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上皮細胞ライセートからのGSTタグ付き突然変異体のRhoタンパク質(GST-RhoAは(G17A))を使用してアクティブロー-GEFの親和性降水

ここで紹介する方法が有効にGEFをするための高い親和性を有する変異体RhoAのGST融合タンパク質を利用することにより、培養細胞におけるRhoAの特定のGDP / GTP交換因子(GEF)の活性化に従うアッセイを説明しています。 GEFを、ウエスタンブロット法とデンシトメトリーにより定量によって検出された細胞溶解液から沈殿させる。

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この動画の章

0:05

Title

1:46

Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct

2:55

Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads

7:50

GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads

10:11

Representative Pull Down Results

11:03

Conclusion

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