まず、はさみと鈍い鉗子を使用して、麻酔をかけたマウスの皮膚を持ち上げて右頸静脈に切ります。頸静脈と周囲の組織の一部を露出させるのに十分な大きさの皮膚の丸い窓を切ります。脂肪組織、リンパ節、結合組織を鈍解剖法でそっと押しのけます。
次に、20ミリリットルの注射器に、摂氏37度に温めた生理食塩水を入れます。シリンジをシリンジ輸液ポンプに入れます。次に、27ゲージのバタフライニードルと関連するチューブをシリンジに取り付けます。
シリンジポンプを毎分0.5ミリリットルの流量に設定して、穿刺された静脈または動脈から血液を洗い流します。生理食塩水の流れを穿刺部位の真上ではなく、穿刺部位の側面に数ミリリットル配置します。頸静脈がきれいになったら、タイマーを開始します。
頸静脈と大腿動脈にそれぞれ30ゲージと33ゲージの皮下注射針を入手します。ベベルを上向きに回します。次に、針を頸静脈または大腿動脈に25度の角度で配置します。
時間を記録した後、容器の上部にすばやく穴を開けます。出血が完全に止まるまでにかかる時間に注意してください。灌流固定を開始する前に、血栓の形成を待ちます。
灌流が完了したら、穿刺部位と血栓で頸静脈の部分を解剖します。鋭利なハサミを使用して、血管セグメントの遠位端を横切って斜めに切り込みを入れ、血管セグメントの近位端を横切ってまっすぐに切り込みを入れます。次に、固定した組織を摂氏4度に24時間置きます。
翌日、カコジル酸ナトリウム緩衝液を、厚さ5mmのシリコンマットを含む35mmの培養皿に注ぎます。組織を緩衝液に慎重に移し、緩衝液に沈められていることを確認します。ステンレス製の細長いピンと一対の細い鉗子で、容器の両端をマットに慎重に固定します。
頸静脈を慎重に清掃します。マイクロハサミで、穿刺部位の反対側の血管壁を縦に切ります。容器をそっと開き、管腔内面を上にしてシリコンマットに固定します。
皿から緩衝液を取り除きます。次に、1%のパラホルムアルデヒドを加えて容器を沈めます。乾燥を防ぐために、すぐに皿に蓋をしてください。
