Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırma ve Genom Canada.JS Enstitüleri tarafından desteklenen Alberta Mirası Foundationfor Tıbbi Araştırma, Kalp ve İnme Vakfı Canadaand Kanada Diyabet Derneği maaş desteği ödül tutar. Dr David Shearer laboratuar için bu yordamı öğretim Wasserman ve Bingle Bracy özel teşekkürler.

A: Arter ve Venöz Dolaşım Cerrahi Kateterizasyon Bölüm 1: Arter ve Venöz Kateter Hazırlık <ol><li> 15 cm kesin PE-50 (0,58 mm iç çapı (0,023) x dış çapı 0,965 mm (.038 &quot;). Kes bir 1mm silastik tüp bölümü (iç çap x 1.65mm 0.76mm (0.030&quot;) boncuk frenleyici olarak kullanmak için (0,065 &quot;) dış çapı). frenleyici boncuk yapıldıktan sonra kateter çekerek sıçan önler. </li><li> Mikro diseksiyon forseps ipuçları frenleyici boncuk lümen içine yerleştirin ve nazikçe açılması daha geniş germek için ayrı forseps ipuçlarını tutun. Başka bir çift mikro diseksiyon forseps kullanarak, frenleyici boncuk lümenine silastik tüp kaydırın. Güçlü bir yapıştırıcı tutkal (Loctite Super Glue) ile sabitleyin. Boncuk kateter etrafında düz olmalı. Kateter kurumasına izin verin (24 saat). </li><li> 300 gram sıçan için, arter hattı ~ 2.7cm juguler hattı ~ 3.2cm ise kısıtlama boncuk. Frenleyici Kateter uzunlukları, vücut ağırlığının her 100g artış 0.5cm tarafından ayarlanır. Bu olabilir ponksiyon yerleştirilmesi sırasında damar kateter kenarları konik etmeyin. </li><li> Ameliyattan hemen önce, heparinize salin (10U/ml) çizgileri doldurmak, bir paslanmaz çelik boru fiş ve sterilize etmek için etanol (% 70) ile her iki ucunda mühür. Hava takmadan önce kuru. </li></ol> Bölüm 2: Cerrahi Hazırlık <ol><li> Usul, Calgary Hayvan Bakım Üniversitesi tarafından onaylanan ve Komite kullanın ve theCanadian Derneği tarafından Laboratuvar deneyleri için Zootekni kurallarına uymak. Aşağıda belirtilen usul yetişkin erkek Sprague-Dawley rat (~ 300g) yapıldı. Enjektabl anestezikler kullanmak mümkün olsa tüm prosedürler, izofluran altında yapılmaktadır. Tüm cerrahi işlemler aseptik teknikler sağlamak için yapılır. Cerrahi ekipman, bardak ve heparinize salin otoklavda sterilize edilir. Cerrahi eldiven, şırınga ve pamuk uçlu aplikatörler satın tedarikçi sterilize edilir. </li><li> Sıçan tartılır ve sonuç kaydedilir. Ağırlığı hayvan ameliyat sonrası izleme açısından önemli olacaktır. Ameliyat öncesi seviyelerine tekrar kilo Ancak hayvanların deney için kullanılmalıdır. Bir anestezi kutusunda sıçan (isoflurane% 3) anestezisi. Bir burun konisi kullanılarak ameliyat sırasında izofluran 2% ~ sıçan tutun. Cerrahi asepsi teşvik dezenfekte alanda yapılmalıdır. </li><li> Cerrahi alan (boyun ve omuz bıçakları) saç kaldırarak hayvan hazırlayın. Küçük bir saç kesme makinesi ya da kimyasal tüy dökücü kullanılabilir. Ameliyat yapılacak yerden ayrı bir alanda bu yordamı gerçekleştirin. </li><li> Güvenli cerrahi tablo hayvan. Hayvan varlığı için ayak / göz refleksleri kontrol ederek tamamen uyuşturulduktan olun. Uygun bir cilt dezenfektan ile (% 70 etanol,% 70 etanol ile takip betadin fırçalayın takip) cerrahi siteleri hazırlayın. </li></ol> Bölüm 3: Cerrahi <ol><li> Sternum (forseps ile medial ekseni boyunca uzunlamasına deri Pick up ve makas veya bistüri ile kesme) küçük düşey orta hat kesi 1cm üstün olun. </li><li> Sol sternomastoid kas maruz mikro diseksiyon forseps kullanarak teşrih Blunt. Sol karotis arter yaklaşık 1cm ortaya çıkarmak için bu kas yansıtmaktadır. Karotis arteri altında mikro diseksiyon forseps arter yerinde tutmak için kullanın. Yavaşça karotis arteri bağ dokusu alay. Vagus sinir, arter veya sinirin zarar vermeden arter izole etmek için çok önemlidir. 4-0 ipek sütür (bu ameliyat sırasında karotis arteri işlemek için kullanılacaktır) sefalad sonuna Arter sonra arter izole edin. Not: 4-0 sütür kullanmadan önce% 70 etanol ile sterilize edilmelidir. </li><li> Mikro forseps diseksiyon, dişli ile gemi Kelepçe. 