Cette étude a été financée par les Instituts canadiens de recherche en santé et Génome Canada.JS détient bourses d&#39;aide salariale de la recherche médicale de l&#39;Alberta Heritage Foundationfor, Fondation des maladies du cœur du Canadaand l&#39;Association canadienne du diabète. Un merci spécial à M. David Wasserman et Bracy Bingle pour enseigner cette procédure pour le laboratoire Shearer.

<ol>
	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

Des procédures ont été approuvées par l&#39;Université de Calgary et de protection des animaux Utiliser Comité et respecter par l&#39;Association canadienne pour les directives de science de laboratoire pour l&#39;expérimentation animale. Les auteurs n&#39;ont aucun conflit d&#39;intérêts ou les divulgations.

Initialement développé pour enquêter sur sensibilité à l&#39;insuline chez l&#39;homme, la procédure de fixation a été adapté à d&#39;autres espèces, y compris des rats de laboratoire et les souris. Étude des modèles animaux d&#39;insulino-résistance fournit une aide significative dans la compréhension de la physiopathologie de la sensibilité à l&#39;insuline et des pathologies associées ainsi que l&#39;identification des interventions thérapeutiques qui ont une valeur clinique 1,2. Plusieu...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Nom du réactif </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr valign="top"><td> Tuyaux en polyéthylène Intramedic (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14 à 170-12B </td><td> Diamètre intérieur de 0,58 mm (0,023 &quot;) x diamètre extérieur de 0,965 mm (0,038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Silastic tube de laboratoire </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11 à 189-15C </td><td> Diamètre intérieur de 0,76 mm (0,030 &quot;) de diamètre x 1.65mm extérieur de (0,065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL tubes médicaux </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> Diamètre intérieur de 3,2 mm (0,125 &quot;) de diamètre x 4,7 mm d&#39;Outer (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> Gel de contrôle </td></tr><tr valign="top"><td> Stérile lame chirurgicale </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Courbé Micro pince à disséquer </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Droit Micro pince à disséquer </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hémostatique courbée </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hémostatique droite </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Gardes Astuce hémostatique </td><td> Robbins Instruments, Inc </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Ciseaux de chirurgie droites </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT multi-échantillon Luer Adapter </td><td> Terumo Medical Products </td><td> 810127A </td><td> Calibre 21, 1 po </td></tr><tr valign="top"><td> Introducteur de cathéter stérile </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14 aiguille de calibre Blunt </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> Calibre 14, 2 po </td></tr><tr valign="top"><td> Stérile suture chirurgicale </td><td> Johnson &amp; Johnson Medical Products </td><td> 1679H </td><td> Soie, taille 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Non stériles suture chirurgicale </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc </td><td> SP116 </td><td> Soie, taille 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Cotons-tiges </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tampons de gaze 4ply </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Clippers petits animaux sans fil </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> L&#39;isoflurane </td><td> Halocarbon Products Corp </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anesthésique panier </td><td> Benson Medical Industries, Inc </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> L&#39;éthanol à 70% </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Solution antiseptique Betadine </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Modèle 11 Plus pompe seringue </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Coupleurs tube acier inoxydable </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> Calibre 23, 0,3 po </td></tr><tr valign="top"><td> Tubes en acier inoxydable Bouchons </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> Calibre 23, 0,5 po </td></tr><tr valign="top"><td> Acier inoxydable Aiguilles Blunt </td><td> Instech Laboratories, Inc </td><td> LS22 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> 60 Degré Y Connecteurs </td><td> Petites pièces </td><td> STCY-22-05 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin micro-hématocrite Centrifugeuse </td><td> Iris Sample Processing </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Centrifugeuse Mini </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubes à centrifuger Micro </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubes à centrifuger 50ml polypropylène </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ml Seringues en plastique Astuce Slip </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml plastique Seringues Astuce Luerlok </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Injection anticoagulant de l&#39;héparine </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 102824 </td><td> Fabricant: LEO Pharma Inc Conc. 1000 UI </td></tr><tr valign="top"><td> Solution d&#39;EDTA </td><td> Promega Corp </td><td> V4231 </td><td> 0,5 M, pH 8,0 </td></tr><tr valign="top"><td> Saline </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> ABB7983154 </td><td> Fabricant: Chlorure de sodium à 0,9% de Hospira </td></tr><tr valign="top"><td> Dextrose à 50% </td><td> Vétoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Seringues à insuline 1ml </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Hémato-Seal scellant </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * microhématocrite Tubes capillaires </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra bandelettes de test </td><td> LifeScan, Inc </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra compteur de la glycémie </td><td> LifeScan, Inc </td><td> AW 085-314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Sodium pentobarbital </td><td> Ceva Santé Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Conc. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Red Tape Étiquetage de laboratoire </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Blue Tape Étiquetage de laboratoire </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Peser échelle </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Vortex </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Minuterie </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

