Questa nuova tecnica di banding aortico consente l'induzione dell'ipertrofia cardiaca da sovraccarico di pressione nei topi con minore varianza e maggiore riproducibilità. Il posizionamento di un anello di gomma con un diametro fisso attorno all'aorta induce un aumento costante della velocità del flusso nell'aorta trasversale, generando così ipertrofia cardiaca riproducibile. Questa procedura dovrebbe essere eseguita da qualcuno che ha già esperienza con l'anestesia e le tecniche di microchirurgia nei roditori, o ha qualcuno con esperienza che può guidare.
Inizia eseguendo un taglio dell'O-ring al microscopio usando le forbici o un bisturi per consentire il posizionamento intorno all'aorta. Forare ogni lato dell'anello vicino al taglio con un ago collegato con un 8-0 sutura non assorbibile e tirare il filo. Tagliare e lasciare due o tre centimetri su un lato e due centimetri sull'altro lato per fissare l'O-ring attorno all'aorta nella fase finale.
Prima dell'intervento chirurgico, prendere l'aiuto di legatura e tirare l'estremità del filo di un lato dell'anello attraverso il foro dell'aiuto di legatura. Mettere da parte l'aiuto di legatura con l'O-ring attaccato per il posizionamento. Rasare la pelliccia sul lato torace sinistro del topo anestetizzato.
Quindi riposizionare il topo nella camera riempita di isoflurano per una sedazione sufficiente prima dell'intubazione. Accendere la piastra elettrica prima dell'intervento chirurgico per mantenere la temperatura corporea dell'animale a 37 gradi Celsius. Collegare il termoforo a una sonda rettale per mantenere automaticamente la temperatura corporea del mouse.
Allungare un elastico attorno alla piastra riscaldante per fissare il mouse con i denti anteriori sulla piastra. Posizionare il mouse anestetizzato sul termoforo in posizione supina. Posizionare l'elastico sui denti anteriori dell'animale per estendere il collo sulla piastra.
Focalizzare una fonte di luce sulla gola per una buona visibilità dell'apertura della trachea per l'intubazione endotracheale. Aprire delicatamente la bocca con una mano, posizionando un ausilio per l'intubazione con l'altra mano e piccole pinze. Muovi delicatamente la lingua per cancellare l'apertura della trachea.
Introdurre il tubo endotracheale nella trachea e, d'altra parte, continuare a tenere l'aiuto per l'intubazione. Collegare la posizione del tubo endotracheale tramite un rubinetto a tre vie a un ventilatore per topi per confermare la corretta posizione del tubo endotracheale. Monitorare la giusta ventilazione secondo le istruzioni del produttore.
Confermare una profondità anestetica sufficiente con un controllo del riflesso del pizzico della punta. Applicare unguento oftalmico sugli occhi per evitare secchezza durante l'intervento chirurgico. Disinfettare l'area chirurgica utilizzando una soluzione disinfettante disponibile in commercio.
Usando le forbici, fai un'incisione cutanea lunga da 0,5 a un centimetro nel mezzo di una linea tra il processo xifoideo e l'ascella sinistra. Utilizzare una pinza per separare lo strato muscolare dalle costole sottostanti e posizionare due divaricatori da cinque millimetri nell'incisione per esporre la gabbia toracica. Per iniziare la toracotomia sinistra, eseguire un'incisione da uno a due millimetri nei muscoli intercostali tra la seconda e la terza costola usando le micro-forbici a molla.
Aprire la cavità toracica e diffondere l'incisione con una pinza angolata di 45 gradi. Posizionare tre divaricatori del torace nell'incisione per aprire la cavità toracica per migliorare la visualizzazione. Per esporre l'arco aortico, provare a sollevare e separare delicatamente il timo e il tessuto adiposo dall'arco con una pinza angolata a punta fine di 45 gradi.
Esporre l'arco aortico con una pinza angolata di 45 gradi in una mano. D'altra parte, posizionare l'O-ring collegato con l'aiuto di legatura tramite i fili di un lato attaccati in precedenza. Passare i fili usando l'aiuto di legatura sotto l'arco aortico dal lato caudale al lato cranico dell'aorta trasversale tra le arterie carotidi brachiocefaliche e quelle comuni sinistre.
Prendi entrambi i fili tra l'aiuto di legatura e l'arco aortico con la pinza con attenzione. Rimuovere l'ausilio di legatura e posizionare delicatamente l'O-ring attorno all'arco tirando i fili su ciascun lato. Dopo aver posizionato con successo, fissare l'O-ring con i fili e un nodo chirurgico.
Fai un nodo aggiuntivo per evitare di aprirlo su ciascun lato. Dopo la legatura dell'O-ring, rimuovere i tre divaricatori del torace dall'incisione. Se necessario, eliminare l'aria residua dal torace riempiendolo con una soluzione salina isotonica calda allo 0,9%.
Per esporre l'incisione del torace per la sutura, prendere di nuovo due divaricatori da cinque millimetri per tenere la pelle sul lato. Chiudere il torace con due, o tre 6-0 suture non assorbibili. Rimuovere i due divaricatori e chiudere la pelle con tre o cinque suture assorbibili 4-0.
Quindi spegnere l'isoflurano e monitorare. Pizzicare il deflusso del ventilatore per due secondi per rigonfiare i polmoni. Un giorno dopo l'intervento chirurgico, verificare la stenosi utilizzando gli ultrasuoni misurando la velocità massima del flusso sulla stenosi.
Per le misurazioni, utilizzare l'ecocardiografia con un sistema a ultrasuoni e una sonda trasduttore con una frequenza di 30 megahertz. Posizionare l'animale anestetizzato sulla piastra elettrica in posizione supina e collegare la piastra riscaldante con una sonda rettale per mantenere la temperatura corporea a 37 gradi Celsius e monitorare la frequenza cardiaca con un ECG utilizzando quattro sensori a zampa di topo. Un bendaggio aortico O-ring eseguito con successo si traduce in una maggiore velocità del flusso sulla stenosi misurata dagli ultrasuoni.
Per questa misurazione, posizionare la testa del trasduttore parasternalmente sul lato destro del torace per localizzare l'arco aortico mediante imaging bidimensionale. Utilizzare il color doppler per visualizzare il flusso sanguigno nell'aorta e misurare con la velocità del flusso sanguigno doppler a onda pulsata sulla stenosi. Visualizza le arterie carotidi comuni destra e sinistra mediante imaging bidimensionale.
Posizionare la testa del trasduttore orizzontalmente sui lati sinistro e destro del collo con un angolo di 45 gradi e utilizzare il doppler a onda pulsata per determinare la velocità del flusso sanguigno. L'induzione riuscita della stenosi aortica è stata osservata da un aumento della velocità del flusso sanguigno sulla stenosi nell'aorta misurata mediante ecografia doppler ad onda pulsata. Inoltre, il rapporto di velocità del flusso sanguigno tra le arterie carotidi comuni destra e sinistra è stato determinato come marker funzionale del bendaggio aortico O-ring.
Due settimane dopo l'intervento chirurgico, è stato osservato un aumento della parete posteriore ventricolare sinistra e dei diametri del setto intraventricolare nella diastole. Inoltre, un progressivo peggioramento della funzione cardiaca è stato documentato misurando la diminuzione della frazione di eiezione ventricolare sinistra. Mentre si fissa l'O-ring attorno all'arco aortico, è importante chiudere l'anello su entrambi i lati con un nodo per ottenere un risultato ottimale.