21 gauge VENOJECT Multi-örnek Luer Adaptör ile ponksiyon bağlandı sonuna. Paslanmaz çelik borular fişi çıkarın ve dikkatli bir şekilde steril bir kateter uygulayıcıya artere itiraf yardımı ile kateter yerleştirin. Kateter sağlanması forseps ile güvenli, kısmen arter sıkma mikro diseksiyon forseps bırakın ve boncuk kateter takmadan devam edin. Bu noktada, kateterin ucu aortik ark olmalıdır. Kateter serbest bırakmak için dikkat edin, geminin basınç zorlayacaktır. </li><li> 4-0 güvenli bir şekilde aşağıda boncuk iki sütür ve üzeri bir kravat ve kateter örnek olacağını onaylamak. 10U/ml heparinize salin ile yıkayın. Re-plug, paslanmaz çelik bir boru fişi ile kateter dış sonu. </li><li> Aynı kesi kullanarak, künt sağ eksternal juguler ven maruz teşrih. Dikkatli bir şekilde izole etmek ve ipek sütür ile sefalad Arter. Delinme, 21 gauge VENOJECT Multi-örnek Luer Adaptör ile ven. Paslanmaz çelik borular fişini çıkarın ve steril c kateter eklemekaltında boncuk boncuk ve kravat iki sütür atheter uygulayıcıya. Boncuk üzerinde bir üçüncü dikiş Kravat ve bu örnekleri doğrulamak. 10U/mL salin heparinize venöz hat ile yıkayın. Re-plug paslanmaz çelik boru fiş ile dış kateterin ucu. </li><li> Tünel 14-gauge künt deri altına iğne ve kürek kemikleri arasındaki sırt kesi yapmak. Sıçan arka exteriorize iğne üzerinden kateter Konu. Hattının yaklaşık 4cm görülebilir. Tygon S-50-HL Tıp Boru 0.5cm Kes, exteriorized kateter çevresinde yer ve gerekli (arter, ven mavi kırmızı) gibi bir bant ile güvenli. , Açıklığı sağlamak 150U/ml ile yıkayın ve doldurmak için tekrar test kateterler pıhtılaşmasını önlemek için tuzlu heparinize. </li><li> 3-0 ipek sütür ile bütün kesiler kapatın. Kafesin altındaki gıda, önceden ısıtılmış temiz bir kafese eğilimli Yeri sıçan. </li></ol> B: Postoperatif Bakım Bölüm 1: Acil Ameliyat Sonrası Bakım ve İzleme <ol><li> Sıçan kez tam ayaktan yeteneği ve uyanıklığı hayvan barınağı sıçan geri kavuşur. </li><li> 3-5 gün sıçan kurtarmak için izin ver. </li><li> Enfeksiyon, ağrı ve ağırlık değişimleri için günlük olarak izleyin. Enfeksiyon kesi siteleri, genel uyuşukluk ve / veya ağrı taburcu görülmektedir endişe olabilir. Ağrı, hunched duruş karıştırdı geri kürk ve ayakta ve / veya yeme davranış yokluğu belirtilir. Kilo kaybı, üç gün sonrası cerrahi ameliyatı hemen ardından deneyimli olabilir, ancak, kilo stabilize etmek ve / veya 5 gün içinde cerrahi öncesi ağırlığı% 10 içerisinde artış gerekir. Ciddi kilo kaybı, enfeksiyon, inme ve / veya ağrı gösterebilir. </li><li> Açıklığı sağlamak için günlük tekrar test kateterler. </li></ol> Bölüm 2: Kateter açıklık bakımı <ol><li> Her gün, post-op kurtarma sırasında 1ml Kayma İpucu Şırınga 150U/ml heparinize salin ile doldurmak ve künt, 22 gauge iğne ile kap. Künt iğne, diğer ucunda 23 Paslanmaz çelik boru kuplörü PE-50 boru 20cm içine eklenir. </li><li> 1 ml şırınganın geri kalanından daha yüksek boru kuplörü sonuna yerleştirme ve hat kabarcıkları dışarı iterek hava kabarcıklarını çıkarın. </li><li> Kelepçe arteryel hat fişi hemen altında hemostat ile sıçan dışsallaştırdığı. </li><li> Hemostat ikinci çifti kullanılarak çelik kateter fişi kaldırın. </li><li> Arteriyel hattı içine şırınga bağlı boru kuplörü takın ve dışsallaşmış arteriyel kateter kapatılmasıy hemostat serbest. </li><li> Şırınganın içine kateter arteryel kan aspire. Kateter kolaylıkla çekmek değilse bu çok nazik damar duvarına sıkışmış olması durumunda kateterin ucu çıkarmak için kateter yoluyla gömme çözüm küçük bir miktar itmek için gerekli olabilir. Kateter kan şırınga ulaştığında tamamen temizlenmiş oldu. </li><li> PE-50 tüp yakın 1ml şırıngayı Kelepçe ve şırıngaya atmayın. Taze 150U/ml heparinli serum fizyolojik ile dolu yeni bir şırınga ile değiştirin. Hortumun çözülme ve yeni bir şırınga tutan dik, yukarı ve hat