이 연구는 NIH 보조금 1RO1DK74566 및 1RO1AM52984에 의해 부분적으로 지원되었다. 저자는 Drs, 수술하는 동안 그녀의 도움을 RRC의 양 재클린 맥카티 감사드립니다. 어떤 토끼, 그녀의 조직학 작업을위한 박사 룽 완과 고에너지 인산염의 그녀 HPLC 측​​정 여사 명나라 리의 수술과 수술 후 진료들의 도움 Jianpu 왕과 Harshini Sarojini.

1. 해부학 근거 토끼 귀는 초기 20 세기부터 상처 치료에 대한 혜택을 학습 소재왔다. 귀는 세 혈관 번들 (중앙, 두개골, 그리고 꼬리)가 제공되며 두개골과 꼬리 묶음의 혈관 크기가 다양하면서 중앙 번들, 가장 큰 것입니다. 간혹 꼬리 동맥은 결석있을 수 있습니다. 이러한 혈관의 1 모든 귀는 (그림 1) 면도 후에 쉽게 지느러미 측면에 식별됩니다. 복부 측면에서 말초 피부는 근위 혈관에서 혈액 공급을받지 않습니다. 지느러미 귀에있는 세 개의 선박 번들 말초 복부 피부 (그림 2)에 혈액 공급을 제공하기 위해 연골을 통해 침투 여러 가지가 있습니다. 어떤 토끼에서는 매우 작은 피하 혈관도 더 이상 복부 피부의 1 / 3 이상의 혈액을 공급하는 복부 측면에 발생합니다. 열린 원주 피부 절개에 에센있다복부 절개에서 tially 출혈은없고. 2. 수술 <ol><li> 토끼는 무게되고 귀를는 목 뒤쪽과 함께 면도있다. </li><li> Buprenorphine (0.01 밀리그램 / ㎏)의 premedication은 수술 전에 메신저에 한 시간이 주어집니다. </li><li> 마취는 케타민 (50 밀리그램 / ㎏)과 Xylazine (5 밀리그램 / ㎏) 메신저의 혼합물에 의해 유도된다. </li><li> 토끼는 수술하는 동안 가열 패드로 보호되어 있으며, 눈은 연고으로 보호하며, 생명 징후는 수술 도중에 모니터링하고 있습니다. </li><li> 외과 분야는 수술 스크럽으로 무균 준비하고 두 귀로가 노출되도록 draped 있습니다. </li><li> 다른 귀를 이점 비 허혈성 제어 역할을하면서 한 귀로는 허혈성 렌더링됩니다. </li><li> 세 혈관 pedicles은 동맥과 정맥에 의해 식별됩니다. </li><li> # 15 칼날 사용하여 세로로 찍힌 세 개의 작은 incisions (1-1.5 cm)은 귀베이스 1-2센티미터에 대해, 혈관 pedicles 이루어집니다. </li><li> 중심 정맥은주변 조직으로부터 격리 및 봉합사는 철회를 위해 둘러싸자하는 데 사용됩니다. 중심 동맥 4-0 봉합과 함께 출혈도 잡았와 나뉘어져 있습니다. </li><li> 동반 중추 신경도 절단됩니다. </li><li> 전체 두개골 작은 꽃자루는 출혈도 잡았와 나뉘어져 있습니다. </li><li> 꼬리 작은 꽃자루는 보존됩니다. </li><li> 피하 터널은 3 incisions를 통해 이루어집니다. 이것은 나이프와 가위와 겸자와 날카로운 해부와 무딘 절개하여 수행됩니다. 피하 조직, 근육, 신경, 그리고 작은 혈관 가지는 모두 중단됩니다. 진피 밑에 작은 vasculatures은 전적으로 나뉩니다. 피하 조직의 모든 칼날과 연골의 수준으로 절단됩니다. </li><li> 더 예리하고 무딘 절개는 5~10mm 대해 노출된 연골이 넓은두고,베이스를 정리하는 데 사용됩니다. </li><li> 이 절차는 인터럽트 피하 혈관 가지를 모두 빠르게 민간인 피해를 설립 않도록합니다. </li><li> 출혈은최소한의. 하나라도있다면, 그것은 쉽게 electrocautery없이, 거즈 압축에 의해 제어됩니다. </li><li> 귀 내부의 피부는 많은 혈액 공급을 휴대하지 않으며 따라서 베인되지 않습니다. </li><li> 3 피부 incisions는 4-0 또는 5-0 봉합을 사용하여 폐쇄하고, 멸균 거즈으로 덮여있다. </li><li> 3 작은 피부 incisions 및 incurs 개방형 수술보다 훨씬 덜 피부 손상의 프로 시저 결과입니다. </li><li> 네 개의 원형 전체 두께 피부 상처가 6 mm 스테인레스 스틸 펀치로 각 귀의 복부 측면에 만들어집니다. 상처 사이의 거리는 최소한 20-30밀리미터입니다. 펀치 상처에서 피부 연골에서 제거됩니다. perichondrium 또한 피부 또는 개별적으로 제거됩니다. 