The authors acknowledge the funding support from the Ministry of Education, Singapore, grant number MOE2010-IF-1-025.

全ての動物実験は、応用科学の学校、テマセク・ポリテクニックの動物のケアと使用委員会によって承認されました。 DMNの調製<ol><li> DMNのピペットを200μl（1グラム/ mlストック溶液）および注射用10 mg / mlでのDMN溶液を調製し、PBSの19.8ミリリットルを追加します。 注：DMNは発がん性です。 DMNを準備し、動物の注射を実行するためにヒュームフードを使用してください。 </li></ol> DMNの2.腹腔内注射<ol><li> 200グラム - 150の平均重量とWistar系雄性ラットを使用してください。実験開始前の7日 - 4匹のラットを順応させます。 </li><li> 12時間の明及び12時間暗サイクルで、22±1℃の室温でラットを維持します。ラット飼料および水を自由に提供します。 </li><li>毎日の食料や水の摂取量を測定します。体重を毎週測定します。 </li><li> 10 mg / kg体重の用量に基づいて、各ラットについてDMNの量を計算します。 25ゲージの針トンで1ミリリットル注射器を使用してくださいOシリンジにDMN液の計算量を描きます。 </li><li>腹腔内注射21用のラットを拘束。 </li><li>ラットを適切に抑制して、腹部の右下の象限に針を導入腹部空間内針の正しい配置を確認し、ゆっくりとDMN液を注入するために（何も吸引されるべきではない）、シリンジのプランジャーに戻って描画します。 </li><li> DMNの用量が投与されたときは、ゆっくりと針を撤回し、鋭利物のビンに廃棄してください。 </li><li> 4週間、週に3日間連続DMNの腹腔内注射を行います。毎日同じ時間に注射を管理します。注射の各週の開始時の体重に基づいて投与量を再計算します。 </li><li>生化学的パラメータを測定するために尾静脈から毎週採血：アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）22。 </li><li>商業獣医を使用して、血清ALTおよびASTを測定しますテスト化学分析装置。 </li></ol> 3.総審査及び肝臓の収穫<ol><li> 100 mg / kg体重の用量でのペントバルビタールの腹腔内注射によって、ラットを安楽死させます。ハートビートの不足のためにチェックすることによって死を確認してください。 </li><li>死後の準備と腹部を上に向けた状態で背側横臥位で解剖ボードにパーキンソンら 23場所死んだラットによって記載されているように動物の状態を評価します。 </li><li>殺菌し、70％エタノールで皮膚を潤します。 </li><li>はさみを使用して、肛門からあごに皮膚にventrumの全長を切開し、皮膚を反映しています。はさみで、腹部の内臓を露出するように、剣状突起軟骨に肛門から腹壁を切開。 </li><li>異常をチェックするために、その場で腹部臓器を調べます。任意の色、大きさの変化、臓器の位置や腹腔内の流体の存在に注意してください。調べます臓器の一貫性とは、任意の臭気の存在に注意してください。 </li><li>ハサミやピンセットを使用して、その靭帯および添付ファイルのない肝臓全体を分析。 <ol><li>それが振動板に取り付けられている門から始まり、添付ファイルのすべての肝葉を解放するために働きます。慎重にすべての靭帯や血管を切ります。 </li></ol></li><li>ペトリ皿に肝臓を転送し、肝臓の重量を量ります。 </li><li> 5ミリメートル肝葉の厚いセクション - メスを使用して、2をカット。一貫性を保つため、常に同じ肝葉からサンプルを取ります。固定用緩衝ホルマリン10％にlobe.Immediately地の端から約1cm右側葉24から、厚さのウェッジ約5mmの直径を取ります。ホルマリンボリュームへの組織は1：10以上であることを確認してください。 </li><li>収穫や他の研究のために必要な場合は、直ちに、この時点で肝葉の（液体窒素を使用して）部分を凍結します。 （3.8）については、一貫性のために同じ肝葉からのサンプル。 </li></ol><ol><li> 24時間の最低10％緩衝ホルマリンで肝臓サンプルを修正しました。 </li><li>固定後、カセットに肝臓、場所をトリミングして、自動化された組織プロセッサのバスケットにロードします。 </li><li> 10％緩衝ホルマリンを含む最初のステーションにカセットでバスケットを置きます。カセットが完全に水没していることを確認します。サイクルが始まるまで彼らは、最大12時間のために、このチャンバ内に留まることができます。 </li><li> （50％、70％、90％、100％（2局）、キシレン（2局）及び流動パラフィンの濃度でエタノール：以下の溶液を含む連続したステーションを介して、1時間ごとに、カセットを回転させるために、組織のプロセッサをプログラム2局）。 </li><li>埋め込みステーションのワックス浴に肝臓サンプルを転送します。埋め込みマシンは、少なくとも1時間早くオンになっていることを確認してください。 </li><li>予熱した鉗子（65°C）を使用して、ワットから各カセットを削除埋め込みマシンの温かいプレート上に斧風呂と場所（65°C）。