uzak olası yeni bir hava kabarcıklarını çıkarmak için, bir parmak ile yeni bir şırınga fiske. Not: hava kabarcıklarını bir vuruş neden olabilir Bakım sağlanmalıdır. </li><li> Kateter hattı açık ve ücretsiz kan kadar 150U/ml heparinzed tuzlu su enjekte edilir. </li><li> Kelepçe arteryel hat boru kuplörü hemen altında hemostat ile sıçan dışsallaştırdığı. Arteriyel kateter hattı şırınga konektörü çıkarın ve paslanmaz çelik borular fişi ile değiştirin. </li><li> Dışsallaşmış arteriyel kateter kapatılmasıy hemostat bırakın. </li><li> Venöz hat için tekrarlayın. Ancak, düşük venöz basınç örnekleme nedeniyle çoğu zaman mümkün değildir. Minimum dirençle 150U/ml heparinzed tuzlu su ile aşılanmış ise kateterin damar yerleştirilmiş olması muhtemeldir. </li></ol> C: hiperinsülinemik öglisemik Kelepçe Bölüm 1: Kelepçe Set-up ve Hazırlık <ol><li> Sıçan tartılır ve ağırlığı kaydedilir. Bu insülin ve glukoz infüzyonu oranlarını belirlemek için gerekli olacaktır. 5h en azından deneme için önce Hızlı sıçan. Bu hayvan postprandiyal bir devlet olmasını sağlar ve şekeri besin kaynakları katkısı en aza indirilir. Aşırı hareketi sınırlar yataklar ile küçük bir kabı / kafes sıçan yerleştirin. Hayvan arkanı dön ve serbestçe damat gerekir. </li><li> Şekil 1&#39;de görüldüğü gibi hatları ve infüzyon pompaları ayarlayın. P50 bağlantı boru uzunlukları aşağıdaki gibidir: Y konnektör şırınga 8cm, sıçan için Y konnektör 15cm, arter hattı 20cm ve venöz hat uzunluğu 10cm. Paslanmaz çelik borular fişlerini çıkarın ve infüzyon sağlamak ve 10U/ml heparinize salin ile sırasıyla örnekleme juguler ve arteryel çizgiler yıkayın. </li><li> Insülin belirleyin<html> hacmi gereklidir. Bu, insülin düzeyi ve sıçan ağırlığına bağlı olarak değişecektir. Burada 4mU/kg/min 2uL/min bir oran uygulanır. Bu yüksek fizyolojik doz. Mümkünse, girişimleri infüzyon hacimleri sınırlamak için yapılmalıdır. İnsülin uygun seyreltilmiş olmalı ve plazma varlığında uygulanmalıdır. Tuzlu su% 3 sıçan plazma çözüm bu laboratuvarda insülin sulandırmak için kullanılır. İnsülin HumulinR 100U/ml (Eli Lily), diğer hızlı etkili insülin istihdam olmasına rağmen. Seyreltilmiş insülin infüzyon şırınga koymadan önce iyice karıştırılır olduğundan emin olun. </li><li> % 50 dekstroz hazırlayın. Bu infüzyon pompası enjektöre doğrudan monte edilebilir. Gelecek karışıklığı önlemek için &#39;şekeri&#39; ile pompa işaretleyin. Yeterli miktarda insülin ve glikoz için çalışma sağlamak için unutmayın. Kelepçe ~ 2s genellikle son. İşbu Protokol, 3ml şırıngalar kullanılır. </li><li> Harvard Apparatus Modeli 11 Plus Şırınga Pompalar üzerine yerleştirin glukoz ve insülin şırıngaları. Y-Konnektör ve hemostatla kelepçe hattı Avans glikoz. Hayvan önceden insülin, hemostatla hattı kelepçe. Kelepçe ve sıçan, deney başlamadan önce 30 dakika dinlenmek için izin. NOT: Hemostat ucu korumaları hatların sıkma kalıcı önlemek için tavsiye edilir. </li><li> Plazma toplama için santrifüj ve EDTA kaplı tüpler hazırlayın. Bu çalışmada hayvan kenetli sonra, ek kan örnekleri elde edilecektir. </li></ol> Bölüm 2: Deney Protokolü <ol><li> Bazal insülin örnek ve hematokrit örneği elde edilmelidir. Hematokrit örnekleme kan hacmi deney boyunca devam sağlar. Genellikle hematokrit düzeyi başlangıç ​​değerinin% 10&#39;dan fazla düşmemelidir. </li><li> Bazal glukoz örnek alın (One Touch Ultra LifeScan, Inc.) Bağlanarak tüm kan şekeri düzeyini belirlemek. Burada, biz euglycemia kelepçe, veya 5.0-5.5mm (Şekil 2). Her kan örneği sonra, pıhtılaşmayı önlemek için tuzlu heparinize 10U/ml küçük bir hacmi ile arteriyel satırı temizler. NOT: hiçbir pıhtıları veya hava kabarcıkları önce beslerken doğrultusunda emin olun. Bu hayvan bir vuruş verebilir. </li><li> Insülin infüzyonu başlatın. Her zaman noktasında glikoz izleme, 5-10dk aralıklarla kan şekeri atın. Kararlı bir duruma elde edilene