調製と<em&gt;インビトロ</em&gt;磁気共鳴イメージングのためのデンドリマーベースの造影剤のキャラクタリゼーション

要約

このプロトコルは、常磁性のガドリニウムイオンを配位シクレンベースの大環状キレートを担持デンドリマー磁気共鳴イメージング（MRI）造影剤の調製および特徴付けを記載します。市販の単量体のアナログと比較した場合、in vitroでのMRI一連の実験では、このエージェントは、増幅されたMRI信号を生成しました。

要約

非環状または大環状キレートとガドリニウム（III）の常磁性錯体は、磁気共鳴画像（MRI）のために最も一般的に使用される造影剤（CAS）です。その目的は、このようにMR画像のコントラストとMRI測定の特異性を増加させる、組織中の水プロトンの緩和速度を高めることです。現在臨床的に承認された造影剤は、急速に身体から除去される低分子量分子です。常磁性キレートのキャリアとしてのデンドリマーの使用は、より効率的なMRI造影剤の将来の発展に重要な役割を果たすことができます。具体的には、より高い信号は対照的に、常磁性種の結果の局所濃度の増加。さらに、このCAは、その高い分子量およびサイズによる長い組織滞留時間を提供します。ここでは、ポリ（アミドアミン）に基づく高分子MRI造影剤（PAMAM）monomacro有するデンドリマーの調製のための便利な手順を示します巡回DOTA型キレート剤（DOTA - 1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン1,4,7,10-四酢酸）。キレート化ユニットは、チオ尿素架橋を形成するために、PAMAMデンドリマーのアミン表面基に対してイソチオシアネート（NCS）基の反応性を利用することによって付加しました。デンドリマー生成物を精製し、核磁気共鳴分光法、質量分析、および元素分析によって分析しました。最後に、高解像度のMR画像を記録し、準備デンドリマー及び市販のモノマー剤から得られる信号のコントラストを比較しました。

概要

磁気共鳴イメージング（MRI）は、その非侵襲的性質と優れた固有の軟組織のコントラストに広く生物医学研究および臨床診断に使用される強力な非イオン化イメージング技術です。最も一般的に使用されるMRI法は、水信号の密度の差に基づいて組織内の高解像度画像と詳細情報を提供し、水のプロトンから得られる信号を利用します。信号強度およびMRI実験の特異性は、さらに、造影剤（CAを）使用して向上させることができます。これらは、それぞれ、長手方向（T _1）と横方向（T _2）緩和時間に影響を与える常磁性または超常種^、1,2です。

ポリアミノポリカルボン酸リガンドとランタニドイオンのガドリニウム錯体は、最も一般的に用いられるT ₁のCAです。ガドリニウム（III）は、T ₁緩和を短縮します水プロトンの時間、従ってMRI実験³における信号のコントラストを増加させます。しかし、イオンガドリニウムは有毒です。そのサイズは、カルシウム（II）のことを近似し、それが真剣に細胞内のカルシウム補助シグナル伝達に影響を与えます。したがって、非環状および大環状キレートは、この毒性を中和するために使用されます。様々な多座配位子は、高い熱力学的安定性と運動不活性¹とガドリニウム（III）錯体が得られ、これまでに開発されてきました。特に12員azamacrocycleシクレン、そのテトラ派生DOTA（1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン1,4,7,10-四酢酸）に基づくものは、ほとんど調査され、このCAクラスの複合体を適用しています。

それにもかかわらず、GdDOTA型CAは、このような低コントラスト効率および高速腎排泄のようなある種の欠点を表示する、低分子量のシステムです。高分子および多価CAは、これらの問題⁴への良好な溶液であってもよいです。 CA biodistribuので、ションは、主にそのサイズによって決定され、高分子CAは組織内はるかに長い保持時間を表示します。実質的に収集されたMR信号と測定品質を向上させる、モノマーMRプローブ（ 例えば、GdDOTA複合体）の増加した局所濃度におけるこれらの薬剤の結果の多価性、同様に重要。

