我々は図1の回路図を使用するための取り付けブロックの青写真とダニエラ·ペルツを描画するためのパブロTraversa、この方法論の開発にジルケSachseとベアテEisermannを認める。私たちは、原稿上のコメントのジルケSachse、パヴァーヌRamdyaとラファエルRytzに感謝しています。 R.ベルは、ベーリンガーインゲルハイム財団博士フェローシップでサポートされています。 R.ベントンの研究室での研究は、独立した研究者グラントとスイス国立科学財団を起動する欧州研究評議会によって運営されている。

<ol>
	<li>Galizia, C. G., Rossler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+olfactory+systems+in+insects:+anatomy+and+function.">Parallel olfactory systems in insects: anatomy and function.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 399-420 (2010).</li><li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Architecture+of+Smell+and+Taste+in+Drosophila.">Molecular Architecture of Smell and Taste in Drosophila.</a> Annu. Rev. Neurosci. 30, 505-533 (2007).</li><li>Wilson, R. I., Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+events+in+olfactory+processing.">Early events in olfactory processing.</a> Annu. Rev. Neurosci. 29, 163-201 (2006).</li><li>Masse, N. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+receptive+range+of+an+olfactory+receptor+in+vivo+&#40;Drosophila+melanogaster+Or22a&#41;.">The molecular receptive range of an olfactory receptor in vivo &#40;Drosophila melanogaster Or22a&#41;.</a> J. Neurobiol. 66, 1544-1563 (2006).</li><li>Silbering, A. F., Galizia, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+odor+mixtures+in+the+Drosophila+antennal+lobe+reveals+both+global+inhibition+and+glomerulus-specific+interactions.">Processing of odor mixtures in the Drosophila antennal lobe reveals both global inhibition and glomerulus-specific interactions.</a> J. Neurosci. 27, 11966-11977 (2007).</li><li>Reiff, D. 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著者らは、開示することは何もありません。

ここで説明した準備や分析方法は、対応するドライバの導入遺伝子が利用可能である触角葉（OSNs、LNとPNS）の神経細胞のいずれかの集団で臭気誘発応答を分析するために使用することができます。我々は蛍光顕微鏡を使用してアプリケーションを記述しながら、本製剤の光イメージングが均等に焦点または二光子顕微鏡22,32を用いて行うことができる。実際、これらの後者の楽器は、ニューロンExpressの場合は特に、多数のレポーター、画像の解像度を減らすことができる広視野顕微鏡の光散乱問題を軽減する。この製剤は、通常、少なくとも半時間臭気誘発応答の録音を許可しますが、この時間は、記録された測定値の数と長さに応じて各フレーム間の刺激間隔に使用される露光時間大幅に長くしたり短くすることができます。さらに、二光子励起、蛍光repの退色を減らすことができますorterと同様に、細胞の毒性は、長い期間にわたって測定22,32を許可します。 かかわらず、顕微鏡の選択の、頭部カプセル内のハエの脳の動きは時に無傷の動物のイメージング最も再発の問題です。動き補正はマイナーな問題を（ステップ5.1）修正することができますが、それは非常に安定した調製物から録音する方が良いだけです。動きのアーチファクトを低減するための戦略は、（i）適切にサボテンの棘を持つハエの口吻を抑制すること、（ii）エイコサン（前の2.6ステップ）（エイコサンがで溶融させることができるとステージに固定することにより、ハエの脚を固定する〜 37°C;）この目的のためはんだごての先端を拡張し、洗練するために銀線を使用すること、（iii）微細なピンセットを用いて食道を（触角神経の間に表示されます）ニッキング。 ここで使用されるG-CaMP1.6に加えて、G-cAMPおよび他のカルシウム指標の最適化バージョンの数は、ご利用いただけますこれは、それらの信号対雑音比は、ベースラインの蛍光および時間的ダイナミクス12,28,33が異なります。センサの正確な選択は、アカウントにこれらのすべてのプロパティは、ニューロンのタイプを分析すると生物学的な問題が対処されているを取る必要があります。電流センサは、活動電位12,34とかなりよく相関カルシウムの変化を報告し、特定の遺伝子のドライバー·ライン数の増加35と結合し、その更なる向上は、そのままその場で神経活動の光学的イメージングの可能性を強化していきます。

