この作品は、との省（ケビンA.ロスとSLCとKRZにCA13148 - 35にSLCにR01 CA122804、R01 CA134773）神経疾患と脳卒中の国立研究所（SLCにR01 NS048353）、国立癌研究所によってサポートされていました防衛（SLCへX81XWH - 09 - 1 - 0086）。 UABの包括的がんセンター小動物イメージングの共有施設の運転を支援する資金をNCIコアサポート助成金（; E.パートリッジ、PI P30 CA13148 - 35）により提供された。我々はアラバマ神経科学ブループリントコアセンター（P30 NS57098）とその支援のためのUABの神経科学コアセンター（P30 NS47466）を感謝。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも健康や国防総省の国立研究所の公式見解を表すものではありません。

<ol>
	<li>Rosenberg, M. P., Bortner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+transgenic+and+knockout+animal+models+should+be+used+(for+drug+efficacy+studies+in+cancer).">Why transgenic and knockout animal models should be used (for drug efficacy studies in cancer).</a> Cancer Met. Rev. 17, 295-299 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Met. Rev. 17, 279-284 (1999).</li><li>Carroll, S. L., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+does+the+Schwann+cell+lineage+form+tumors+in+NF1?.">How does the Schwann cell lineage form tumors in NF1?.</a> Glia. 56, 1590-1605 (2008).</li><li>Woodruff, J. M., Kourea, H. P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W., Kleihues, P., Cavenee, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pathology and Genetics of Tumours of the Nervous System. , 172-174 (2000).</li><li>DeClue, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+expression+in+neurofibromatosis+type+1-related+tumors+and+NF1+animal+models.">Epidermal growth factor receptor expression in neurofibromatosis type 1-related tumors and NF1 animal models.</a> J. Clin. Invest. 105, 1233-1241 (2000).</li><li>Byer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+via+an+estrogen+receptor-independent+mechanism.">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth via an estrogen receptor-independent mechanism.</a> Neuro-Oncology. , (2010).</li><li>Zinn, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR J. 49, 103-115 (2008).</li><li>Wu, J. C., Sundaresan, G., Iyer, M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+optical+imaging+of+firefly+luciferase+reporter+gene+expression+in+skeletal+muscles+of+living+mice.">Noninvasive optical imaging of firefly luciferase reporter gene expression in skeletal muscles of living mice.</a> Mol. Therapy. 4, 297-306 (2001).</li><li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis.">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 292, 285-296 (2005).</li><li>Dahlberg, W. K., Little, J. B., Fletcher, J. A., Suit, H. D., Okunieff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosensitivity+in+vitro+of+human+soft+tissue+sarcoma+cell+lines+and+skin+fibroblasts+derived+from+the+same+patients.">Radiosensitivity in vitro of human soft tissue sarcoma cell lines and skin fibroblasts derived from the same patients.</a> Int. J. Radiat. Biol. 63, 191-198 (1993).</li><li>Badache, A., DeVries, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibrosarcoma-derived+Schwann+cells+overexpress+platelet-derived+growth+factor+(PDGF)+receptors+and+are+induced+to+proliferate+by+PDGF.">Neurofibrosarcoma-derived Schwann cells overexpress platelet-derived growth factor (PDGF) receptors and are induced to proliferate by PDGF.</a> BB. J. Cell. Physiol. 177, 334-342 (1998).</li><li>Muir, D., Neubauer, D., Lim, I. T., Yachnis, A. T., Wallace, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+properties+of+neurofibromin-deficient+neurofibroma+Schwann+cells.">Tumorigenic properties of neurofibromin-deficient neurofibroma Schwann cells.</a> Am. J. Pathol. 158, 501-513 (2001).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

ここで紹介する詳細な同所xenografting方法は、我々は、広くこれらのNF1関連末梢神経鞘腫瘍の研究で使用されている行をST88 - 14 MPNST細胞を用いて開発したものです。しかし、この方法論は、他のMPNSTの細胞株と前臨床研究のための容易に適応可能である。例えば、我々はまた、我々はST88で観察されたと同様の成功と、STS - 26T 10個の細胞、NF1関連MPNSTから導出される散発的に発生するMPNSTとT265 - 2C 11細胞に由来するラインでxenografting同所行われている-14細胞。 、我々はST88 - 14細胞のxenografting同所性のためにここに記述する正確な条件は、直接他のMPNST行のグラフト化のために採用することができないことに注意することをということ。代わりに、方法論の重要なパラメータは経験的に各細胞株ごとに決定する必要があります。これらのパラメータは、最初に移植したMPNST細胞数、移植片の開発と、より少ない程度に、腫瘍細胞が注入されているボリュームに許可される時間が含まれています。新しい行のためにこれらのパラメータを確立するために、我々 10 3と5〜マウスの移植群（1群5匹）× 10 6腫瘍細胞、大きさの注文ごとに細胞の2つの濃度をチェックする（すなわち、10 3個 、5 × 10 3個 、10 4個 、5 × 10 4細胞、等）。腫瘍細胞数が多い（&gt; 10 6）がより大きなボリュームで注入する必要があります我々は、最高5 mLまでは移植された神経由来の細胞を失うことなく注入できることを見出した。我々はまた、高密度懸濁液が腫瘍細胞を殺すせん断にますますやすくなるように5 mLの体積あたりせいぜい5 × 10 6個の腫瘍細胞を注入することができることを見出した。各グループ内の少なくとも3匹が触知可能腫瘍を持ってまで、我々は、そのグループを終了し、移植片の成長を確認するために組織学的に神経を調べ、その時点で、これらのマウスに従ってください。一般的に、我々は30〜60日以内に最大許容腫瘍の成長を達する細胞の濃度を求めている、明らかに、時間はこの時点では注入された細胞の数に応じて、異なります到達するために必要な。より急速な成長は難しい実験の終了前に効果的な治療濃度を達成するために作成して/または実験の過程で十分な生物発光イメージングのデータポイントのコレクションを防ぐことができます。 60日よりも長い時間のコースでは、実験パラメータは扱いにくいの調整になり、不必要に計画された実験の期間を延長する。 最後に、我々はまた、我々はタモキシフェン6の治療効果を実証するためにNIH IIIのマウスに移植したST88 - 14細胞でこの同所xenografting方法論を使用していることを指摘しておきます。我々が日常的に同所性異種移植片に対する候補治療薬の効果を評価するために使用する方法の詳細な説明は、その原稿に記載されています。また、神経線維腫の細胞が正常に修正を加えて、このプロトコルで説明する手順は、神経線維腫に対して向けられた候補の治療薬と前臨床試験を実行するために使用できる、ことを示唆し、末梢神経12に接ぎ木することができることが実証されている。

