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要約

ここでは、寒冷凝固・うっ血性ラットの原発性月経困難症の治療において、へそにハーブ分割灸を施す際の手術手順と注意点について詳細に述べます。これにより、月経困難症ラットの身もだえ反応を大幅に改善し、痛みを緩和することができます。

要約

原発性月経困難症(PDM)とは、明らかな骨盤の病状を伴わない下腹部の痙攣性疝痛の発生を指し、しばしば他の全身症状を伴い、PDMの女性の生活の質を大幅に低下させ、月経女性の45%〜95%が影響を受けます。PDMの発生率が高いにもかかわらず、PDMはしばしば十分に治療されておらず、関連する研究者や女性自身によって無視されています。ハーブ分割灸(HPM)は、中国の病気の治療に広く使用されている伝統的な中国医学(TCM)の特徴的な外用療法です。患者のツボに漢方薬を塗り、灸治療用の薬草薬に灸スティックを点火することで病気を治療します。この研究で利用されたハーブの主な効果は、経絡の活性化と暖かさであり、気の循環を促進して痛みを和らげます。灸の熱刺激は、ハーブの人体への注入を早める可能性があります。したがって、ツボ、ハーブ、熱刺激を組み合わせたHPMは、婦人科疾患、特にPDMなどの機能性疾患の治療に適しています。この論文では、雌の実験ラットのShenque(CV8)ツボでのHPMの手順と注意事項について詳細に説明し、PDMのへそへのHPMの適用と開発をより良く促進するための実験的基礎を提供します。

概要

原発性月経困難症(PDM)は、機能性月経困難症とも呼ばれ、思春期の少女や月経中の若い女性に影響を与える最も一般的な婦人科疾患の1つです1。それは、苦痛や子宮圧迫(けいれん)などの副作用と、骨盤の病状の証拠がない月経前後の腹部の炎症性の問題を特徴としています2。月経開始後8〜72時間で始まり、月経流出の増加の最初の数日間でピークに達する下腹部のけいれん3,4、時には背中や太ももに広がることは、多嚢胞性PDMの特徴的な症状です。状態の定義が異なり、月経痛の強度を評価するための標準化された方法がないため、女性の月経困難症の推定有病率は45%〜95%3,4,5です。生殖年齢の女性の約10%〜25%は、非常に重度のPDMに苦しんでいると考えられています6。PDMの有病率は20歳から24歳の年齢層で最も高く、その後徐々に減少します2。PDMは周期的な下腹部痛を特徴とし、腰痛、吐き気、嘔吐、頭痛、食欲不振、下痢7、さらにはうつ病や不安などの精神症状8,9などの他の全身症状を伴うことがよくあります。月経中、月経困難症の女性は全体的な生活の質の低下を経験します4,8,10。

さらに、研究によると、月経痛を繰り返すと中枢神経系の機能に影響を及ぼし、痛みを伴うステージと痛みのないステージの両方で痛みの知覚が変化する可能性があることがわかっています11。PDMの病因はプロスタグランジン(PG)に基づいているため、PDMの最も一般的な薬物治療は非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)12,13であり、次いで経口避妊薬14です。薬物の副作用に加えて、10%〜20%の人がNSAIDsや避妊薬に反応しません3。現在の研究の大部分は、月経困難症が脳の解剖学と生理学に及ぼす影響に関係しており、治療アプローチにはほとんど注意が払われていません。そのため、臨床現場で広く適用でき、有効性が確立され、患者に受け入れられやすい治療戦略を見つけることが急務となっています。

ハーブ分割灸(HPM)は、中国で病気の治療に広く使用されている伝統的な中国医学(TCM)の特徴的な外用療法です。その利点には、最小限のコスト、副作用なし、良好な長期的効果、簡単な操作、および患者による容易な受け入れが含まれます。HPMがへそに及ぼす影響はPDMに有意であることがわかってい15、これは、子宮の冷熱欠乏症と過剰、さらには肥満細胞と関連受容体16の調節と密接に関連している可能性があります。研究チームは、HPMが月経痛をすぐに和らげることができることを証明しました17。