半分まで（65℃に予め温めておいた）ステンレス製のベースモールドに液体パラフィンを十分に分配します。金型内にカセットから肝臓の一部を転送します。金型の底の平らな（顕微鏡で検査する）試験片を切断面に配置されていることを確認してください。 </li><li>流動パラフィンで完全に金型を記入し、上に空のカセットを装着し、少なくとも30分間冷却するために埋め込み機の4℃のプレート上に金型を配置します。 </li><li>ワックスが冷却固化していることを確認し、金型からパラフィンブロックを削除します。ブロックは、簡単に飛び出すと、スティックまたは割れないようにしてください。この問題が発生した場合、ブロックを溶融し、この手順を繰り返します。それは固化後、パラフィンブロックを区分することができます。ブロックは、長年にわたって室温で保存することができます。 </li><li>ワックス層まで、10ミクロンの厚さでミクロトームやセクションにパラフィンブロックを配置埋め込まれた肝臓組織が見えるようにするために十分に除去されています。 </li><li> 5μmの厚さにカットするミクロトーム上で設定を変更します。鉗子を使用して、エッジでそれを保持することによっても切断した断面をピックアップし、慎重に40℃の温度で水浴中でセクションをフロート。 </li><li>そっとフローティングセクションの下に清浄なスライドガラスを配置し、スライドガラスの表面上に持ち上げます。一晩37℃で暖かいスライド上にスライドを配置します。 </li></ol> 5.マッソントリクローム染色<ol><li>次のように汚れを適用する前に、ワックスを除去し、組織を再水和するためにスライドを扱います： <ol><li> 5分間キシレン中のセクションを浸し。 2回繰り返します。 </li><li> 3分間100％エタノール中にセクションを浸し。 1倍を繰り返します。 </li><li> 90％、80％および70％エタノールの次の溶液で1分間ごとに切片を浸し。 </li></ol></li><li>スライド上の既存のエタノールを除去するために水道水でスライドをすすぎます。 </li><li>核を染色するために10分間鉄ヘマトキシリン​​でスライドを浸し。 </li><li>スライドから余分な汚れを除去するために水でスライドを洗浄します。 </li><li>細胞質を染色するために2分間ビーブリッヒスカーレット - 酸性フクシンでスライドを浸し。 </li><li>水でスライドを洗浄します。 </li><li>アニリンブルーの取り込みを促進するために10分間リンタングステン/リンモリブデン酸溶液にスライドを置きます。使用の2ラウンド後にリンタングステン/リンモリブデン酸溶液に変更します。 </li><li>コラーゲン繊維を染色するために10分間アニリンブルー溶液中にスライドを配置します。 </li><li>水で余分な汚れを洗浄し、分化は、より繊細で透明なスライドの色をレンダリングするために場所を取ることができるように1分間1％酢酸溶液中でスライドを配置します。 </li><li>水でスライドを洗浄し、組織切片を脱水するために進んでください。次のように脱水手順は次のとおりです。 </li><li>以下のconceで、10秒間連続してたびに、スライドを浸しエタノールのntrations：70％、80％、95％、100％。 </li><li> 100％エタノールで30秒間スライドを浸します。 1倍を繰り返します。 </li><li>エタノールを除去するために5分間のキシレンの3局各々を通ってスライドを洗浄します。 </li><li>取付け媒体（ 例えば 、DPXの封入）で試料上にガラスカバースリップをマウントし、乾燥させます。 注：DPXは、速乾性の合成樹脂で汚れを維持​​し、組織切片を保護します。 </li></ol>肝臓のマッソンのトライコームステンドセクション6.線維症スコアリング<ol><li>獣医病理学者を持っている25のスコア線維症に応じて線維症の重症度を評価します。線維化スコアは盲検法で独立して2または3の病理学者によって行われた場合には最適だろう。このようなシナリオでは、スコアリングの違いを整理して議論し、グループ見直し後の最終的なスコアを得ます。 </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>スコア</td><td>説明</td></tr><tr><td> 0 </td><td>いいえ線維症はありません</td></tr><tr><td> 1 </td><td>短い線維性中隔の有無にかかわらず、いくつかのポータルエリアの線維性拡大、 </td></tr><tr><td> 2 </td><td>短い線維性中隔の有無にかかわらず、ほとんどのポータルエリアの線維性拡大、 </td></tr><tr><td> 3 </td><td>ほとんどのポータルエリアの線維性拡大、ポータルに時折ポータル（PP）ブリッジング</td></tr><tr><td> 4 </td><td>中央（PCにマークされ、ブリッジング（（PPをポータルにポータル）だけでなく、ポータルとポータルエリアの線維性拡大） </td></tr><tr><td> 5 </td><td>時折小結節（不完全な肝硬変）と（PPおよび/またはPC）の橋渡しマーク</td></tr><tr><td> 6 </td><td>可能性や明確な肝硬変、 </td></tr></tbody></table> 表1：マッソンのトライコーム染色された肝臓切片25 を 読み出すための線維化スコア 。

