Si tratta di un modello di parodontite sperimentale nel ratto, basato sulle tecniche di iniezioni di lipopolisaccaridi combinate con il posizionamento della legatura, che offre un metodo efficace per studiare la progressione della malattia e valutare i trattamenti per la parodontite. La combinazione di entrambe le tecniche con metodi individuali culmina in una rapida induzione della malattia, amplificando la risposta infiammatoria distruttiva e aumentando la perdita di tessuto connettivo e il riassorbimento osseo alveolare. Questo metodo offre una preziosa opportunità per valutare l'impatto dei trattamenti di parodontite.
A dimostrare la procedura sarà il Dr.Oscar Villa, PhD. Inizia sterilizzando tutti gli strumenti chirurgici prima dell'intervento chirurgico. Preparare un mix di ketamina e xilazina mescolando 1,6 millilitri di ketamina con un millilitro di xilazina, diluito in PBS o soluzione salina, e conservare il brodo a quattro gradi Celsius.
Diluire atipamezolo ad una concentrazione finale di 0,25 milligrammi per millilitro e buprenorfina ad una concentrazione finale di 0,03 milligrammi per millilitro in PBS o soluzione salina e conservare le scorte a quattro gradi Celsius. Preparare un millilitro di PG-LPS in soluzione salina sterile e conservare il brodo a meno 20 gradi Celsius. Usa ratti Wistar femmine e maschi per l'esperimento.
Tenere gli animali alloggiati in gruppi sotto l'ambiente appropriato, con cibo e acqua standard offerti ad libitum. Dopo che il ratto è stato anestetizzato, posizionare l'animale sulla schiena su una piattaforma chirurgica riscaldata. Coprire il corpo dell'animale durante la procedura per prevenire la perdita di calore.
Somministrare ossigeno al 100% utilizzando un piccolo cono nasale e monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigeno mediante pulsossimetria. Ora, apri la bocca del topo usando un bavaglio di alluminio intorno agli incisivi. Ritrarre la lingua con essa e stabilizzare la mascella e la mandibola in una posizione di lavoro aperta e confortevole, consentendo l'accesso ai molari mandibolari.
Raccogliere GCF utilizzando un totale di quattro punti di carta assorbente numero 30, inserendolo nella fessura gengivale attorno al mesiopalatale della M1 fino a una leggera resistenza. Mantenere il punto carta nella stessa posizione per 30 secondi prima della rimozione immediata. Dopo la raccolta, trasferire immediatamente il punto di carta in un flaconcino di plastica e conservare a meno 80 gradi Celsius fino all'esecuzione del dosaggio.
Posizionare la coda distale della sutura sul lato palatale della dentatura e inserire il segmento prossimale tra il contatto di M1 e dei secondi molari mascellari. Utilizzare l'elevatore microchirurgico periostale per inserire la sutura all'interno del solco. Avvolgere la legatura attorno alla superficie buccale della M1 con molta attenzione, poiché i tessuti a questo livello presentano una stretta zona di gengiva attaccata.
Assicurarsi che la sutura sia serrata su entrambe le estremità per essere spinta nel solco gengivale. Quindi, legare le estremità della sutura con un nodo del chirurgo e tagliare le code il più corte possibile. Inserire il nodo nel solco.
Dopo il posizionamento della legatura, iniettare bilateralmente 40 microlitri di PG-LPS in soluzione salina sterile nel tessuto sottogengivale sul lato mesiopalatale della M1. Per esaminare e regolare la legatura, posizionare l'animale anestetizzato sulla schiena e utilizzare un piccolo cono nasale durante la procedura con isoflurano all'1% e ossigeno al 100% per il mantenimento dell'anestesia animale. Aprire la bocca avvolgente usando il bavaglio in alluminio intorno agli incisivi, ritraendo la lingua con essa e stabilizzando la mascella e la mandibola in una posizione di lavoro aperta e confortevole, consentendo l'accesso alle legature.
Stringere le legature contro la gengiva con l'aiuto di un elevatore microchirurgico periostale e assicurarsi che la sutura delle legature sia inserita, creando infiammazione intorno alla gengiva. Dopo la regolazione della legatura, iniettare bilateralmente 40 microlitri di PG-LPS nel tessuto sottogengivale sul lato mesiopalatale della M1, come dimostrato in precedenza. Dopo aver sacrificato l'animale il 14 ° giorno, raccogli GCF come mostrato in precedenza.
Trasferire immediatamente il punto di carta in un flaconcino di plastica e conservare a meno 80 gradi Celsius fino all'esecuzione del dosaggio. Le immagini bidimensionali dell'osso alveolare dei molari mascellari mostrano più volume osseo nel controllo basale e una maggiore perdita di osso alveolare dopo aver stabilito la parodontite. L'analisi delle immagini sagittali evidenzia una perdita ossea alveolare più significativa nell'area ossea interradicolare di M1 e M2 dopo l'instaurazione della parodontite, rispetto al gruppo di controllo basale.
Dopo il sacrificio, il palato presentava differenze nella recessione gengivale nella M1 tra i diversi gruppi. Il gruppo parodontite mostra una migrazione gengivale apicale più notevole e un'infiammazione della gengiva intorno ai molari mascellari rispetto al gruppo di controllo basale. Inoltre, il gruppo parodontite ha mostrato un rilascio significativamente più elevato di citochina pro-infiammatoria 1L-1 beta da GCF rispetto al gruppo di controllo.
I passaggi cruciali nella procedura sono il corretto posizionamento della sutura e del nodo nel solco, la corretta regolazione della legatura e l'accurata iniezione di lipopolisaccaridi durante il protocollo di 14 giorni.