張中京は最初に月経困難症の概念を記録しました 女性のその他の病気と治療 黄金の部屋の、月経流出がベルトの下で好ましくなく、腹部が痛みに満ちていると書いています18。その主な症状によると、月経困難症は伝統的な漢方薬における月経痛と月経腹痛のカテゴリーに起因する可能性があります。月経困難症の症候群は、気と血液欠乏症の5つに分けることができます。冷凝固とうっ血;湿った熱蓄積;気の停滞とうっ血;肝臓と腎臓の欠乏症16。関連する研究によると、冷え凝固とうっ血の症候群は、PDM19,20の最も一般的な症候群です。TCMは、PDMと風邪病原体は密接に関連していると考えています21。月経中またはその前後には、雪海では過剰な血液の流れがあり、そのエネルギー的な性質により気の血液が急速に枯渇します。その結果、女性は、十分な健康エネルギーの欠如と、子宮とチョンとレンの経絡22の気と血液の急速な変動のために、病気の原因に対して脆弱です。体格がよく発達している女性は、生の食べ物や冷たい食べ物を摂取しないように、また月経中に風邪をひかないように予防策を講じる必要があります。そうしないと、冷たい病原体が子宮に侵入し、子宮内やチョン経絡とレン経絡内の血液の凝固と停滞につながる可能性があります。その結果、血流の停滞の結果として、個人は痛みを経験します。外部からの風邪病原体の侵入と体内の陰の寒さの存在の両方が、経絡の閉塞と凝固を引き起こす可能性があります。

月経困難症の位置はチョン子午線とレン子午線にあり、発症は気と血液の変化に関連しています。TCM理論では、灸は陽気を刺激し、経絡を温め、寒さを分散させ、血流を増やして痛みを和らげることで機能します。霊書23のジンフーによると、脈拍と血栓が真ん中にあり、凝固した血液と冷血がある場合、それは灸に適しています。これは典型的な外用月経困難症の治療です。以前に発表された作品では、24 のヨモギ の葉は 苦くて刺激的で、ほぼ疲れ果てた元の陽を回復し、12の経絡を接続し、3つの陰の経絡を通り抜け、気と血液を調節し、寒さと湿気を払拭し、子宮を温めます。灸は、対応するツボの助けを借りて、病原性因子を外部に排出することができます。 気と血液を内部で調節することで、経絡の調節、血液循環の活性化、痛みの停止に役割を果たします。へそはシェンケ(CV8)とも呼ばれ、レン子午線に属し、デュ子午線、チョン子午線、ダイ子午線を接続しています。TCMの理論によると、シェンケはファイブザンとシックスフー25に関連していると考えられています。それは先天的な基盤であり、陰陽バランスのピボットと見なされています。解剖学的には、PDMは骨盤に近接しており、子宮と密接に関連しています。PDM疾患は特に子宮に影響を及ぼし、その病因には気と血液の不均衡、および内臓の不均衡が含まれます。シェンクポイントを刺激することにより、子宮の気と血液の状態に直接影響を与え、月経困難症を効果的に治療することが可能です。前述の理論に基づき、月経困難症の症状改善と痛みの緩和を目的として、腹部に位置するShenqueツボの刺激をHPM治療に選択しました。

冷凝固とうっ血を伴うPDMへのTCMの介入をできるだけ忠実に模倣するために、雌ラットのへそでHPM技術を再現しました。へそのHPMには明確な鎮痛効果があり、月経困難症のラットの身もだえ反応を軽減できることが発見されました。PDMの改善と促進のためにへそへのHPMのメカニズムを調べるために、ラットを固定し、腹のShenqueツボでHPMを行う技術を検討しました。

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プロトコル

この実験プロトコルは、浙江中医薬大学の実験動物管理および倫理審査委員会によって承認されました。動物に対するすべての実験操作は、実験動物福祉倫理および動物実験安全規則に準拠しています。この研究では、浙江中医薬大学の実験動物センターの8〜10週齢の成体の雌Wistarラットを使用しました。実験に先立ち、ラットに制御された環境(温度:23-25°C、湿度:40%-60%)で1週間適応食を与えました。ラットは、8:00から20:00までライトが点灯し、餌と水に無制限にアクセスできるように、12時間の明暗サイクルで維持されました。次のプロトコルでは、寒冷凝固およびうっ血モデルの確立を伴う PDM とへそ治療手順の HPM について説明します。このプロシージャの表現を 図 1 に示します。