<ol>
	<li>Magee, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+liver+injury;+the+metabolism+of+dimethylnitrosamine.">Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine.</a> Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).</li><li>Pritchard, D. J., Butler, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis-the+mechanism+of+cell+death+in+dimethylnitrosamine-induced+hepatotoxicity.">Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity.</a> J Pathol. 158 (3), 253-260 (1989).</li><li>Madden, J. W., Gertman, P. M., Peacock, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylnitrosamine-induced+hepatic+cirrhosis:+a+new+canine+model+of+an+ancient+human+disease.">Dimethylnitrosamine-induced hepatic cirrhosis: a new canine model of an ancient human disease.</a> Surgery. 68 (1), 260-267 (1970).</li><li>Jenkins, S. A., Grandison, A., Baxter, J. N., Day, D. W., Taylor, I., Shields, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dimethylnitrosamine-induced+model+of+cirrhosis+and+portal+hypertension+in+the+rat.">A dimethylnitrosamine-induced model of cirrhosis and portal hypertension in the rat.</a> J Hepatol. 1 (5), 489-499 (1985).</li><li>J&#233;z&#233;quel, A. M., Mancini, R., Rinaldesi, M. L., Macarri, G., Venturini, C., Orlandi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morphological+study+of+the+early+stages+of+hepatic+fibrosis+induced+by+low+doses+of+dimethylnitrosamine+in+the+rat.">A morphological study of the early stages of hepatic fibrosis induced by low doses of dimethylnitrosamine in the rat.</a> J Hepatol. 5 (2), 174-181 (1987).</li><li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characteristics+of+dimethylnitrosamine+induced+fibrotic+liver+collagen.">Molecular characteristics of dimethylnitrosamine induced fibrotic liver collagen.</a> Biochim Biophys Acta, Protein Struct Mol Enzymol. 1292 (2), 215-222 (1996).</li><li>Winwood, P. J., Arthur, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cells:+their+activation+and+role+in+animal+models+of+liver+injury+and+human+liver+disease.">Kupffer cells: their activation and role in animal models of liver injury and human liver disease.</a> Semin Liver Dis. 13 (1), 50-59 (1993).</li><li>Nakamura, T., Sakata, R., Ueno, T., Sata, M., Ueno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+transforming+growth+factor&#946;+prevents+progression+of+liver+fibrosis+and+enhances+hepatocyte+regeneration+in+dimethylnitrosamine-treated+rats.">Inhibition of transforming growth factor&#946; prevents progression of liver fibrosis and enhances hepatocyte regeneration in dimethylnitrosamine-treated rats.</a> Hepatology. 32 (2), 247-255 (2000).</li><li>Shek, F. W., Benyon, R. 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II. Electron immunohistochemical studies in rats with CCl4-induced cirrhosis.</a> Lab Invest. 53 (2), 166-186 (1985).</li><li>Pritchard, M. T., Apte, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+to+Study+Liver+Regeneration.">Models to Study Liver Regeneration.</a> Liver Regeneration. , 15-40 (2015).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Marques, T. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+Blood+from+the+Lateral+Tail+Vein+of+the+Rat.">Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat.</a> J Vis Exp. (99), (2015).</li><li>Parkinson, C. M., O'Brien, A., Albers, T. M., Simon, M. A., Clifford, C. B., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Necropsy+and+Selected+Tissue+and+Sample+Collection+in+Rats+and+Mice.">Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).</li><li>Ishak, K., Baptista, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+grading+and+staging+of+chronic+hepatitis.">Histological grading and staging of chronic hepatitis.</a> J Hepatol. 22 (6), 696-699 (1995).</li><li>Sant'Anna, L. B., Sant'Anna, N., Parolini, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+computer+assisted+image+analysis+for+identifying+and+quantifying+liver+fibrosis+in+a+experimental+model.">Application of computer assisted image analysis for identifying and quantifying liver fibrosis in a experimental model.</a> J Comput Interdiscip Sci. 2 (2), 139-148 (2011).</li></ol>