kadar gerekli glukoz infüzyon hızı ayarlayın. Bu süreç genelde bir deneme yanılma süreci ve&gt; 2 saat 30 dakika sürebilir. Glisemi korumak için gerekli olan glikoz düzeyleri deney protokolünde, tür ve koşulları (Şekil 2) bağlıdır . </li><li> Kararlı hal glikoz düzeyleri, belirli bir aralık içinde üç ardışık okuma. Burada ~ 1mm içinde üç okuma (örneğin 4.8, 5.2, 5.6mM) kenetli olarak kabul edilir. Kararlı duruma ulaşıldığında, 30 dakika bir süre için glisemi korumak için gerekli olan glukoz infüzyon hızı kaydeder. Bu süre zarfında ek kan örnekleri elde edilebilir. En azından, ikinci bir plazma insülin örnek ve hematokrit örnek alınmalıdır. </li><li> Bir kez kelepçe hayvanlar, ileri analiz için toplanan daha fazla test veya ötenazi ve dokular için kullanılabilir tamamlandı. Hayvan bağlı olarak, kateter hatları 5-7 gün için patent kalabilirsiniz. </li></ol> D: hiperinsülinemik öglisemik (İnsülin) Kelepçe Sonuçlar Doğru yapıldığında, kelepçe prosedür sıçan kararlı durum insülin duyarlılığı değerlendirir. Kelepçe elde edilen veriler sunan, glikoz düzeyleri ve glukoz oranları belge esastır. 30 dakika (Şekil 3) en az bir zaman boyunca stabil glikoz düzeyleri kararlı bir duruma işaret etmektedir. Tüm kan şekeri ~ 1mm içinde muhafaza yalnızca glikoz stabil sayılır. Glikoz infüzyon oranları glisemi korumak için gerekli olan eksojen glikoz düzeyleri göstermektedir. Mümkün olduğu durumlarda, bu rakamlar tek, ortalama değeri (Şekil 4) daha ziyade bir zaman ders olarak gösterilmesi gerekir. Diğer önerilen önlemlerin rapor edilmesi, plazma insülin ve hematokrit. Belirlenmesi hem de açlık insülin düzeyleri ve insülin teyit kelepçeli başarıyla uygulanmıştır ve tedavi grupları arasında (Şekil 5) seviyelerinde herhangi bir farklılık tespit edecektir. Hematokrit önlemler başlangıçta ve insülin kelepçe sonuç elde edilmesi önerilmektedir (Şekil 6). Bu hematokrit seviyeleri, glikoz bertaraf etkisi yoktur, kan hacmi ve akış deney ve beraberindeki değişiklikler sırasında% 5&#39;ten fazla girmemektedir sağlamaktır. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 set-up Deneysel. Şekil 1 kelepçe prosedürü sırasında dizginlenmemiş, bilinçli sıçan gösterir. Kateterler kan örnekleme ve hayvan taşıma olmadan infüzyonları izin verir. Sola Pompalar insülin ve glikoz içerir. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 kelepçe işlemi sırasında veri bekleniyor. Temel ya da &#39;kelepçe&#39; elde edilene kadar bazal düzeyde bir kelepçe (euglycemia, 5mM) elde etmek için, eksojen glikoz düzeyleri (D50) manipüle edildi. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 kelepçe prosedürü plazma glukoz sonuçları bekleniyor. Hayvan &#39;kenetli&#39; olduğunda, kan şekeri, zaman ve deney grupları arasında nispeten istikrarlı. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig4.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 4 kelepçe prosedürü Temsilcisi glukoz oranları. Euglycemia korumak için gerekli ekzojen glukoz miktarı farklıdır. Bu bir kontrol (chow beslenen) ve yüksek yağlı beslenen hayvanlar (insülin dirençli) ile gösterilmiştir. Yüksek yağlı beslenen hayvan aşılanmış insülin duyarsız olması nedeniyle öncelikle glisemi korumak için aşılanmış daha az glikoz gerektirir. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig5.jpg" alt="Şekil 5" /> Şekil 5 sıçan Temsilcisi plazma insülin. Insülin klemp sırasında plazma insülin, oruç tuttuklarını, bazal plazma insülin daha yüksek olmalıdır. Bu insülin, insülin kelepçe düzgün sırasında hayvana verildi sağlar. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig6.jpg" alt="Şekil 6" /> Şekil 6 hematokrit Raporlama. Bazal hematokrit ve hematokrit deney sonrasında elde edilen ve rapor edilmelidir. Bu hematokrit düzeyleri aşırı arteryel kan örnekleme kaynaklanan bazal düzeylerinin% 5&#39;ten fazla girmemektedir sağlar.