1. 冷え凝固とうっ血を呈するPDMの確立

  1. ラットの発情周期を膣洗浄でスクリーニングします。
    1. 0.9%生理食塩水60μLを入れたピペットガンをラットの膣口に挿入し、ピペットで3〜4回上下した後、液体を吸い出してスライドガラスに落とします。
      注:洗濯または廃棄できるタオルでネズミを包むのが適切です。
    2. 乾燥させた内容物を95%エタノール60μLで8分間加えて固定し、内容物をすすぎ乾燥させます。0.1%メチレンブルー染色液を添加し、光から10分間インキュベートします。その後、内容物をすすぎ、乾燥させます。
    3. 顕微鏡で観察し、画像を取得します。
      注:白血球が多く、核上皮細胞がほとんど観察されない場合は、発腸期が確認されます(図1B)。これらのラットを対照群、モデル群、灸群(n=6)に無作為に分けました。
  2. 冷え凝固とうっ血を呈するPDMモデル動物の構築
    1. 安息香酸エストラジオールを大腿部に10日間皮下注射(1日目 と10日目は ラットあたり0.5mg、2日目 から9日目は 0.2mg)して子宮の収縮を誘発します。
    2. モデリング26の1日目から5日目に、雌ラットを-20°Cの冷蔵庫に4時間置きます。4時間のインキュベーション期間中に、冷蔵庫のドアを途中で開けて30分間空気を交換してから閉めます。
    3. 最後の投与から24時間後に腹腔内注射によりオキシトシン(ラットあたり2U)を注射して、月経困難症を誘発します。.
      注:この研究は、寒冷凝固とうっ血月経困難症ラットモデルの準備に焦点を当てた以前に発表された研究に基づいています27。対照群には同量の生理食塩水を注入し、凍結手順はモデル群と同じでした。

2. 冷え凝固とうっ血を呈するPDMモデル雌ラットに対するHPMへそ療法

注:HPMへそ治療のための4つの最も重要な材料を準備します( 材料の表を参照)。

  1. 灸コーンを準備します。手で灸をこすり、紡錘形(直径0.8 cm、高さ0.8 cm)にします(図2A)。
  2. 真ん中に穴(直径1 cm、深さ0.8 cm)のある生地ボウルを作ります(図2B)。
  3. TCM粉末0.3gを秤量します(図2C)。
    注:Du Dongqing28によると、Corydalis yanhusuo、Evodia fructus、Olibanum、Baishao(Paeoniae Radix Alba)、Myrrh、Borneol、Wulingzhi(Trogopterus Xanthipes)のTCM粉末consists。
  4. ラットを固定するためのラットポーチを準備します。これにより、手術中もラットを安定させることができます。
    1. 布(縦×横:20cm×20cm)を切り出し、斜めに縫い合わせます。上部に呼吸用の小さな開口部を、ポーチの片側に灸用の穴(直径約5cm)を切り取ります。
    2. 袋の上端と下端に長さ約10cm、幅約1cmの布ロープをそれぞれ縫い付けてつなぎます(図2D)。
      注:実験者は、試験した動物のサイズに応じて、適切なサイズのラットポーチを作成できます。
  5. Shenque (CV8) ツボの正確な位置を見つけます。
    1. 文献29,30を参照すると、Shenque(CV8)をラットの腹部の正中線上、剣状突起と恥骨の上端を結ぶ線の上部2/3と下部1/3の交点に配置します(図1D)。
  6. Shenqueのツボの周りの毛を取り除きます。
  7. ラットをラットポーチに入れます。ラットの腹部を上にして、下肢と尾を露出させます。ラットの体の上部と下部、および尾を手術台にテープで固定します。
    注:ラットをつなぐときは、オペレーターは優しく、硬すぎないようにして、ラットにパニックを引き起こしたり、実験結果に影響を与えたりしないようにする必要があります。固定が緩んでいて、ネズミの死亡につながる可能性のある心臓に圧力がかからないようにしてください。
  8. Shenqueとその周囲の皮膚を75%エタノールを使用して消毒します。.
  9. ボウルを腹部に置き、その穴をShenqueのツボに向け、TCMパウダーをShenqueのツボに置きます。
  10. TCMパウダーに灸コーンをのせます。
  11. 灸コーンに火をつけ、前のコーンが燃え尽きたら新しいコーンを置きます。ラットを30分間治療します(図1E)。
    注:治療中は麻酔を使用しないでください。静かにしてください。灸中の過度の温度によって引き起こされる火傷を防ぐために、ラットを注意深く観察してください。