著者は、彼らが競合する金融利害関係を持たないことを宣言します。

我々は、肝線維症の動物モデルを作るために、肝臓線維症の重症度を評価するための方法を記載しています。 DMNの適切な投与量を提供し、毎週の腹腔内注射のスケジュールに固執することは重要です。実験が進むにつれて、ラットを計量し、DMN注射の各週の開始時に投与量を再計算することが重要です。 DMNは毒性があり、ヒュームキャビネットに処理する必要があることに注意してくださ?...

DMNは、強力な肝臓特異的毒素です。その代謝、組織分布、およびラットの肝臓への損傷を引き起こす能力は、マギー1によって報告された、およびアポトーシスによる肝細胞の損傷および細胞死のメカニズムは、プリチャードとバトラー2により説明しました。この化合物の断続的投与は、イヌ及びラット3,4における肝線維症を誘発することが報告されました。 機構及び肝線維症の形態学的変化は、広範囲に、このモデルを用いて研究されてきました。ラットを用いた初期の研究では、DMNと3週間の処置は、脂肪症5せずに小結節性肝硬変に続く中心性出血性壊死を生じました。これは、初期の線維症で、形成されたコラーゲンは、よりクロスタイプIIIは、タイプI 6よりもより顕著であることと関連していたことが示されました。他の原因と共通で、DMN誘発性線維変化はクッパー細胞の増加と関連していました。私が存在する肝​​マクロファージn個の正弦波。これらの細胞は、筋線維芽細胞に変形し、線維症7における主要な問題である細胞外マトリックスの過剰な量を生産します。 細胞シグナル伝達の観点から、中村らは 、TGF-βは、肝線維症8の進行において重要な役割を果たしていることを実証しました。これらは、特に、TGF-βシグナル伝達を阻害するために、短縮型、II型TGF-β受容体を発現するアデノウイルスを使用します。対照群と比較した場合、これらのラットにおける肝線維症は、見事DMN処理の間に停止しました。他の研究では、TGF-βの抑制は肝線維症の開発9,10の緩和につながることを確認しました。モデルはまた、抗線維化療法の11のための薬物標的として使用することができる他の線維症のマーカーおよび蛋白質を同定するための包括的遺伝子プロファイリング研究に使用しました。 他の化学物質は、チオアセトアミド（TAA）及びcを含む肝線維症を誘導するために使用しましたアルボン四（ 四塩化炭素）。 TAAは、ラットで、後にマウス12で最初に使用されました。このモデルの利点は次のとおりです。飲料水中の化学物質管理の容易さ、特性小結節性肝硬変と生化学的変化とモデルの再現性を。短所は次のとおりです。肝線維症のための3ヶ月の長い期間が開発し、肝線維症の誘導のための分子機構の理解の欠如します。 四塩化炭素については、その使用は、次の理由で減少している：それは人間の肝疾患を模倣しないオゾン層への有害な影響を持っている、動物に痛みや苦痛を引き起こし、人間に対して非常に毒性であり、その取り扱いに特に注意を必要とし、処分13,14。 肝硬変のための実験モデルとして（外科的介入によって）長時間の胆管閉塞は、最初Kountouras ら 15により報告されました。この方法は、ヒトおよび動物に対して非毒性です。 However、開発するために、肝線維症のために必要な時間が変化します。マルケスら 16で30のレポートのレビューは、肝線維症を開発するために、それは手術後4週間に7日から取ったことがわかりました。説明病理学的変化は、人間の慢性胆管線維症のものを模倣したモデルは、この分野に興味を持つ研究者にとって、より適しているだろう。 要約すると、4週間にわたってラットにおけるDMNの一定用量の断続的な投与は、ヒト疾患を模倣肝線維症を生成します。投与したラットでは肝損傷および実質線維症4,17の漸進的発達を示しています。疾患の進行および重症度、特定の時点で血液試料または動物の犠牲を介して監視することができ、効果が18高度に再現可能です。したがってこのモデルは広く肝線維症及び肝硬変のメカニズムを研究するため、ならびに潜在的な抗線維化剤10,19,20をスクリーニングするために使用されてきました。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dimethylnitrosamine</td>
			<td>Wako</td>
			<td>147-03781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sinopharm chemicals</td>