과립 및 epithelization이 일어 나도록하는 기반은 연골이지만 연골은 (그림 3) 천공이 아닙니다. </li><li> 제어 약이 appl 동안 양쪽 귀에 상처가 완료되면 시험 약물은 두 개의 상처 한쪽에 적용됩니다반대편에 상처를 지휘. occlusive 드레싱 (TegaDerm, 3M)은 상처 사이트를 충당하는 데 사용됩니다. 이것은 desiccated되기으로부터 상처를 방지합니다. </li><li> 귀의 하단 부분에 상처는 보통 귀 상단의 빠른 상처보다 치유. 상처 치유의 비교 연구의 경우, 그것은 건너편에있는 두 개의 상처로 한쪽에 두 개의 상처를 비교하거나, 별도로 상단과 하단 상처를 비교하는 것이 좋습니다. </li></ol> 3. 수술후 관리 <ol><li> Duragesic 패치는 가능한 고통을 줄이기 위해 2-3 일동안은 펜타 닐을 (25 μg / 시간) 발표 뒤로 피부에 붙어있다. </li><li> 토끼는 음식과 음료를 무료로 이용할 수있다. </li><li> 드레싱 변화는 매일 진행됩니다. 이전 드레싱은 제거하고 상처는 멸균 면봉으로 청소한다. 디지털 사진 비교 촬영하고 있습니다. 새로운 드레싱이 적용되며, 상처가 TegaDerm하여 다시 적용됩니다. 어떤 마취가 채널을 드레싱 중에 필요하지 않습니다anges. </li><li> 피부 온도는 비교를 위해 각각의 귀 &#39;에서 매일 측정됩니다. </li><li> 추가 귀에 혈액 순환이 transcutaneous 산소 장력 측정기 또는 레이저 도플러 유량계로 측정할 수 있습니다. </li><li> 봉합은 일주일 뒤에 삭제할 수 있습니다. </li><li> 비 당뇨병 동물의 경우 귀에 상처의 대부분은 보통 2-3 주 내에 치유. </li></ol> 4. 잠재적인 합병증과 어떻게 그들을 피하기 위해 이것은 최소한 침략적 수술은 안전하고 합병증은 드물다. 제외 과도 수술후 가벼운 귀 부종, 우리 토끼 중 아무도 어떤 심각한 수술 합병증도 없었있다. 그럼에도 불구하고,이 절차에 대한 몇 가지 잠재적인 합병증이 있습니다 : <ol><li> 출혈. hemostasis이 불완전한 경우 또는 큰 혈관 (예 : 메인 작은 꽃자루 혈관의 하나로서)이 손상된 경우 출혈 incisions에서 발생할 수 있습니다. 이것은 쉽게주의 절개에 의해 피할 수있다. 거기에 세 가지 주요 혈관 번들, 이외에많은 마이너 피하 혈관 지점을 다시. 피하 터널이 만들어되면, 이러한 혈관이 절단하지만 묶는 필요가 없습니다되고있다. Hemostasis은 거즈가 눌러 간단하게 얻을 수 있습니다. 이것은 쉽게 몇 분 동안 터널로 거즈의 모서리를 삽입하여 이루어집니다. 절개를 닫기 전에 활성 출혈이 존재하지 있는지 확인하십시오. </li><li> 절개 감염과 dehiscence : incisions가 오염된 경우 이러한 합병증이 발생할 수 있습니다. 이것은 엄격한 무균 기술의 사용에 의해 피할 수있는 어떠한 항생제가 필요하지 않습니다. 그러나 감염이 발생하면 적절한 배수와 드레싱 변경이 필요합니다. </li><li> 귀 부종 : 혈관 ligations과 림프 순환의 장애로 인해 온화한 귀 부종은 며칠 동안 제시됩니다. 그러나, 그것은 그 자체로 사라되며 치료는 필요하지 않습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 2007 년부터, 우리는 23 당뇨병을 포함하여 70 개 이상의 토끼에서이 절차를 사용했을imals. 당뇨병 환자 그룹에서 수술은 다른 당뇨병 환자의 시간에 공연되었다 일곱 토끼는 당뇨병의 시간 2 주, 네 바퀴는 도는​​ 12 개월 가지고 열, 두 달 가지고 있었고, 2 당뇨병 시간의 24 개월했다. 즉시 수술 후 허혈성 귀는 약한 부종과 함께 시원하고 청색증이 나타났다. 가장 중요한 귀 동맥 - 중앙 동맥이있어 정상적인 귀에 강한 펄스를하지만,이 펄스는 허혈성 귀에 선물은 아니 었어. 귀 운동은 감소했지만 완전히 사라지지 않았다. 피부는 터널을 통해 투명 우울증을 보여줬지만, 아무런 국소 빈혈이나 괴사는 (그림 4) 모든 동물에서 발견되지 않았습니다. 정상과 허혈성 귀를 피부 온도 (Omron 의료, Bannockburn 일리노이, 또는 피셔 과학, 피츠버그, PA에 의한 적외선 현장 온도계 K 유형별 Omron) 디지털 온도계로 측정되었다. 비 허혈성과 허혈성 귀 사이의 온도 차이는 1에서 10 ° C, W로 원거리2-6 ° C. 그림의 범위 내에서 떨어지는 ith 대부분의 토끼. 5 30 토끼의 평균 온도 차이를 보여줍니다. 