デンドリマーは、MRI ^4,5のための多価CAの製造のための最も好ましい足場中にあります。明確に定義されたサイズを有するこれらの高度に分岐した巨大分子は、その表面上の様々なカップリング反応を受けやすいです。本研究では、第4世代（G4）は、ポリ（アミドアミン）GdDOTAのようなキレート（DCA）に結合された（PAMAM）デンドリマーからなるMRI用デンドリマーCAの準備、精製、および特徴付けを報告します。我々は、反応性DOTA誘導体の合成とPAMAMデンドリマーへの結合について説明します。 Gd（III）、標準的な物理化学的特性評価との複合体形成時に。手順DCAの再実施しました。最後に、MRI実験は、低分子量のCAから得られるものよりも強いコントラストでMR画像を生成するDCAの能力を実証するために行きました。

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プロトコル

DCAの調製

1. モノマー単位4 ⁶の合成。
   1. 4-の合成（4-ニトロフェニル）-2-（4,7,10-トリス- ターシャ -butoxycarbonylmethyl-1,4,7,10--tetraazacyclododec -1-イル）酪酸tert-ブチルエステル（2）。
      1. （4,7-ビス- ターシャの -butoxycarbonylmethyl-1,4,7,10-テトラアザ- cyclododec -1-イル） -酢酸tert-ブチルエステル1（1.00 gであり、1.94ミリモル）のN、N-ジメチルホルムアミド（中に溶解DMF 5 ml）を、0.67 gであり、4.86ミリモル、2.5当量（炭酸カリウムを加える）し、45分間室温で混合物をかき混ぜます。
         注：大環状化合物1は、シクレンから調製した及びtert-以前に公開されている手順⁷に従ってブロモ酢酸ブチル。
      2. tert-ブチル2-ブロモ-4-（4-ニトロフェニル）ブタノエート追加（0.87 gであり、2.53ミリモル、1.3当量）を1時間にわたって一部分ずつ。トンの下で混合物を攪拌し続けます彼は次の18時間、同じ反応条件。
         注：-tert-ブチル-2-ブロモ-4-（4-ニトロフェニル）ブタノエートを、以前に公開された手順⁸に従って、4-（4-ニトロフェニル） -酪酸、塩化チオニル、および臭素から調製しました。
      3. 40-60°Cの⁹でバルブ・ツー・電球真空蒸留によってDMFを除去します。
      4. 褐色の無定形固体（1.09 gの^72％）10として生成物2を得るために、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、7％メタノール/ジクロロメタン）により残渣を精製します。
   2. 4-の合成（4-アミノフェニル）-2-（4,7,10-トリス- ターシャ -butoxycarbonylmethyl-1,4,7,10--tetraazacyclododec -1-イル）酪酸tert-ブチルエステル（3）。
      1. ニトロベンゼン誘導体2エタノール中の（1.00 gであり、1.28ミリモル）（10ml）およびメタノール（150μL）中の7 Nアンモニア溶液に溶解します。 solutiの触媒（Pd / Cを、150mgの、15重量％）と活性炭上のパラジウムを追加に。
      2. パール水素化装置で水素雰囲気（2.5バール）下で16時間不均一な混合物を振ります。
      3. エタノールに懸濁し、焼結ガラス漏斗を通して懸濁液を濾過することにより珪藻土のケーキを準備します。濾過によりPd / C触媒を除去するために準備されたケーキの上に1.1.2.2からサスペンションを注ぎます。
      4. 褐色の非晶質固体（0.91グラム、95％）として化合物3を得るために、ロータリーエバポレーター（水浴温度〜40°C）で穏やかな蒸留により溶媒を除去します。
   3. 4-（4-イソチオシアナトフェニル）-2-（4,7,10-トリス- ターシャ -butoxycarbonylmethyl-1,4,7,10- tetraazacyclododec -1-イル）酪酸tert-ブチルエステル（4）の合成。
      1. （0.685 mlの4.87ミリモル、4当量）3（0.91 gであり、1.22ミリモル）の混合物に、チオホスゲン（0.124 mlであり、1.58ミリモル、1.3当量）を加え、トリエチルアミン、ジクロロメタン（15ml）に。
      2. 激しく反応マイルをかき混ぜます16時間室温でマグネチックスターラーを固定装置。