3. 行動テストの実施

  1. 各試験の前に、実験用ボックスを75%エタノールで拭いてください。
    注:オープンフィールドは、木箱カバーのない40 cm x 40 cm x 40 cmの立方体です。
  2. オキシトシン(2U)または0.9%生理食塩水を腹腔内注射した後、ラットをケージに入れます。
  3. ビデオカメラで30分間身もだえする行動を記録します。
  4. 身悶えレイテンシ(WL)と身悶えスコア(WS)を計算します。
    1. Schmauss31の方法に従って、ねじれ挙動を0から3までの4つのレベルに分割します。Schmaussの方法に基づいて動物を採点します。
      注:レベル0:通常の姿勢(手と爪がケージの底に平らになっているか、通常の探索的行動)。レベル1:体が左または右に傾いている。レベル2:後ろ足を伸ばし、後足の後ろを曲げ、骨盤を頻繁に回転させます。レベル3:腹部の筋肉の収縮、後ろ足の後方に伸びる。ラットは、身もだえ反応(腹部収縮、凹み、体幹および後肢の伸展、片肢の回転、子宮収縮)を示し、冷凝固血液うっ血型PDMの調製が成功したことを示しています。身悶えの潜伏期間は、オキシトシンの注射から身悶え反応が発生するまでの時間です。潜伏期間が30分を超えると、30分と計算されます。ツイストスコア=(0×回)+(1回×1)+(2回×2)+(3回×3)。

4. 行動試験後の検体採取

  1. ラットを手で持ち、深部麻酔のために3%ペントバルビタールナトリウム(1 mL / kg)を腹腔内に注射します。.
  2. ラットの体重を量って体重を測ります。
  3. 腹部の中央から皮膚と筋肉を切開して心臓を露出させます。
  4. 灌流針で心臓を頂点位置から挿入し、止血鉗子で灌流針を固定し、右耳介に小さな切り込みを入れます。
  5. 左心室と上行大動脈から0.9%生理食塩水を灌流し、ラットの肝臓と目の色が明るく白くなるまで投与します。.
  6. はさみを使って子宮を切り取り、重さを量ります。
  7. 子宮の重量と体重の比率を計算することにより、子宮指数を取得します。

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結果

本研究では、安息香酸エストラジオールとオキシトシンの併用により、HPMへそ療法の効果を観察するための冷冷凝固型およびうっ血型のPDMモデルを誘導した。まず、ラットの身悶え行動を観察することにより、冷え凝固とうっ血のPDMラットがうまくモデル化されたかどうかを判断し、ラットの痛み行動、モデリング、および子宮への治療をWS、WL、および子宮指数を?...

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ディスカッション

現在、冷冷凝固型とうっ血型を伴うPDMにはさまざまなモデリング方法がありますが、主な方法は、月経困難症のモデリングのためのオキシトシンと組み合わせた安息香酸エストラジオールであり、これに基づいて異なります。この研究では、モデリングに安息香酸エストラジオールとオキシトシンを組み合わせた全身凍結法を使用しました。全身凍結法の温度は-20°C...

