単離された胃腸マウス胚の同日ジェノタイピング

マウス胚から内臓卵黄嚢を単離した後、8ストリップポリメラーゼ連鎖反応またはPCRチューブで各卵黄嚢の消化に進みます。P20ピペットを使用して、19.3マイクロリットルのPCRテンプレートDNA溶解バッファーと0.7マイクロリットルの0.2マイクログラム/ミリリットルのプロテイナーゼKを各卵黄嚢サンプルに加えます。サンプルを10秒間ボルテックスします。

また、ストリップアダプター付きのミニ遠心分離機を使用して、サンプルを1000 Gで10秒間スピンダウンします。8ストリップPCRチューブを摂氏85度のヒートブロックに45分間入れ、5分ごとに5秒間ボルテックスします。45分後、チューブストリップを再び1000 Gで10秒間回転させてから、PCRを進めて目的の遺伝子同定を行います。

CreジェノタイピングのPCR反応を行うには、各卵黄嚢の8ストリップPCRチューブあたりに表示された成分を含むPCRマスターミックスを調製します。表示されたサイクルを使用して、PCRサーマルサイクル増幅プログラムの実行に進みます。次に、PCR産物を1%アガロースゲル上で実行し、ジェノタイピングの結論を導き出します。

残りの消化された卵黄嚢サンプルは、マイナス20°Cの冷凍庫に保管して長期保存します。PCR産物をアガロースゲル上で分離したところ、LoxP、野生型対立遺伝子、およびCre対立遺伝子の予想されるフラグメントサイズが見られました。