<ol>
	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

Usul, Calgary Hayvan Bakım Üniversitesi tarafından onaylanan ve Komite kullanın ve Kanada Derneği Laboratuvar deneyleri için Zootekni kurallarına uymak. Yazarlar, çatışan çıkarları ya da açıklamalar var.

Başlangıçta insanlarda insülin duyarlılığı araştırılması için geliştirilmiş, kelepçe prosedürü şimdi laboratuvar sıçan ve fareler de dahil olmak üzere diğer türler adapte edilmiştir. Insülin direncinin araştırılması hayvan modellerinde insülin hassasiyeti ile ilgili patolojiler patofizyolojisi anlamanın yanı sıra klinik değeri 1,2 olan terapötik girişimlerin belirlenmesi önemli bir yardım sağlar. Hayvanlarda insülin duyarlılığını değerlendirmek için çeşitli y?...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Reaktifin Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr valign="top"><td> Intramedic Polietilen Boru (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-170-12B </td><td> İç çapı 0,58 mm (0,023 &quot;) x 0,965 mm Dış çap (0,038) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning silastik Laboratuvar Boru </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-189-15C </td><td> İç çapı 0,76 mm (0.030 &quot;) x Dış çapı 1.65mm (0.065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL Tıp Boru </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> 3.2mm (0.125 &quot;) İç çapı 4.7mm x Dış Çap (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Oyuncak </td><td> 32237 </td><td> Jel Kontrol </td></tr><tr valign="top"><td> Steril Cerrahi Bıçak </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Eğimli mikro Diseksiyon Forseps </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Düz Mikro Diseksiyon Forseps </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Eğimli Hemostat </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Düz Hemostat </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hemostat İpucu Muhafızları </td><td> Robbins Instruments, Inc. </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Düz Cerrahi Makas </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT Multi-Örnek Luer Adaptör </td><td> Terumo Tıbbi Ürünler </td><td> 810127A </td><td> 21 gauge, 1 inç </td></tr><tr valign="top"><td> Steril Kateter Introducer </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14-gauge Blunt İğne </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> 14 göstergesi, 2 inç </td></tr><tr valign="top"><td> Steril Cerrahi Sütür </td><td> Johnson &amp; Johnson Medikal Ürünler </td><td> 1679H </td><td> İpek, boyutu 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Non-Steril Cerrahi Sütür </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc. </td><td> SP116 </td><td> İpek, boyutu 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Pamuk Swablar </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 4ply tül Dokunmatik Yüzeyleri </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Küçük Hayvan akülü Clippers </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> İsofluranın </td><td> Halokarbon Ürünler Corp. </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anestezik Sepetim </td><td> Benson Tıp Industries, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> % 70 Etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betadine Antiseptik Çözümü </td><td> Batı İlaç Dağıtım Merkezi Ltd. </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Model 11 Plus Şırınga Pompa </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Paslanmaz Çelik Boru Bareller </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> 23 gauge, 0.3 inç </td></tr><tr valign="top"><td> Paslanmaz Çelik Boru Fiş </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> 23 gauge, 0.5 inç </td></tr><tr valign="top"><td> Paslanmaz Çelik Blunt İğneler </td><td> Instech Laboratories, Inc. </td><td> LS22 </td><td> 22 gauge </td></tr><tr valign="top"><td> 60 Derece Y-Konnektörler </td><td> Küçük Parçalar </td><td> STCY-22-05 </td><td> 22 gauge </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin Micro-Hematokrit Santrifüj </td><td> İris Örnek İşleme </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Mini Santrifüj </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Mikro Santrifüj Tüpleri </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 50ml polipropilen santrifüj tüplerine </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ml Plastik Kayma İpucu Şırınga </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml Plastik Luerlok İpucu Şırınga </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Heparin Antikoagülan Enjeksiyon </td><td> Batı İlaç Dağıtım Merkezi Ltd. </td><td> 102824 </td><td> Üretici: LEO Pharma A.Ş. Conc. 1000 IU </td></tr><tr valign="top"><td> EDTA Çözüm </td><td> Promega Corp. </td><td> V4231 </td><td> 0.5 M, pH 8.0 </td></tr><tr valign="top"><td> Tuzlu </td><td> Batı İlaç Dağıtım Merkezi Ltd. </td><td> ABB7983154 </td><td> Üretici: Hospira% 0.9 Sodyum Klorür </td></tr><tr valign="top"><td> 50% Dekstroz </td><td> Vetoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> 1ml İnsülin Şırınga </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Hemato-Seal Mastik </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Mikrohematokrit Kapiler Tüp </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra Test Stripleri </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra Kan Şekeri Ölçüm </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pentobarbitol Sodyum </td><td> Ceva Sante Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Kons. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Red Laboratuvar Etiketleme Tape </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Mavi Laboratuvar Etiketleme Bandı </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Ölçek tartılır </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Girdap </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Timer </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

Tip 2 diyabet (T2D) prevalansı hızla artıyor. Yetersiz insülin üretimi ya da yüksek kan glikoz düzeyleri insülin üretilen T2D sonuçları yararlanmak için yetersizlik ile karakterizedir. Insülin duyarlılığı değerlendirilmesinde &quot;altın standart&quot; bir hiperinsülinemik öglisemik kelepçe veya insülin kelepçe. Bu prosedürde, insülin, kan şekeri bir düşüş sonucunda sabit bir hızla doluyor. Kan şekeri sabit bir seviyede korumak için, eksojen glikoz (D50) venöz dolaşıma demlenir. Homeostazı korumak için aşılanmış glikoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. Burada, kronik kateterize dizginlenmemiş, bilinçli sıçan, temel kelepçe prosedürü göstermektedir. Bu model, hayvana en az stres ile kan toplanmasına izin verir. Anestezi indüksiyonu takiben, orta hat kesi yapılır ve sol karotis arter ve sağ juguler ven kateterize. Eklenen sonra exteriorized ve güvenli bir kateter heparinli serum fizyolojik ile temizlendi. Hayvanlar günlük olarak takip kilo alımı, deneyler için 4-5 gün önce kurtarmak için izin verilir. Sadece, ameliyat öncesi seviyelere ağırlığı yeniden bu hayvanların deneyler için kullanılır. Deney günü, sıçan, oruç tuttuklarını ve insülin ve D50 içeren pompalara bağlı. Temel glikoz arteriyel hattan değerlendirildi ve deney (euglycemia) boyunca bir kriter kullanılır. Bunu takiben, insülin venöz dolaşıma sabit bir hızla doluyor. Damla kan şekeri maç için, D50 demlenir. D50 infüzyon hızı alımını oranından daha büyükse, glikoz bir artış meydana gelecektir. Benzer şekilde, bu oran tüm vücut glukoz alımı maç için yetersiz ise, bir düşüş meydana gelecektir. Istikrarlı şekeri elde edilir kadar glikoz Titrasyon devam ediyor. Bu istikrarlı döneminde kan şekeri düzeyleri ve glukoz infüzyon oranları kaydedilir ve raporlanır. Sonuçlar tüm vücut insülin duyarlılığı bir dizin sağlar. Bu teknik spesifik deneysel gereksinimlerini karşılamak için rafine edilebilir. Bu doku spesifik insülin ile uyarılmış glukoz alımı yanı sıra tüm vücut glukoz ciro belirleyebilirsiniz radyoaktif izleyiciler tarafından daha da geliştirilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat at JoVE.com