Diabète de type 2 (DT2) est l&#39;augmentation rapide de la prévalence. Caractérisés par une production d&#39;insuline insuffisante ou l&#39;impossibilité d&#39;utiliser l&#39;insuline produite, les résultats DT2 chez des niveaux élevés de glucose dans le sang. Le «étalon-or» dans l&#39;évaluation de sensibilité à l&#39;insuline est une pince hyperinsulinémique euglycémique ou pince-insuline. Dans cette procédure, l&#39;insuline est perfusée à un taux constant résultant en une baisse de la glycémie. Afin de maintenir la glycémie à un niveau constant, le glucose exogène (D50) est injecté dans la circulation veineuse. La quantité de glucose perfusée pour maintenir une homéostasie est révélateur de sensibilité à l&#39;insuline. Ici, nous montrons la procédure de serrage de base dans la chronique cathétérisés, débridée, le rat conscient. Ce modèle permet au sang d&#39;être recueillies avec un minimum de stress pour l&#39;animal. Après l&#39;induction de l&#39;anesthésie, une incision médiane est faite et les artère carotide commune gauche et droite veine jugulaire sont cathétérisés. Cathéters insérés sont rincés avec du sérum physiologique hépariné, puis extériorisé et sécurisé. Les animaux sont autorisés à récupérer pendant 4-5 jours avant les expériences, avec un gain de poids contrôlée quotidiennement. Seuls les animaux qui regagner du poids à la pré-chirurgie niveaux sont utilisés pour des expériences. Le jour de l&#39;expérience, les rats sont mis à jeun et connectés à des pompes contenant de l&#39;insuline et D50. Glycémie de base est évaluée à partir de la ligne artérielle et a utilisé un indice de référence tout au long de l&#39;expérience (euglycémie). Suite à cela, l&#39;insuline est perfusée à un taux constant dans la circulation veineuse. Pour correspondre à la baisse de la glycémie, D50 est perfusé. Si le taux de perfusion D50 est supérieur au taux d&#39;absorption, une augmentation de la glycémie va se produire. De même, si le taux est insuffisant pour correspondre à l&#39;ensemble du corps l&#39;absorption du glucose, une baisse se produira. Titrage de glucose se poursuit jusqu&#39;au lectures de glucose stables sont atteints. Les niveaux de glucose et des taux de perfusion de glucose au cours de cette période de stabilité sont enregistrés et signalés. Les résultats fournissent un indice de sensibilité d&#39;insuline du corps tout entier. La technique peut être affiné pour répondre aux exigences spécifiques d&#39;expérimentation. Il est en outre renforcée par l&#39;utilisation de traceurs radioactifs qui peuvent déterminer stimulée par l&#39;insuline des tissus spécifiques captation du glucose ainsi que l&#39;ensemble du glucose du corps.

Watch this Scientific Journal Video about Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat at JoVE.com

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

La pince hyperinsulinémique-euglycémique est le «gold standard» pour l&#39;évaluation de l&#39;action d&#39;insuline. L&#39;insuline est perfusée à un taux constant stimulant l&#39;absorption du glucose. La quantité de glucose exogène infusé pour contrer cette baisse est révélatrice de sensibilité à l&#39;insuline. Voici la procédure est effectuée sur une conscience, rat effrénée.

Hyperinsulinémique euglycémique-Clamp chez le rat conscient

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

hyperinsulinemic-euglycemic-clamp-in-the-conscious-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

51.8K vues.  University of Calgary. La pince hyperinsulinémique-euglycémique est le «gold standard» pour l'évaluation de l'action d'insuline. L'insuline est perfusée à un taux constant stimulant l'absorption du glucose. La quantité de glucose exogène infusé pour contrer cette baisse est révélatrice de sensibilité à l'insuline. Voici la procédure est effectuée sur une conscience, rat effrénée.