온도 차이, 수술 후 초기에 더 높았다는 15 일째 이후 점진적으로 감소하지만, 아직 한 달 말에 유지되었다. 그들이 희생되었다 후 티슈 고에너지 인산염 내용은 어떤 동물로 측정되었다. 여섯 조직 샘플은 각 귀에에서 찍은 및 고에너지 인산염 내용은 HPLC로 측정되었다. ATP와 총 에너지 농도는 모두 허혈성 귀보다 일반적인 귀에 이상했다. 그림. 6 23 일이 수술 후 희생 토끼의 예제를 보여줍니다. 평균 조직 ATP 내용이 0.349 ± 0.047 0.237있었습니다 대 정상 귀에 μMol / G (± SD가 평균) ± 0.059 허혈성 귀 (P &lt;0.005)에서 μMol / G. 총 에너지 (ATP + ADP + AMP)를 평균은 0.882 ± 0.137이었다 0.556 대 정상 귀에 μMol / G ische에서 ± 0.115 μMol / G<html> 마이크 귀 (P &lt;0.001). 상처의 치유 시간은 모든 그룹의 비 허혈성 귀 (비 당뇨병 또는 당뇨병 환자)에 대한보다 허혈성 귀를 위해 항상 더 있었다. 그림. 7은 허혈성과 비 허혈성 귀에 상처 26쌍 사이에 치료의 비교를 보여줍니다. 치료 시간은 허혈성 귀 (P = 0.001)에서 17~27일 대 정상 귀 (20.5 의미가 ± 3.4 일)에서 13 일부터 18 일 (14.9 의미가 ± 1.6 일)로 원거리. 노인과 당뇨병 토끼의 상처 치유 시간은 당뇨병 시간 이상 12 개월뿐 이었어요 특히 오래있었습니다. 이 토끼에서는 당뇨 시간이 24 개월 토끼를 포함한 어떠한 합병증없이 정상적으로 나음을 모두 incisions. 그림 8은 근육이 결석과 섬유 조직으로 대체되는 치유 피하 터널을 보여주는 조직학 샘플입니다. 그러나, 피부는 그대로입니다. / 3341fig1.jpg &quot;/&gt; 그림 1. 토끼 귀는 세 혈관 번들로 제공됩니다. 중앙은 최대이고, 두개골은 작고이며, 꼬리 번들은 작은 것입니다. 귀이 면도 후 이들 혈관이 쉽게 표면에 볼 수 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig2.jpg" /> 그림 2. 지느러미 피부뿐만 아니라 관통 혈관을 통해 복부 피부뿐 아니라 지느러미 귀 공급 혈액에있는 세 개의 혈관 번들. 화살이 연골을 통해 관통 혈관을 보여줍니다. 삽입된 페이지 보여주는 이러한 혈관의 섹션을 건너. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig3.jpg" /> 그림 3. 포 6 밀리미터 상처는 귀의 복부 측면에 생성되며, perichondrium도 제거됩니다. 과립 및 epithelization이 일어 나도록하는 기반은 연골이지만 연골이 천공되지 않습니다. 3 smal<html> 내 피부 incisions은 매우 작은 피부 장애와 휴일입니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig4.jpg" /> 피부 incisions이 닫힌 후에는 그림 4., 피하 터널을 통해 톱니가 명확하게 볼 수 있습니다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig5.jpg" /> 그림 5. 30 토끼의 정상과 허혈성 귀 사이의 평균 피부 온도 차이. 초기 차이 범위 7 ° C ~ 10 ° C 수술 후. 차이점은 한 달 말에 점차 감소했지만 여전히 유지하고 있습니다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig6.jpg" /> 수술 후 23일 (P &lt;0.001)에 비 허혈성 귀에 비해 그림 6. 귀 조직 고에너지 인산염 내용은 허혈성 귀에 감소됩니다. 41/3341fig7.jpg &quot;/&gt; 그림 7. 상처 치유 시간은 비 허혈성 귀 (26 상처 각)보다 허혈성 귀에 이상입니다. 치유는 부상을 조직에 대한 무결성을 복원, 즉 상처 사이트의 전체 reepithelialization으로 정의됩니다. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig8.jpg" /> 그림 8. 피하 터널을 포함한 귀 부분을 보여주는 조직학 샘플. 치유 조직이 정상 귀보다 얇은이며, 원래의 골격근은 결석과 섬유 조직으로 대체됩니다. 그러나, 피부는 그대로입니다.