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe insülin eylem değerlendirmesi için &quot;altın standart&quot;. İnsülin, glukoz alımını teşvik sabit bir hızla doluyor. Bu düşüşün karşı aşılanmış eksojen glukoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. İşte prosedür bilinçli bir dizginlenmemiş sıçan yapılır.

Bilinçli Rat hiperinsülinemik öglisemik Kelepçe

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

hyperinsulinemic-euglycemic-clamp-in-the-conscious-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

51.9K Görüntüleme.  University of Calgary. Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe insülin eylem değerlendirmesi için "altın standart". İnsülin, glukoz alımını teşvik sabit bir hızla doluyor. Bu düşüşün karşı aşılanmış eksojen glukoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. İşte prosedür bilinçli bir dizginlenmemiş sıçan yapılır.

Video: Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold standard" method for assessing insulin action in vivo. During an insulin clamp, hyperinsulinemia is achieved by a constant insulin infusion. Euglycemia is maintained via a concomitant glucose infusion at a variable rate. This variable glucose infusion rate (GIR) is determined by measuring blood glucose at brief intervals throughout the experiment and adjusting the GIR accordingly. The GIR is indicative of whole-body insulin action, as mice with enhanced insulin action require a greater GIR. The insulin clamp can incorporate administration of isotopic 2[14C]deoxyglucose to assess tissue-specific glucose uptake and [3-3H]glucose to assess the ability of insulin to suppress the rate of endogenous glucose appearance (endoRa), a marker of hepatic glucose production, and to stimulate the rate of whole-body glucose disappearance (Rd).
The miniaturization of the insulin clamp for use in genetic mouse models of metabolic disease has led to significant advances in diabetes research. Methods for performing insulin clamps vary between laboratories. It is important to note that the manner in which an insulin clamp is performed can significantly affect the results obtained. We have published a comprehensive assessment of different approaches to performing insulin clamps in conscious mice1 as well as an evaluation of the metabolic response of four commonly used inbred mouse strains using various clamp techniques2. Here we present a protocol for performing insulin clamps on conscious, unrestrained mice developed by the Vanderbilt Mouse Metabolic Phenotyping Center (MMPC; URL: www.mc.vanderbilt.edu/mmpc). This includes a description of the method for implanting catheters used during the insulin clamp. The protocol employed by the Vanderbilt MMPC utilizes a unique two-catheter system3. One catheter is inserted into the jugular vein for infusions. A second catheter is inserted into the carotid artery, which allows for blood sampling without the need to restrain or handle the mouse. This technique provides a significant advantage to the most common method for obtaining blood samples during insulin clamps which is to sample from the severed tip of the tail. Unlike this latter method, sampling from an arterial catheter is not stressful to the mouse1. We also describe methods for using isotopic tracer infusions to assess tissue-specific insulin action. We also provide guidelines for the appropriate presentation of results obtained from insulin clamps.

The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is the gold standard for assessing insulin action in vivo. A method for performing insulin clamps in mice is described. This includes a method for arterial catheterization that permits experiments to be performed in conscious, unrestrained mice with minimal stress.

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Tıp

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these diseases. Chronic retinal diseases such as retinal oedema or neovascularization usually require multiple intraocular injections to effectively treat the condition. However, the risks associated with these injections increase with repeated delivery of the drug. Therefore, alternative delivery methods need to be established in order to minimize the risks of reinjection. Several other investigations have developed methods to deliver drugs over extended time, through materials capable of releasing chemicals slowly into the eye. In this investigation, we outline the use of Elvax 40W, a copolymer resin, to act as a vehicle for drug delivery to the adult rat retina. The resin is made and loaded with the drug. The drug-resin complex is then implanted into the vitreous cavity, where it will slowly release the drug over time. This method was tested using 2-amino-4-phosphonobutyrate (APB), a glutamate analogue that blocks the light response of the retina. It was demonstrated that the APB was slowly released from the resin, and was able to block the retinal response by 7 days after implantation. This indicates that slow-release drug delivery using this copolymer resin is effective for treating the retina, and could be used therapeutically with further testing.

This paper details how Elvax 40W can be used as a slow-release method for drug delivery to the adult rat retina. The protocol for preparing, loading, and delivering the drug-resin complex to the eye is described.