      3. ロータリーエバポレーター（水浴温度〜40℃）で穏やかに蒸留により溶媒を除去し、次いで固体無定形淡褐色の生成物4を得るために、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、5％メタノール/ジクロロメタン）によって粗生成物を精製します（0.51 gであり、53％）。
2. デンドリマーDCAの合成。
   1. デンドリマー5の合成。
      1. （4ミリリットル）G4-PAMAMデンドリマーを取る（667 mgを、メタノール中10％デンドリマー溶液を、4.67マイクロモル）、ロータリーエバポレーター（水浴温度〜40°C）で穏やかな蒸留によりメタノールを蒸発させ、そしてDMF中で残留物を溶解。
      2. トリエチルアミンを追加（0.105ミリリットル、0.75ミリモル、160当量）を、60℃で45分間撹拌し、イソチオシアネート4追加（354ミリグラム、0.45ミリモル、1.5当量を。デンドリマーのアミノ表面基に対して）ずつのオベR 1時間。
      3. 48時間45℃でマグネチックスターラーを用いて反応混合物を撹拌しました。
      4. 40-60℃でバルブ・ツー・電球真空蒸留により溶媒を除去します。
      5. 溶離液として、親油性ゲル濾過媒体とメタノールを用いたサイズ排除クロマトグラフィーによって残留物を精製します。列をパックするために、圧力を加えることなく、室温（>粉末1gあたりのメタノール4ミリリットル）で少なくとも3時間、メタノール中に濾過媒体を膨潤させます。 1mlの画分を回収することにより比重分離を実行します。
      6. 薄層クロマトグラフィー（TLC）で回収した画分を分析します。 （ベースライン上に位置する唯一の最も極性のスポットは樹枝状生成物から誘導される）15％メタノール/ジクロロメタン中のTLCプレートを開発。生成物5（270 mgを、91％）を得るために、ロータリーエバポレーター（水浴温度〜40℃）で穏やかに蒸留によって回収した画分を蒸発させます。
   2. デンドリマーの合成 6。
      1. ギ酸（5ml）中の保護されたデンドリマーキレート剤5（270 mgを、4.23モル）を溶解し、24時間60℃で混合物をかき混ぜます。
      2. ロータリーエバポレーター（〜15ミリバールの圧力、水浴温度〜40℃）で蒸留によりギ酸を蒸発させ、凍結乾燥製品を6（圧力〜0.2ミリバール^）9を得ました。
   3. デンドリマー造影剤の合成（DCA）
      1. 水中でのデンドリマーキレート剤6（4.35マイクロモル）を溶解し、0.1M水酸化ナトリウムでpHを7.0に調整します。
      2. 水（1ml）中のGdCl _{3・6H 2} O（113 mgを、304マイクロモル）を溶解し、4時間かけキレート剤6の溶液に滴下し加えます。 pHメーターでpHを測定することにより、水酸化ナトリウム溶液（0.05 M）でpHを7.0に維持します。
      3. 部屋トンでマグネチックスターラーで混合液を撹拌24時間emperature。
      4. 水酸化ナトリウム水溶液（0.05 M）でpHを7.0に維持しながらのGd（III）の過剰を除去するために4時間かけて溶液ずつにエチレンジアミン四酢酸（EDTA、158ミリグラム、426モル）を加えます。 24時間、室温で混合物を撹拌しました。
      5. GdEDTAの過半数とEDTAの過剰を除去するために、サイズ排除クロマトグラフィーを実行します。列をパックするために、水中で膨潤した親水性ゲル濾過媒体を使用してください。適切な音量に混合物を削減し、列をロードします。圧力を加えることなく、脱イオン水でカラムを溶出します。
      6. GdEDTA及びEDTAの残留物を除去するために遠心力1,800×gで30分間、3 kDaの遠心フィルターユニットを用いて試料を遠心。ろ液をEDTAとGdEDTAの不在を示すまで（5回程度）、この手順を繰り返します。最終的なDCAをオフホワイトの生成物を得るために、フラスコに試料を移すことを蒸発させ、次いで溶媒を凍結乾燥（186 mgを、71％）。
         注：ESI-MSを用いてEDTAおよびGdEDTAの不在を確認してください。
      7. キシレノールオレンジテストを用いて遊離イオンとしてのGd（III）が存在しないことを確認してください。酢酸緩衝液（pH 5.8）中の濾液（0.5ml）に溶解します。 ^11（黄色や紫の色はそれぞれ、溶液中の遊離のGd（III）イオンの有無を示す）キシレノールオレンジ溶液を数滴を追加し、色の変化を追跡します。

デンドリマー製品のインビトロ特徴2.

