この作品は、NIH（DC007681、AB）、CTの幹細胞助成（AB）、パーディー財団（AB）、博士号を取得する前のルース·L·キルシュシュタイン国立研究サービス賞（NRSA）（SZY）、およびNSFの大学院研究からの補助金によって支えられてフェローシップ（BL）。我々は、原稿上の有益なコ​​メントをBordey室のメンバーに感謝します。本材料は、部分的にコネチカット幹細胞研究助成金プログラムの下コネチカット州によってサポートされた仕事に基づいています。その内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしもコネチカット州の公式見解を示すものではない、コネチカットやCTイノベーションの州の公衆衛生省は、株式会社。

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	<li>Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+formation+and+glial+tube+assembly+in+the+shift+from+neonatal+to+adult+subventricular+zone+of+the+rodent+forebrain.">Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain.</a> J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+calcium+waves+define+communication+networks+among+murine+postnatal+neural+progenitor+cells.">Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells.</a> Eur. J. Neurosci. , (2011).</li><li>Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchrony+of+spontaneous+calcium+activity+in+mouse+neocortex+before+synaptogenesis.">Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis.</a> Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).</li><li>Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+increases+calcium+in+subventricular+zone+astrocyte-like+cells+through+L-+and+T-type+voltage-gated+calcium+channels.">GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels.</a> Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).</li><li>Bolteus, A. J., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+Release+and+Uptake+Regulate+Neuronal+Precursor+Migration+in+the+Postnatal+Subventricular+Zone.">GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone.</a> J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).</li><li>Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+activation+of+GLUK5+kainate+receptors+decreases+neuroblast+migration+in+a+whole+mount+preparation+of+the+subventricular+zone.">Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone.</a> J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).</li><li>Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+features+of+postnatal+subventricular+zone+cell+motility:+a+two-photon+time-lapse+study.">Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study.</a> J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).</li><li>Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+controls+Ca2++activity-dependent+network+synchrony+in+the+adult+neurogenic+forebrain.">GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain.</a> , (2007).</li><li>Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP-expressing+cells+in+the+postnatal+subventricular+zone+display+a+unique+glial+phenotype+intermediate+between+radial+glia+and+astrocytes.">GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes.</a> Glia. 54, 394-410 (2006).</li><li>Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+properties+and+ionic+signature+of+neuronal+progenitors+of+the+postnatal+subventricular+zone+in+situ.">Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ.</a> J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).</li><li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca(2)+indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators.</a> Science. 333, 1888-1891 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

特別な利害関係は宣言されません。

SVZ細胞のカルシウムイメージングは、神経芽細胞10、両方の神経芽細胞およびアストロサイト4,6,8とアストロサイトのカルシウム波3受容体チャネル発現における自発活動のパターンを研究するために使用されています。 SVZにおける細胞はどちら未熟であるか、またはグリア特性を持っているので、彼らは成熟したネットワークでの活動を示す電位におけるミリ秒の変...

