マルチビューイメージングを用いた絨毛膜内のゼブラフィッシュ胚の異なる向きの解析

まず、サンプルホルダーを組み立てて胚の位置を特定します。胚の入ったチューブを正しい直径の毛細血管に直接挿入します。次に、ライブスキャンを開始し、標本ナビゲーターを使用してナビゲートし、最初のビューを選択します。

このビューで、スライス間隔を設定し、その後に Z スタックの最初と最後のスライスを設定します。試料ナビゲーターで角度を変更して、次のビューに移動します。2 番目のビューの Z スタックを設定し、マルチビュー ダイアログ ボックスに情報を追加します。

すべてのビューを設定したら、各ビューの Z スタック情報、チューブの座標、角度仕様を含むテキスト ファイルにこの情報を保存します。次に、マルチビューダイアログボックスからすべての位置をクリアします。次に、ビーズが見える胚から離れた別のY座標に平行移動します。

この位置をマルチビューダイアログボックスに追加し、この位置を新しいテキストファイルに保存します。次に、テキストファイルが保存されているフォルダに移動し、Embryo PositionsファイルをBeads Positionsという名前の新しいファイルに複製します。「ビード位置」ファイル内のすべてのビューの Y 座標を、「ビーズ Y」ファイルの Y 座標で置き換えます。

その後、イメージングソフトウェアに戻り、Beads Positionsファイルをロードします。時系列オプションがアクティブになっている場合は、1 つのサイクルを選択して実験を開始します。「ビーズ画像をビーズとして保存」して、画像処理中にさまざまなビューを登録します。

次に、位置をクリアし、ソフトウェアに初期Embryo Positionsファイルをロードし、適切な時間間隔で目的のサイクル数を設定して実験を開始します。