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開示事項

著者は、宣言する利益相反を持っていません。

謝辞

この研究は、浙江省自然科学基金会、Exploring Program Q(LQ20H270012)、浙江伝統中国医学技術計画(NO.2020ZB124)、浙江中国医科大学研究プロジェクト(NO.2021JKZKTS056B)、および浙江中医科大学第三附属病院の病院レベルプロジェクト(NO.ZS22ZA01)。実験条件を提供してくださった浙江中医科大学実験動物センターと浙江省鍼神経学重点研究室に感謝いたします。

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資料

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% physiological salineHangzhou Gaosheng Biotechnology Co., Ltd.SLYSZ1AFor injecting the control group 
1 mL disposable sterile syringeChangzhou Yuekang Medical Equipment Co., Ltd.3000-0515-14For drug injection
3 mL (extended) Pasteur pipetteBeijing Lanjieke Technology Co., Ltd.YCKJ-HC-007245For mounting
75% disinfection alcoholHangzhou OUTOP Biotechnology Co., Ltd.N/AFor sterilizing the treatment site
Adhesive-coated glass slideZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.188105WFor HE staining
Biochemical incubatorShanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment FactoryN/AFor tissue dewaxing in HE staining
Cloth materialIn-house preparationN/APouch to hold rat
Digital manager slice scanning systemHamamatsuC13210-01For HE slice scanning
Disposable latex glovesGuangzhou Lige Technology Co., Ltd.LG10-102-1IFor use during operation
Estradiol benzoateHefei Xinkexin Animal Pharmaceutical Co., Ltd.N/AFor establishing dysmenorrhea model
Excelsior AS Fully automatic dehydratorThermo ScientificExcelsior ASFor HE staining tissue dehydration
Female Wistar ratsLaboratory Animal Center of Zhejiang Chinese Medicine UniversityN/A220–250 g
FlourIn-house preparationN/AFor herbs-partitioned moxibustion treatment
ForcepZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.lsnzFor specimen collection
Formaldehyde Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd.441244-1KGFor tissue fixation
Gemini AS slide stainerThermo ScientificGemini AS Staining machine
HemostatZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.lsnzFor specimen collection
HistoCoreLeica ( Arcadia H )14039357258For HE staining tissue embedding
Medical cotton ball sterileThe Third Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical UniversityN/AFor sterilize the tratment site
Methylene blue staining solution (0.1%)Beijing Honghu United Chemical Products Co., Ltd.G1300For screening estrous cycle
Microdissection ShearsHangzhou Gaosheng Biotechnology Co., Ltd.XWJ12AFor specimen collection
Microscope cover glass (24 mm x 50 mm)Hangzhou Zhengbo Biotechnology Co., Ltd.10212450CFor HE staining
MicrotomeLeica MicrosystemsRM2255For tissue sectioning
Midea freezerHefei Midea Refrigerator Co., Ltd.N/AFor establishing dysmenorrhea model with cold coagulation and blood stasis
Molar forcepsHangzhou Zhengbo Biotechnology Co., Ltd.YGJD-11For specimen collection
Mounting mediumHangzhou Gaosheng Biotechnology Co., Ltd.CS9603-100mLFor tissue mounting
Moxa stickThe Third Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical UniversityN/AFor herbs-partitioned moxibustion treatment
Pentobarbital sodiumHangzhou Dawen Biological Co., Ltd.N/AFor specimen collection
Phosphate Buffered Saline (PBS)Hangzhou Gaosheng Biotechnology Co., Ltd.P1010-2LFor specimen collection
Scissor Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.lsnzFor specimen collection
Sectioning bladeShanghai Saihan Technology Co., Ltd.LEICA-819-boxFor HE staining paraffin section preparation
ShaverShenzhen Cordes Electrical Appliance Co., Ltd.N/AFor shaving a rat's hair
Sodium ChlorideChemical Reagent Co., Ltd.A501218-0001For specimen collection
SucroseZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.S11055-500gFor gradient dehydration
Thermal insulation containerZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.lsbwx8lFor paraffin section dewaxing
Tissue embedding cassettes, rectangular in shape, with a breakable lid.Zhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.31050102WFor HE staining tissue embedding
Wide adhesive tapeZhejiang Tuzhi Pharmaceutical Technology Co., Ltd.N/AFor stabilizing rat during the treatment procedure

参考文献

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