<table border="1"><tbody><tr><td> 溶質 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 郭（MM） </td></tr><tr><td>スクロース</td><td>シグマ</td><td> S0389 </td><td>解剖：147 mMの ACSF：0 mMの</td></tr><tr><td> NaClを</td><td>シグマ</td><td> S9888 </td><td>解剖：42ミリメートル ACSF：126 mMの</td></tr><tr><td> KClを</td><td>シグマ</td><td> P3911 </td><td>解剖：2.5mMの ACSF：2.5mMの</td></tr><tr><td>のMgCl 2·6H 2 O </td><td>シグマ</td><td> M9272 </td><td>解剖：4.33 mMの ACSF：1mMの</td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4·H 2 O </td><td>シグマ</td><td> S8282 </td><td>解剖：1.25 mMの ACSF：1.25 mMの</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ</td><td> G8270 </td><td> Dissection：10mMの ACSF：10mMの</td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td>シグマ</td><td> S6014 </td><td>解剖：26 mMの ACSF：26 mMの</td></tr><tr><td>のCaCl 2·2H 2 O </td><td>シグマ</td><td> C3306 </td><td>解剖：1.33 mMの ACSF：2 mMの</td></tr></tbody></table> 表1化学物質リストおよび解剖ソリューションとACSFのレシピ。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> [ヘッダ] </td></tr><tr><td> 名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>ビブラトーム</td><td>ライカ</td><td>バーモント1000S </td><td></td></tr><tr><td>スーパー接着剤</td><td> Sureholdまたは3M </td><td> Surehold 3Gスーパー接着剤または3M獣医ボンド</td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール</td><td> Robozまたはテッドペラ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>のFluo-4 AMのカルシウム感受性色素</td><td>インビトロジェン</td><td> F14201 </td><td></td></tr><tr><td>オレゴングリーンBAPTA-1、AMカルシウム感受性色素</td><td>インビトロジェン</td><td> O6807 </td><td></td></tr><tr><td> DMSO中プルロニックF-127の20％溶液</td><td>インビトロジェン</td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td>直立共焦点顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> FV300またはFV1000 </td><td></td></tr><tr><td>水浸目標</td><td>オリンポス</td><td> LUMPlanFl 40×幅/ IR（NA 0.80）; LUMPlanFl 60×W / I（NA 0.90） </td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>サッター</td><td> MPC-200/MPC-325/MPC-385 </td><td></td></tr><tr><td>圧力コントローラ&lt;/ TD&gt; <td>パーカー·ハネフィン</td><td> Picospritzer </td><td>塗布時&lt;3 PSI </td></tr><tr><td>ピペットプラー</td><td>サッターまたはNarshige </td><td>サッターのP-97またはNarshige PP-830 </td><td></td></tr><tr><td>ガラスピペット</td><td>サッター</td><td> BF150-110から10 </td><td> ID：1.10、外径：1.50 </td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td>モデル720 </td><td>流速：1ml /分</td></tr><tr><td>商工会議所のお風呂</td><td>ワーナー·インスツルメンツ</td><td> RC-26のGLP </td><td>ロープロファイルには、客観的なクリアランスが可能</td></tr><tr><td>管類</td><td>タイゴン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>温度調節器</td><td>ワーナー·インスツルメンツ</td><td> TC-324B/344B </td><td></td></tr></tbody></table> 表2。材料/機器リスト。

preparation of acute subventricular zone slices for calcium imaging

脳室下帯（SVZ）は、出生後の脳内の2つの神経原性のゾーンの一つである。 SVZは、アストロサイトの機能（SVZアストロサイトと呼ばれます）、神経芽細胞、中間前駆細胞と神経前駆細胞を含む密集した細胞などを持っている。 SVZで生まれた神経芽細胞は接線方向に、彼らは介在ニューロンに分化する嗅球への偉大な距離を移行します。接着分子と拡散信号を介して細胞間のシグナル伝達はニューロン新生の制御において重要な役割を果たしている。これらの信号の多くは、細胞の内側との間で情報を伝達する細胞内カルシウム活性を誘発する。カルシウム活性は、細胞外シグナルの活性こうして反射性であり、SVZ細胞間の機能的な細胞間シグナル伝達を理解するための最適な方法です。 カルシウム活性は成熟したアストロサイトとニューロンを含む他の多くの地域との細胞型で研究されている。しかし、LOAに伝統的な方法カルシウムインジケーター色素（ すなわち浴ローディング）とdの細胞はすべてSVZ細胞型をロードするには効率的ではありませんでした。実際、SVZにおける細胞密度は、組織内部で染料拡散を妨げる。また、矢状スライスを準備した方が特にSVZ細胞、吻側 - 尾軸の神経芽細胞の移行の流れの3次元配列を保持します。 ここでは、SVZ、カルシウムインジケーター色素とSVZ細胞の読み込みや、タイムラプスムービーカルシウム活性の買収を含む矢状切片を作製するための方法を説明します。私達はのFluo-4を使用した組織内部の圧力アプリケーションを使用して、SVZアストロサイトをロードするための染料AM。カルシウム活性には、識別のための個々の細胞のための正確な分解能を可能走査型共焦点顕微鏡を用いて記録した。我々のアプローチは、成人の海馬下帯や胚神経性ゾーンを含む他の神経性のゾーンに適用されます。また、染料の他の種類のことができます記載された方法を使用して適用する。

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Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

記録カルシウム活性のためのカルシウムインジケーター色素と脳室下帯（SVZ）細胞をロードする方法について説明する。生後SVZは、神経前駆細胞および神経芽細胞を含む、密に詰まった細胞が含まれています。むしろ風呂ローディングを使用するよりも、我々はより良​​い染料拡散を可能にする組織内部の圧力によって色素を注入した。

カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.0K ビュー.  Yale University School of Medicine. 記録カルシウム活性のためのカルシウムインジケーター色素と脳室下帯（SVZ）細胞をロードする方法について説明する。生後SVZは、神経前駆細胞および神経芽細胞を含む、密に詰まった細胞が含まれています。むしろ風呂ローディングを使用するよりも、我々はより良​​い染料拡散を可能にする組織内部の圧力によって色素を注入した。