			<td>F63257009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson trichome stains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aniline Blue</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#42755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid Fuschin</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>RT42685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scarlet Red</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#26905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic Acid Hydrate</td>
			<td>ALFA AESAR</td>
			<td>ALFA40116.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomolybdic Acid Hydrate</td>
			<td>Sigma SG</td>
			<td>221856-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigert&#39;s Iron Hematoxilyn</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.15973.0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX Mounting Medium</td>
			<td>Merck</td>
			<td>HX066873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica TP 1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>&#160;Sakura Tissue Tek TEC5 Embedding System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica RM 2235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet Test Analyzer</td>
			<td>Idexx</td>
			<td>Vet Test 8008</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the dimethylnitrosamine induced liver fibrosis model in the rat

4~6週齢の雄Wistarラットは、肝線維症の動物モデルを作製するために使用しました。プロセスは、1週間に3日間連続して腹腔内投与し、10mg / kgのジメチルニトロソアミン（DMN）の投与4週間が必要です。 DMNが知られてhepatoxinと発がん性物質であるとして腹腔内注射は、ドラフト内で行いました。モデルにはいくつかの利点を有します。まず、肝臓の変化は、連続的に、または関心のある特定の段階で研究することができます。第二に、肝疾患の段階は、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）酵素を測定することによってモニターすることができます。第三に、異なる段階での肝臓損傷の重症度は、マッソントリコーム染色された肝臓組織の組織学的検査に続いて、指定された時点で動物を屠殺することにより確認することができます。 DMN投与の4週間後、典型的な線維化スコアが5 Ishakのスケールで6です。モデルは、一貫して再現することが可能となっています広く潜在的な抗線維化剤の有効性を評価するために使用されます。

DMN処理ラットは体重を減らすとフリル被毛とあまり活発になります。 DMN処理ラットの平均体重の有意な損失があります。最初のDMN処理の2週間後に検出し、この差を週3とDMN処理（ 図1a）の後に4を介して残っています。ラットは、連続週間にわたってDMNを受信すると、肝臓へのダメージは、それが小さくなるようになります。肝臓インデックス。最終体重...