1. （DOTAのような大環状化合物とデンドリマーのローディング）PAMAMデンドリマーに結合された大環状DOTA-単位数の推定
   1. ¹ H NMR（ -核磁気共鳴分光法NMR）で推定。
      注：この手順では、デンドリマー5と6上ではなく、DCAで可能です。
      1. ¹ H NMRスペクトル^12を記録^します。
      2. それぞれ、デンドリマー5および6のためか、単に脂肪領域と、芳香族領域と二つの別々の脂肪族領域（ トン -buグループの2信号脂肪族デンドリマーおよび大環状プロトンの1信号）を統合します。
         注：彼らが加水分解されているので、脂肪族領域は、デンドリマー6にトンの -buグループから発信さに全く別個の信号がありません。
      3. 式を使用してください。 1または式。図2は、Rは、積分の比=大環状ユニットの数（n）は 、推定する（式1または脂肪族-デンドリマー中の芳香族脂肪族/ /脂肪族式のT-富栄。2）、Hの _DEND =プロトン数デンドリマーに、H _Arは芳香族プロトンの数は、H _{トン Buは} トンの -buグループ内のプロトンの数を= =、およびH _{マックは、1}マクロサイクルでプロトンの数を=。
         注：いずれかの式。 1または式。図2は、foを使用することができますRデンドリマー5、唯一の式ながら。図1は、デンドリマー6のために使用することができます。交換可能なプロトンは、（アミン、アミド、チオ尿素、またはカルボキシレートで）、典型的に重水素で置換されているので、計算で想定されていませんでした。ここで、Hは_、DEND（5用）= 1,128又は千（6）H _のAr = 4、及びH _MAC = 27を使用しました。
         （1）
         （2）
   2. 硫黄と窒素の比を用いて元素分析から推定。
      1. 固体デンドリマーサンプル（この作業でDCA）の元素分析を行います。
      2. 式を使用してください。図3は、Rが決定％のNおよび％S、Nの _DEND またはS _DENDの比=大環状ユニットの数（N）、=の数を推定します窒素または硫黄原子デンドリマーであり、N _MACまたはS _マック = 1大環状単位中の窒素または硫黄原子の数。
         注：係数2.29は、硫黄及び窒素の原子質量における比から得られます。この研究では、Nの _DEND = 250、Sの _DEND = 2、N _MAC = 5、およびS _MAC = 1を使用しました。
         （3）
   3. マトリックス支援レーザー脱離/飛行（MALDI-TOF）のイオン化時間で推定。
      1. MALDI-TOF MS分析^13を実行^します 。
      2. 式に従った大環状ユニットの数（n）を計算します。 4、M _zは = =デンドリマー部分の質量、およびM _Macは 1大環状ユニットの質量を観測質量（のm / z）はz =種の電荷、Mの _DEND =。
         NOTE：Mの _DEND = 14306およびM _MAC = 719は、この作業で使用しました。
         （4）
2. DCA濃度の決意（[DCA]）：バルク磁化率測定（BMS）
   1. プラスチックバイアルチューブ（[DCA]〜5-10 mM）の水（360μL）中のDCA（5-10 mg）を溶解させます。
      注：[DCA]δ= 4.7 ppmの水の共鳴で、> 15 mMの試料濃度でT-BuOHの共鳴の可能な重複を避けるために、5〜10 mMの範囲にあるべきです。
   2. DCAの水溶液に：（1 V / V 2）とボルテックスミキサーを使用して得られた溶液（420μl）を混ぜT-BuOHの混合物を：D ₂ O60μlのを追加します。
   3. 外NMRチューブにサンプルの400μLを移し、T-BuOHのと同軸NMR挿入管を配置する：H ₂ O混合物（10:90 v / v）のサンプル管に。
