sospendere una fiala di Drosophila contenente acqua e sigillare con un tappo di acetato di cellulosa capovolto dal soffitto ogni cinque-sette giorni, a seconda dell'umidità relativa. Subito dopo aver estratto i mirtilli infestati dalla gabbia di Drosophila suzuki, mettili nella gabbia del parassitismo con 1.500-2.000 vespe Ganaspis brasiliensis per due o tre giorni. Quindi, raccogliere i frutti in un bicchiere di plastica da 800 millilitri con carta assorbente sul fondo.
Incubare la tazza aperta nella gabbia di emergenza o di eclosione a 21 gradi Celsius e 65% di umidità relativa per almeno 28 giorni. Durante la seconda e la terza settimana di incubazione, controllare settimanalmente la gabbia per l'eclosione precoce dell'ospite. Per facilitare la successiva raccolta di parassitoidi, rimuovere le mosche adulte.
Alla fine della quarta settimana di incubazione, fornire un alimentatore e una fonte d'acqua alla gabbia. Raccogli circa il 10-15% delle vespe adulte e trasferiscile nella gabbia del parassitismo per sostituire le vespe vecchie e improduttive. Dalle vespe rimanenti della gabbia di eclosion, conservare fino a 700 adulti con un rapporto di 50:50 tra i sessi con un bicchiere di plastica da 800 millilitri contenente un tubo da due millilitri riempito d'acqua e sigillato con un rotolo di cotone dentale sul fondo della tazza.
Conservare la tazza con un marcato stato di emergenza in una camera ambientale per un massimo di un mese. Per la spedizione di parassitoidi, posizionare circa 200 adulti in un tubo conico da 50 millilitri. Quindi, metti tutti i tubi in un contenitore di spedizione isolante insieme a impacchi di ghiaccio.
Questo protocollo ha portato al successo dell'allevamento su piccola scala di G3 Ganaspis brasiliensis, un agente parassitoide, contro il parassita agricolo Drosophila suzuki in laboratorio. La produzione di prole non è stata influenzata dalle differenze nella densità dei parassitoidi e nel tempo di esposizione. È stato inoltre possibile ottenere la generazione su larga scala di G1 Ganaspis brasiliensis, con la produzione che inizia cinque settimane dopo l'esposizione iniziale all'ospite Drosophila suzuki.
Dalla settimana 8 alla settimana 22, la produzione di parassitoidi è diventata proporzionale alla quantità di frutta esposta a loro. È di fondamentale importanza mantenere una temperatura di allevamento adeguata, controllare l'umidità e fornire sempre cibo per gli insetti adulti. I metodi potrebbero essere ulteriormente migliorati ottimizzando le densità di allevamento di ospiti e parassitoidi per massimizzare la riproduzione delle vespe ed esplorando la possibilità di allevare questo parassitoide su ospiti alternativi.