Rat Retina için Elvax 40W ile yavaş salınımlı İlaç Dağıtım: Kronik Koşullar Tedavisinde Etkileri

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

Karotis Arter ve Ven Juguler kateterizasyon bir Bilinçli Rat Modelinde, İnfüzyonları ve Kan Örnekleme hemodinamik Tedbirleri Gerçekleştirme

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and time-consuming. In addition, serial blood or urine samples are required, with the associated stress for the experimental animals. A recent technique significantly reduces the investment in time and resources, minimizing the invasiveness and the animal stress, but being equally valid as the traditional approaches. The method measures transcutaneously renal function. Using an optical device and the exogenous renal marker fluorescein isothiocyanate (FITC)-sinistrin, this technique is capable of measuring the elimination kinetics of the marker through the skin. With neither blood nor urine samples nor the associated laboratory assays needed, the results of the transcutaneous measurement are almost instantaneously available. The method has been already validated in different species and successfully applied in several models of renal pathology. Moreover, due to its minimally invasive characteristics, it is suitable for sequential measurements within the same animal. Here is provided a detailed protocol to carry out the transcutaneous assessment of renal function in rodents.

Determination of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional procedures to measure this parameter are cumbersome and require a large investment of time. Here we describe a faster and minimally invasive method to determinate GFR transcutaneously.

Bilinçli Kemirgenler Böbrek Fonksiyon Transkutanöz Değerlendirmesi

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

Bir Sıçan Karaciğer Hilar Kelepçe Modeli Kullanılarak Doğrudan Segmental İçi hepatik Dağıtım Yöntemi

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to non-invasively assess some features of the respiratory function in humans as well as in laboratory animals. The present article focuses on the application of the double-chamber plethysmography (DCP) in small animals. It provides background information on the methodology as well as a detailed step-by-step procedure to successfully assess respiratory function in conscious, spontaneously breathing animals in a non-invasive manner. The DCP can be used to monitor the respiratory function of multiple animals in parallel, as well as to identify changes induced by aerosolized substances over a chosen time period and in a repeated manner. Experiments on control and allergic mice are used herein to demonstrate the utility of the technique, explain the associated outcome parameters, as well as to discuss the related advantages and shortcomings. Overall, the DCP provides valid and theoretically sound readouts that can be trusted to evaluate the respiratory function of conscious small animals both at baseline and after challenges with aerosolized substances.

The objective of the present article is to provide a detailed description of the recommended procedures to evaluate respiratory function in conscious mice by double-chamber plethysmography.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Multi-system Monitoring for Identification of Seizures, Arrhythmias and Apnea in Conscious Restrained Rabbits

Patients with ion channelopathies are at a high risk of developing seizures and fatal cardiac arrhythmias. There is a higher prevalence of heart disease and arrhythmias in people with epilepsy (i.e., epileptic heart.) Additionally, cardiac and autonomic disturbances have been reported surrounding seizures. 1:1,000 epilepsy patients/year die of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). The mechanisms for SUDEP remain incompletely understood. Electroencephalograms (EEG) and electrocardiograms (ECG) are two techniques routinely used in the clinical setting to detect and study the substrates/triggers for seizures and arrhythmias. While many studies and descriptions of this methodology are in rodents, their cardiac electrical activity differs significantly from humans. This article provides a description of a non-invasive method for recording simultaneous video-EEG-ECG-oximetry-capnography in conscious rabbits. As cardiac electrical function is similar in rabbits and humans, rabbits provide an excellent model of translational diagnostic and therapeutic studies. In addition to outlining the methodology for data acquisition, we discuss the analytical approaches for examining neuro-cardiac electrical function and pathology in rabbits. This includes arrhythmia detection, spectral analysis of EEG and a seizure scale developed for restrained rabbits.

Using simultaneous video-EEG-ECG-oximetry-capnography, we developed a methodology to evaluate the susceptibility of rabbit models to develop provoked arrhythmias and seizures. This novel recording system establishes a platform to test the efficacy and safety of therapeutics and can capture the complex cascade of multi-system events that culminate in sudden death.

Bilinçli Kısıtlanmış Tavşanlarda Nöbet, Aritmi ve Apnelerin Tanımlanması için Çok Sistemli İzleme

Patients with ion channelopathies are at a high risk of developing seizures and fatal cardiac arrhythmias. There is a higher prevalence of heart disease ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Bilinçli Sıçan Subklaviyen Veninden Tekrarlayan Kan Örneklemesi

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...