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본 연구에 참여 관심에 대한 재정 충돌은 없습니다.

당뇨병은 미국, 2,3 년 2천3백60만명에 영향을 미치는 이러한 환자 15-20% 이상 25,000,000,000달러의 연간 처리 비용으로 4,5 살아 가면서 발 궤양을 개발할 수 있습니다. 3,6하지만, 심지어 가장 근접한 트리 트먼트는 50 % 치유 율을 달성하고 이것은 종종 당뇨병 환자의 66%만큼이나 높은 재발 속도와 일곱 임시입니다. 3,6 궤양은 당뇨병 환자 등 감염과 극적으로 절?...

수술 중 모니터링을 위해 <ol><li> 가열 패드가 정상 온도를 유지합니다. </li><li> transcutaneous 산소 모니터. </li><li> 온도 모니터. </li></ol> 수술 <ol><li> # 15 블레이드와 # 3 칼. </li><li> 집게의 두 쌍 (다른 부드러운 조직을위한 피부 용과 다른). </li><li> 작은 클램프의 2-3쌍. </li><li> 마이크로 가위 중 하나 또는 두 쌍 (조직 절단을위한). </li><li> 작은 가위 중 한 쌍 (봉합을 절삭). </li><li> 바늘 홀더. </li><li> 몇 스테인레스 스틸 펀치 (상처를 만들기위한). </li></ol>

a simplified technique for producing an ischemic wound model

현재 당뇨병 상처 연구에서 하나의 큰 장애물이 안전하게 당뇨병 동물에서 사용할 수 있습니다 허혈성 상처 모델의 부족이다. vasculopathy 이러한 상처 치유를 방해 한 가지 주요 요인이기 때문에 비 허혈성 상처에 잘 작동 마약은 인간의 당뇨병 환자의 상처에서 작동하지 않을 수 있습니다. 우리는 최소한 침략적 수술 기법에 의해 만든 토끼 귀 허혈성 상처 모델을 설명하는 2007 년 기사를 발간했습니다. 그 후, 우리는 더 쉽게 작업을위한 절차를 간소화했습니다. 귀 한쪽에서는 세 개의 작은 피부 incisions는 혈관 pedicles, 귀베이스 1~2cm에 있었다. 중심 동맥 출혈도 잡았과 신경이 함께 절단되었다. 전체 두개골 번들은 꼬리 지점은 그대로두고, 잘라내기, 출혈도 잡았습니다. 원주 피하 터널은 피하 조직, 근육, 신경, 그리고 작은 혈관을 잘라, incisions을 통해 만들어졌습니다. 기타 귀는 아닌 허혈성 제어로 사용되었다. 네 상처는 복부쪽에 O에 만들어진F 각각의 귀. 이 기술은 이점 비교 4 허혈성 상처 하나의 동물 4 비 허혈성 상처를 생성합니다. 수술 후 허혈성 귀는 근사하고 청색증이었고, 감소 움직임과 귀 동맥의 맥박의 부족을 보여주었다. 허혈성 귀의 피부 온도는 1-10이었다 ° C에서 정상 귀의 그것보다 낮은이 차이가 하나 이상 달 동안 유지되었다. 귀 조직 고에너지 인산염 내용은 제어 귀보다 허혈성 귀에 낮은 있었다. 상처의 치유 시간은 동일한 치료가 사용된 비 허혈성 귀에보다 허혈성 귀에 이상했다. 기술은 이제 23 (당뇨병 시간이 이주에서 2 년까지) 당뇨병이 있었있는 80 개 이상의 토끼에 사용되었습니다. 어떤 하나의 토끼에는 출혈, 감염, 또는 피부 incisions의 파열과 같은 수술 합병증을 개발 없다. 모델은 약간의 피부 장애, 이상 허혈성 시간, 그리고 많은 다른 모델에 비해 높은 성공률과 같은 많은 장점을 가지고 있습니다. 그것은 ca를N 안전하게 감소 저항과 동물에 사용할 수 있으며 다른 테스트 요구 사항을 충족하도록 수정할 수 있습니다.