   4. 記録¹ H NMRスペクトル内外NMRチューブ中のBuOH（基準^）12 T-由来共鳴信号との間の周波数シフトを測定します。
   5. 式を使用してください。 5 Tは絶対温度= [DCA]を決定するために、Δχは、記録されたシフト=の^{Gd（III）14、}およびs =定数に依存するためのランタニドイオンのため_EFF =有効磁気モーメント_（μEFF = 7.94、μサンプルの形状や磁場（それぞれ0、1/3、および磁場に垂直な球体に気筒パラレル、およびシリンダーの場合は1/6、）内のその位置に依存します。
      注：BuOHを溶液（60μl）をT-：[DCA]に対して得られた計算値が原因でD ₂ Oの添加に元の濃度に補正する必要があります。
      （5）
3. 動的光散乱（DLS）測定。
   1. 濾過DCA溶液を調製（0.2μmのポリテトラフルオロエチレン/ PTFEフィルター、Gdの当たり0.75ミリ（III））、4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジンエタンスルホン酸（HEPES）緩衝液（25mMの、pHが7.4）にそれを転送しますDLS測定用キュベット。
   2. DLS装置にキュベットを配置し、以下のパラメータを設定します。記録に30秒前にスキャンの間および温度平衡との遅延なし15スキャン（1スキャン= 12秒、屈折率= 1.345、吸収= 1％）の5回繰り返しを。
   3. 取得したデータをエクスポートし、サイズ（流体力学直径）の関数としての人口（％）をプロットすることにより、サイズ分布ヒストグラムを得ます。
4. 縦及び横緩和の測定。
   注：同様の手順は、既に緩和時間分析器^15を用いて説明しました。この手順では、トップスピンを持つ300MHzのNMR分光計を用いて行きましたソフトウェア。
   1. H ₂ O中のDCAソリューションのセットを準備します：D ₂ O（500μL、H ₂ O中10％のD ₂ O、[DCA] = 2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、および5.0 mMの、[HEPES ] = 25 mM）のDCAストックサンプルから（セクション2.2を参照）。
   2. NMRチューブに溶液を450μLを移し、機器にそれを置きます。
   3. （（O _1）オフセット90°励起パルスの持続時間（P1）、および照射周波数）取得パラメータを最適化し、その後、反転回復（IR）を使用し、カー・パーセル・Meiboom-ギルT ₁およびT ₂実験を行う（CPMG ）パルスシーケンス、それぞれ。
   4. T ₁及びT ₂緩和時間の決意。
      1. F2次元で記録された測定、プロセスの2Dスペクトルを選択して、インタラクティブな位相補正を行います。
      2. 分析/ Tに適切なスライス（最大強度を有するピーク）を選択します _{1 / T 2緩和ウィンドウ、それを統合し、緩和モジュールにリージョンをエクスポートします。}
      3. T ₁またはT ₂緩和時間を得るために、適切なフィッティング関数（IRおよびCPMG実験用invrecまたはuxnmrt2、それぞれ）を選択します。
   5. すべての[DCA]残りの解決のための手順を繰り返し2.4.4.2-2.4.4.4。
   6. 得られたT ₁値から緩和速度（R ₁とR _2）を計算_する （R _1,2 = 1 / T _1,2）。
   7. mMの中のGd（III）濃度の関数としてプロットR ₁及びR _2（秒^-1）。
   8. 式で定義されるように、近似直線の傾きから、縦方向および横方向の緩和を決定し_{、R 1}およびR _2（MM ^-1秒^-1）。 6、R _I、OBS =の長手方向（I = 1）または横（I = 2）反磁性緩和速度実験に用いた常磁性種が存在しないと[Gdの] =のGd（III）の濃度で水。
      （6）