<table border="1"><tbody><tr><td>試薬</td><td>サプライヤー</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>サボテン棘</td><td>ガーデンセンター</td><td></td><td>あまりにも柔軟性がない、〜7ミリメートル長い薄い</td></tr><tr><td>ロジン</td><td>弦楽器店</td><td></td><td></td></tr><tr><td>二成分シリコン</td><td> WPI </td><td> KWIK-SIL </td><td></td></tr><tr><td>カスタムブロックを取り付けプレキシガラスを作った</td><td>から入手可能な青写真<a href="http://neuro.uni-konstanz.de/jove_mountingblock_blueprint/" target="_blank">http://neuro.uni-konstanz.de/j ove_mountingblock_blueprint /</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>銅グリッド</td><td>アテネグリッド</td><td> G220-5 </td><td>通常は電子顕微鏡の試料に使用されます。 </td></tr><tr><td>ネジ</td><td>金物店</TD&gt; <td></td><td>直径2mm </td></tr><tr><td>プラスチック製カバースリップ</td><td>プラノ-EM </td><td> L4193 </td><td> 22 X 22ミリメートル</td></tr><tr><td>はんだごてのヒント</td><td>コンラッドエレクトロニクス</td><td> 830283から62 </td><td></td></tr><tr><td>調整電源</td><td>コンラッドエレクトロニクス</td><td> 511407から62 </td><td></td></tr><tr><td>細い線</td><td> Isabellenhütte </td><td> ISA-Ω </td><td> 0.013ミリメートル</td></tr><tr><td>エイコサン</td><td>シグマ</td><td> 21,927-4 </td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> Axioexaminer D1の</td><td></td></tr><tr><td> CCDカメラ</td><td> Visitron </td><td> CoolSnap HQ </td><td></td></tr><tr><td> Metafluor </td><td> Visitron </td><td></td><td>集録ソフトウェア</td></tr><tr><td>単色光分光器</td><td> Visitron </td><td> Visichrome </td&gt; <td></td></tr><tr><td>壊れやすいブレード</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10050から00 </td><td></td></tr><tr><td>ブレードホルダー</td><td> WPI </td><td> 14134 </td><td></td></tr><tr><td>サファイアブレード</td><td> WPI </td><td> 500314 </td><td>ダブルブレード1mmの縁取り</td></tr><tr><td>膜のガスポンプ</td><td> KNF Neuberger AG </td><td> NMP 830 KVE </td><td></td></tr><tr><td>サファイアブレードホルダー</td><td> WPI </td><td> 500317 </td><td></td></tr><tr><td>三方弁</td><td>リー·カンパニー</td><td> LFAA1200118H </td><td>設定E </td></tr><tr><td>浮子式流量計500ミリリットル/分</td><td> Analyt-MTC </td><td> 112-08SA </td><td></td></tr><tr><td>浮子式流量計5 L / minの</td><td> Analyt-MTC </td><td> 102-08SA </td><td></td></tr><tr><td>蜜ろう</td><td> Siladent Technikで</td><td> 209212 </td><td>; </td></tr><tr><td>セルロースパッド</td><td> Kettenbach医療</td><td> 31003 </td><td></td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>プラノ-EM </td><td> T5130 </td><td>デュモン生物学第5位</td></tr><tr><td>シリンジ</td><td> BD </td><td> 300928 </td><td> 2ミリリットル、Discardit II、2個入り</td></tr><tr><td>針</td><td>ブラウンSterican </td><td> 4665120 </td><td> 1.2ミリメートルOD </td></tr></tbody></table>

calcium imaging of odor-evoked responses in the drosophila antennal lobe

触角葉、昆虫脳内の主要な嗅覚中枢であり、脊椎動物の嗅球1-5の解剖学的および機能的に同等を表しています。外界の嗅覚情報は、それらが表現する特定の嗅覚受容体に応じて糸球体と呼ばれる神経網の異なる領域に分離する嗅細胞（OSNs）によって触角葉に送信されます。ここでは、より高い嗅覚脳領域への嗅覚情報を伝えるため、両方のローカルプロセス多くの異なった糸球体を支配することができます介在（LNS）と、投射ニューロン（PNS）とOSN軸索のシナプス。 触角葉におけるOSNs、LNSとPNの活動の光学的イメージング - 伝統的に合成カルシウム指標（例えば、カルシウム、緑、FURA-2）または電位感受性色素（例えばRH414）を使用して - 長い理解することが重要な技術であった方法嗅覚刺激が空間的および時間的パターンとして表されます。昆虫6-10の多くの種における糸球体の活動。このような蛍光カルシウム指標G-CAMP 11,12とカメレオン13と遺伝的にエンコードされた神経活動の記者の開発、生物発光カルシウム指示薬GFP-エクオリン14,15、またはシナプス伝達のレポーター、synapto-pHluorin 16が行ったショウジョウバエの嗅覚系、神経イメージング、特にアクセスキイロショウジョウバエでは 、その包括的に記述され、分子の電気生理学的および神経解剖学的特性を2,4,17を補完する 。これらの記者は、選択的に臭気誘発方法、高空間分解能と時間分解能で詳細に分析する嗅覚回路内のニューロンの定義された集団でバイナリ転写制御システム（例えばGAL4/UAS 18、LexAの/ LexAop 19,20、Qシステム21）を介して表現することができる神経活動が表現され、変調されたと22から24 &lt;形質転換/&gt;のsup。 ここでは、G-CAMP 25から27を使用して、 ショウジョウバエの触角葉で匂い誘発反応を測定するための準備と分析方法について説明します。動物の準備は低侵襲で、広い視野、蛍光共焦点顕微鏡と二光子顕微鏡を用いたイメージングに適応することができます。

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Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

我々は生きているの触角葉で匂い誘発カルシウム応答を測定し、分析するための確立された技術を記述する<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;。

の臭気誘発応答のカルシウムイメージングショウジョウバエ触角葉

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

calcium-imaging-odor-evoked-responses-drosophila-antennal

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Neuroscience

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

25.7K ビュー.  University of Lausanne. 我々は生きているの触角葉で匂い誘発カルシウム応答を測定し、分析するための確立された技術を記述するキイロショウジョウバエ。