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The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

ラットにおけるジメチルニトロソアミン誘発性肝線維症モデル

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

11.9K ビュー.  Temasek Polytechnic. We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

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A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

ラットにおける慢性栄養注入のモデル

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

医学

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

脛骨神経切断 - マウスにおける脱神経誘発性骨格筋萎縮のために標準化されたモデル

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

ラット肝臓肝門部クランプモデルを用いたダイレクトセグメント別肝臓内送達方法

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

肝のパーティションを関連付けると段階的な肝切除 (ALPPS) プロシージャの門脈結紮ラットモデル

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. To better understand the mechanism behind these surgical procedures, a rat partial liver transplantation (PLTx) model was established for relevant surgical studies. Because of the complexity of the rat PLTx model, a protocol with detailed descriptions is required. An article published previously reported a protocol in which ex vivo hepatectomy was used to achieve 50% rat PLTx. In contrast to this protocol, we introduced a re-arterialized PLTx with an in vivo 70% hepatectomy. An updated vessel-oriented hepatectomy was incorporated into the rat PLTx to refine the microsurgical procedure. The portal veins and hepatic arteries of the left lateral lobe and the median lobe were individually dissected and ligated before removal of the liver parenchyma, thereby decreasing the probability of bleeding in the remnant liver stump. Furthermore, an end-to-side vessel anastomosis between the common hepatic artery and the enlarged proper hepatic artery was introduced to re-arterialize the hepatic artery. By using this end-to-side vessel anastomosis technique, the diameter of the anastomosis was enlarged, thereby decreasing the difficulty of hand suture and maintaining a high rate of anastomotic patency. Moreover, the cuff anastomosis of the infrahepatic vena cava was slightly modified. A section of circumferential liver parenchyma around the vena cava of a recipient was preserved during cuff anastomosis to maintain the three-dimensional shape of the vascular lumen. This section of liver parenchyma was removed after completing the anastomosis. With this modification, the step involving placement of stay sutures was omitted, thereby further shortening the cuff anastomosis time. By using this protocol of rat PLTx, a low liver enzyme level, an intact liver lobular architecture and a high survival rate were achieved after microsurgery.

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Here, a protocol involving re-arterialized rat partial liver transplantation is presented. Specifically, 70% liver was resected in vivo by using an updated technique of vessel-oriented hepatectomy. The hepatic artery was reconstructed in an end-to-side manner. The cuff technique was modified to shorten the anastomosis time of the infrahepatic vena cava.

再門脈部分肝移植のラット体内血管指向 70% 肝切除

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of group 2 PH, due to mitral stenosis (MS), to facilitate the investigation of disease mechanisms and potential therapeutic strategies. We present a novel rat model of pulmonary venous congestion-induced pulmonary venous arterialization and group 2 PH caused by left atrial stenosis (LAS). LAS is achieved by constricting the left atrium using a half-closed titanium clip. After the LAS surgery, a rat model with a transmitral inflow velocity greater than or equal to 2.0 m/s on echocardiography gradually develops pulmonary venous arterialization and group 2 PH over an 8- to 10-week period. In this protocol, we provide the step-by-step procedure of how to perform the LAS surgery. The presented LAS rat model mimics MS in humans and is useful for studying the underlying molecular mechanism of pulmonary venous arterialization and for the preclinical evaluation of therapies for group 2 PH.

Left atrial stenosis (LAS) is a novel surgical technique used for studying group 2 pulmonary hypertension (PH) and mechanisms underlying pulmonary venous arterialization. Here, we present a protocol to constrict the left atrium using a titanium clip to cause pulmonary venous arterialization and moderate PH in a rat.

左心房狭窄による肺静脈動脈化術とグループ 2 肺高血圧症ラット

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

ラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

肝臓生物学のEx Vivoモデルとしてのマウス精密カット肝臓スライス

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

ラット肝移植モデルにおける血球力学的変化をシミュレートすることによる臓器虚血再灌流損傷

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...