インビトロ MRI 3.。 DCAとGdDOTAの比較

1. チューブファントムの作製
   1. 造影剤の濃度が算出される2セットの実験のためのDCA（4×350μlの）とGdDOTA（4×350μlの）だけでなく、水試料（4×350μlの）の水溶液を準備します（3.1.1.1）をGd（III）または（3.1.1.2）ごと分子当り。
      1. 2 DCAサンプルおよび2 GdDOTAを準備します それぞれのGd（III）、0.5及び1.0 mMの濃度を有するサンプル。さらに、（対照チューブなど）は、2つの水試料を準備します。
      2. 2 DCAサンプル（2.5及びGd（III）または0.05あたり5.0ミリモルおよびデンドリマー分子あたり0.1ミリモル）、2 GdDOTAサンプル（0.25、0.5 mMの）と2つの水試料を準備し（制御リットル管）。
         注：適切なDCAとGdDOTA濃度は、HEPES緩衝液（pH7.4）で（セクション2.2を参照）BMS法により測定された濃度で、それぞれの株式のサンプルを希釈することにより調製されるべきです。計算を簡単にするために、N = 50がデンドリマー分子あたり大環状単位の平均数を想定しました。従って、DCAの比、分子ごとに計算し、5：GdDOTA 1でした。
   2. 溶液中の気泡の存在を回避し、300μlのプラスチックバイアルチューブ内のサンプルを配置します。
      注：プラスチックバイアルチューブのサイズは、使用無線周波数コイルの種類とサイズによって異なります（ここでは、ボリュームコイルとの例が与えられています）。
   3. シリンジ（60ミリリットルの容量）内部のサンプルを挿入し、1 mMのGdDOTAでそれを埋めます 解決策は、スキャナに配置します。
      注：サンプルは、磁場の中で感受性の影響（変動を避けるために、GdDOTAの水溶液に入れました異なる磁化率の物質間の近くのインターフェイスを発生trength）。
2. パラメータ最適化およびイメージング。
   1. 磁石のアイソセンタにサンプルでシリンジを配置するために、解剖学的スキャン（ローカライザー/ Tripilot）を使用します。
   2. ボリューム全体、中心周波数（O _1）、受信機ゲイン（RG）、および送信利得（TX0とTX1）の（磁場均一の調整）をシミングするための調整を行うための交通信号灯（調整スキャン）を押します。
   3. T ₁強調（T _1ワット ）イメージングでは、高速ローアングル（FLASH）メソッドを選択します。
   4. ローカライザーのスキャンを使用してスキャナーに（シリンジ水平）垂直に配置サンプルのための冠状スライスを選択してください。
   5. 式を使用してください。コントラスト対雑音（CNR）取得の最適化のための7はα=フリップ角は、TEはエコー時間を= ^16、パラメータ、TR =繰り返し時間、T _{1、A、T 1は、Bは、（CNR}が最大化されるべき対象の試料A（T _1、A）のT ₁時間、サンプルB（T _1、Bを ）=同じことが有効ですT ₂回：T _2、A及びT _2、B）。
      注：T ₁およびT ₂緩和時間はTE、TRながら、縦方向と横方向の緩和（セクション2.4）の測定から得られた値に設定する必要があり、そしてαは、CNRの最適化計算から得られるべきです。
      （7）
   6. 前のステップ（3.2.5）において得られたパラメータを用いて画像を取得します。
   7. 信号対雑音比（SNR）を計算します。
      1. 画像表示＆処理に取り込まT _1ワット画像（スキャン）をロードウィンドウ、および関心領域 （ROI） を定義します ]をクリックします。
      2. 円形ROIを選択して、試料位置とバックグラウンドでそれを描きます。続いて、平均信号振幅（S _信号 ）とバックグラウンド（S _ノイズ ）の標準偏差を得るために、 表示をクリックしてください。
      3. DCA、GdDOTA、および水試料のための手順を繰り返し3.2.7.2。
      4. 式を用いてSNRを計算します。SNR = S _信号 / S _ノイズ 。
   8. わずかに変更された手順に従って、緩和強化（RARE）メソッドを使用して迅速な取得を使用して、T ₂強調（T _2ワット ）撮影を行います。 CNR取得パラメータの最適化のために、式を使用します。 8。
      （8）

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結果

DCAの調製は、2つのステージから構成：1）モノマーDOTA型キレート剤の合成（ 図1）及びG4のPAMAMデンドリマーと複合体デンドリマーのGd（III）の後続の製造とキレート剤の2）カップリング（ 図2） 。第一段階では、4つのカルボン酸を含有するシクレン系DOTA型キレート剤およびさらなる合成修飾に適した直交群を作製しました。

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ディスカッション

デンドリマーのMRI造影剤の調製は、モノマー単位の適切な選択を必要とする（ すなわち、Gdのためのキレート剤（III））。彼らは、この常磁性イオンの毒性を低減し、これまでに、非環式の多種多様な大環状キレート剤は、この目的の^1-3を果たします。これらの中で、大環状DOTA型キレート剤は、最も高い熱力学的安定性及び速度論的不活性を有し、従って、不活性なMRI造影剤<...