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A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

우리는 중앙 동맥과 신경 및 두개골 neurovascular 번들을 나누어 토끼 허혈성 귀에 상처 모델을 만들려면 최소한 침략적 기법을 개발했습니다. 피하 터널 그러면 모두 피하 조직이 생기죠. 이 절차는 최소한의 피부에 혼란을 초래하고 안전하게 당뇨병 동물에서 사용할 수 있습니다.

허혈성 상처 모델 생산을위한 단순화된 테크닉

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

17.1K 조회수.  University of Louisville. 우리는 중앙 동맥과 신경 및 두개골 neurovascular 번들을 나누어 토끼 허혈성 귀에 상처 모델을 만들려면 최소한 침략적 기법을 개발했습니다. 피하 터널 그러면 모두 피하 조직이 생기죠. 이 절차는 최소한의 피부에 혼란을 초래하고 안전하게 당뇨병 동물에서 사용할 수 있습니다.

비디오: A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

잠복기 모델에서 허혈성 심장 마비에 대한 유전자 전송

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

연구

의학

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

위한 간편한 기법<em&gt; 현장에서</em인간 안구 글로브에서 각막 및 망막 조직의 내장 적출의&gt; 절단

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

상처 치유의 생쥐 모델

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. Sublethal ischemia has also been shown to upregulate protective mechanisms in remote tissues. A brief period of ischemia (5-10 min) in the hind limb of mammals induces self-protective responses in the brain, lung, heart and retina. The effect is known as remote ischemic preconditioning (RIP). It is a therapeutically promising way of protecting vital organs, and is already under clinical trials for heart and brain injuries. This publication demonstrates a controlled, minimally invasive method of making a limb &#8211; specifically the hind limb of a rat &#8211; ischemic. A blood pressure cuff developed for use in human neonates is connected to a manual sphygmomanometer and used to apply 160 mmHg pressure around the upper part of the hind limb. A probe designed to detect skin temperature is used to verify the ischemia, by recording the drop in skin temperature caused by pressure-induced occlusion of the leg arteries, and the rise in temperature which follows release of the cuff. This method of RIP affords protection to the rat retina against bright light-induced damage and degeneration.

Remote ischemic preconditioning (RIP) is a method of conditioning tissues against damaging stress. We have established a method of remote ischemia at the hind limb, by inflating a sphygmomanometer cuff for 5-10 min. The neuroprotective capabilities of RIP have been demonstrated in a model of retinal degeneration in rodents.

원격 사지 허혈 양상 : 설치류에 신경 기술

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs across species but is age dependent. The transition from a scarless to scarring phenotype occurs in the third trimester of pregnancy in humans and around embryonic day 18 (E18) in mice. However, this varies with the size of the wound with larger defects generating a scar at an earlier gestational age. The emergence of lineage tracing and other genetic tools in the mouse has opened promising new avenues for investigation of fetal scarless wound healing. However, given the inherently high rates of morbidity and premature uterine contraction associated with fetal surgery, investigations of fetal scarless wound healing in vivo require a precise and reproducible surgical model. Here we detail a reliable model of fetal scarless wound healing in the dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

흉터 상처 수리의 마우스 태아의 피부 모델

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

쥐 허혈성 피부 상처 모델의 데모

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

쥐 왼쪽 앞쪽에 내림차순 (LAD) 관상 동맥 결찰 : 심근 경색에 대한 개선 및 단순화 된 모델

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to induce myocardial injury). The majority of pre-clinical myocardial infarction models require the disruption of pericardial integrity with loss of the homeostatic cellular milieu. However, recently a methodology has been developed by us to induce myocardial infarction, which minimizes pericardial damage and retains the heart&#39;s resident immune cell population. An improved cardiac functional recovery in mice with an intact pericardial space following coronary ligation has been observed. This method provides an opportunity to study inflammatory responses in the pericardial space following myocardial infarction. Further development of the labeling techniques can be combined with this model to understand the fate and function of pericardial immune cells in regulating the inflammatory mechanisms that drive remodeling in the heart, including fibrosis.

This protocol outlines the steps for inducing myocardial infarction in mice while preserving the pericardium and its contents.

온전한 심낭 허혈성 설치류 모델

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.