Agroinfiltrazione forzata sottovuoto per la trasformazione in planta di piante recalcitranti: il cacao come caso di studio

I metodi genetici in vivo sono necessari per studiare la funzione biologica dei geni nelle specie perenni tropicali e nelle colture arboree orticole. Tuttavia, molte di queste specie sono recalcitranti alla trasformazione in ogni generazione. Lo scopo di questa ricerca è quello di sviluppare un metodo di trasformazione genetica semplice ed efficiente applicabile a piante di grandi dimensioni.

Illustrerò le cose. La trasformazione genetica mediata da agrobatteri di piante con tessuti difficili da infiltrare è stata resa possibile dall'infiltrazione forzata utilizzando una pompa a vuoto. Tuttavia, i protocolli attualmente in uso sono limitati agli impianti di piccole dimensioni a causa dei vincoli fisici ed economici di sottoporre impianti di grandi dimensioni a una camera da vuoto.

Le dimensioni delle camere a vuoto, che di solito sono essiccatori da laboratorio, impediscono l'infiltrazione sottovuoto di piante troppo grandi per essere inserite nei essiccatori, come nel caso delle piante legnose tropicali. Abbiamo sviluppato un protocollo per l'infiltrazione localizzata sotto vuoto di piante legnose tropicali, rendendo possibili studi di trasformazione genetica in vivo di specie vegetali di grandi dimensioni. Questo protocollo ci ha permesso di superare i limiti dimensionali delle piante per l'infiltrazione sottovuoto mediata da Agrobacterium in colture arboree orticole come cacao e avocado.

La trasformazione mediata da Agrobacterium senza colture tissutali delle foglie attaccate mediante infiltrazione localizzata sotto vuoto può essere eseguita in modo rapido, semplice ed economico dai laboratori che già utilizzano l'infiltrazione sottovuoto, poiché la stessa pompa e recipiente a vuoto possono essere utilizzati senza la necessità di aggiungere costose apparecchiature.