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資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cyclen	CheMatech	C002
tert-Butyl bromoacetate	Alfa Aesar	A14917
N,N-Dimethylformamide	Fluka	40248
Potassium carbonate	Sigma-Aldrich	209619
4-(4-Nitrophenyl)butryic acid	Aldrich	335339
Thionyl chloride	Acros Organics	382662500	Note: Corrosive substance; toxic if inhaled
Bromine	Acros Organics	402841000	Note: causes severe skin burns, fatal if inhaled
Diethyl ether	any source
Sodium sulphate	Acros Organics	196640010
Chloroform	VWR Chemicals	22711.29
tert-Butyl 2,2,2-trichloroacetimidate	Aldrich	364789	Note: flammable substance; irritrant to skin and eyes
Boron trifluoride etherate	Acros Organics	174560250	48% BF3. Note: Flammable substance; causes skin burns, fatal if inhaled
Sodium bicarbonate	Acros Organics	424270010
Ethyl-acetate	any source		For column chromatography
n-Hexane	any source		For column chromatography
Bulb-to-bulb (Kugelrohr) distillation apparatus	Büchi		Model type: Glass oven B-585
Silicagel	Carl Roth GmbH	P090.2
Methanol	any source		For column chromatography
Dichloromethane	any source		For column chromatography
Ethanol	VWR Chemicals	20821.296
Ammonia	Acros Organics	428381000	7 N Solution in Methanol
Palladium	Aldrich	643181	15% wet
Hydrogenation apparatus PARR	PARR Instrument Company
Celite 503	Aldrich	22151
Sintered glass funnel	any source
Thiophosgen	Aldrich	115150	Note: irritrant to skin; toxic if inhaled
Triethylamine	Alfa Aesar	A12646
Dichloromethane	Acros Organics	348460010	Extra dry
Magnetic stirrer	any source
PAMAM G4 Dendrimer	Andrews ChemService	AuCS - 297	10% wt. solution in MeOH
Lipophylic Sephadex LH-20	Sigma	LH20100
Thin-layer chromatography plates	Merck Millipore	1.05554.0001
Formic acid	VWR Chemicals	20318.297
Lophylizer	any source
Gadollinium(III) chloride hexahydrate	Aldrich	G7532
Sodium hydroxide	Acros Organics	134070010
pH meter	any source
Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate	Aldrich	E5134
Mass spectrometer (ESI)	Agilent		Ion trap SL 1100
Acetate buffer	any source		pH 5.8
Xylenol orange	Aldrich	52097	20 μM in acetate buffer
Hydrophylic Sephadex G-15	GE Healthcare	17-0020-01
Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Unit	Merck Millipore	UFC900324	Ultracel-3 membrane (MWCO 3000)
Centrifuge	any source
NMR spectrometer	Bruker		Avance III 300 MHz
Topspin	Bruker		Version 2.1
Combustion analysis instrument	EuroVector SpA		EuroEA 3000 Elemental Analyser
MALDI-ToF MS instrument	Applied Biosystems		Voyager-STR
Deuteriumoxid	Carl Roth GmbH	6672.3
tert-Butyl alcohol	Carl Roth GmbH	AE16.1
Vortex mixer	any source
Norell NMR tubes	Deutero GmbH	507-HP-7
NMR coaxial tube	Deutero GmbH	coaxialb-5-7
DLS instrument	Malvern		Zetasizer Nano ZS
0.20 μm PTFE filter	Carl Roth GmbH	KC94.1
HEPES	Fisher BioReagents	BP310
Plastic tube vials	any source
Dotarem	Guerbet		NDC 67684-2000-1
MRI scanner	Bruker		BioSpec 70/30 USR magnet (7 T). Note: potential hazards related to high magnetic fields
RF coil	Bruker		Dual frequency volume coil (RF RES 300 1H/19F 075/040 LIN/LIN TR)
Paravision (software)	Bruker		Version 5.1