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Foxchase outbred SCID mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River </td>
<td>#236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NIH III mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taconic </td>
<td>#NIHBNX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NOD-SCID&gamma; mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories </td>
<td>#005557</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Stripper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>25-056-cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetbond surgical glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>1469SB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#80030</td>
<td>10 &mu;L volume</td>
</tr>
<tr>
<td>Hamilton syringe needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#7803-05</td>
<td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (custom made)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ear tags</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National Band and Ear Tag Co.</td>
<td>1005-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ophthalmic ointment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dechra</td>
<td>NDC 17033-211-38</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents

in vitroで画面が候補治療薬の最初の同定に不可欠ですが、腫瘍の増殖を阻害する薬剤の能力の厳格な評価は、適切な動物モデルで実行する必要があります。この目的のために最適な動物モデルのタイプは、激しい議論の話題です。いくつかの証拠は、トランスジェニックマウスに発生する腫瘍で薬の効果を調べる前臨床試験は臨床アウトカム1のより多くの予測であり、その候補治療薬は、しばしば、これらのモデルでテストされていることを示します。残念なことに、トランスジェニックモデルは多くの腫瘍タイプは使用できません。さらに、トランスジェニックモデルは、しばしばそのような方法だけでな​​く、マウス腫瘍モデルの人間の対応、腫瘍表現型と腫瘍が発症する時期を予測することができないの不完全浸透のような懸念のような他の制限事項があります。 適切なトランスジェニック腫瘍モデルが利用できない場合、その結果、多くの研究者は、前臨床試験のために（ヒト腫瘍細胞が免疫不全マウスに移植した）異種移植モデルを使用してください。トランスジェニックモデルが使用できる場合でも、彼らはしばしば、後者は、治療範囲の迅速な決定を容易に異種移植モデルと提携しています。さらに、このパートナーシップは、トランスジェニック腫瘍と本物のヒト腫瘍細胞における薬剤の効果の比較が可能になります。歴史的に、多くの場合（異所性異種移植片）皮下腫瘍細胞を注入することによって行われているxenografting。この手法は、比較的安価で、迅速かつ再現性であり、治療期間2の間に腫瘍の成長の連続的な定量が可能になります。しかし、皮下のスペースは、ほとんどの腫瘍のための正常な微小環境ではありませんので、異所性xenograftingで得られた結果は、宿主組織と腫瘍遺伝子の器官特異的発現の欠如などを要因として誤解することができます。これは次のように強く異所性移植の研究はヒト腫瘍細胞が起源の彼らの組織（同所xenografting）2に移植されている研究によって交換または補完することが推奨されています。残念なことに、この勧告の実装は、しばしば同所xenografting方法論はまだ多くの腫瘍タイプ用に開発されていないという事実によって妨害される。 悪性末梢神経鞘腫瘍（MPNSTsは）神経線維腫症1型3と最も一般的に坐骨神経4で発生した散発的または関連して発生する非常に積極的に肉腫があります。ここでは、ホタルルシフェラーゼタグ付きヒトのMPNSTの細胞がorthopically免疫不全マウスの坐骨神経に異種移植されている技術的に簡単な方法を説明します。個々の動物との研究グループに、後続の非バイアスされたランダム化における移植手順の成功を評価するための我々のアプローチについても議論されています。

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Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

確実に免疫不全マウスの坐骨神経にルシフェラーゼタグ付きヒト悪性末梢神経鞘腫瘍細胞を移植する方法が説明されています。研究グループに動物のランダムな分離のための腫瘍移植と基準の適切な設置を実証するために生物発光イメージングの使用についても説明します。

のために人間のルシフェラーゼ-タグ付き悪性末梢神経鞘腫瘍細胞の同所Xenografting in vivoで</em候補治療薬の>テスト

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

orthotopic-xenografting-human-luciferase-tagged-malignant-peripheral

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

18.5K ビュー.  University of Alabama at Birmingham - UAB. 確実に免疫不全マウスの坐骨神経にルシフェラーゼタグ付きヒト悪性末梢神経鞘腫瘍細胞を移植する方法が説明されています。研究グループに動物のランダムな分離のための腫瘍移植と基準の適切な設置を実証するために生物発光イメージングの使用についても説明します。

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のために人間のルシフェラーゼ-タグ付き悪性末梢神経鞘腫瘍細胞の同所Xenografting in vivoでテスト