These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.

1。マウス搾乳プロトコルこのプロトコルで説明する方法は、動物実験委員会によって承認された。 子孫からのダムの1。分離<ol><li>搾乳するダムを選択します。 8〜12日で4つ以上の仔のごみでダムを選択して、コレクションが21日までの任意の時点ポスト分娩アップ時に可能であるが、コレクションの最大の乳提供するために分娩を投稿してください。 </li><li>搾乳前に彼女ごみ少なくとも2時間からダムを分離する。 注：特定の期間内に複数のダムを牛乳に1欲求必要があります、それが十分な食料と水の供給と同じケージで分離ダムを収容するために許容可能である。 </li></ol>オキシトシン、麻酔および眼潤滑剤の2。管理<ol><li>腹腔内にオキシトシンの2 IU / kgの（IP）を管理します。オキシトシンは、ミルクの放出を刺激するために授乳雌の乳腺に作用するホルモンである。オキシトシンは、FRを取得することが可能OM獣医。 </li><li> 5月10日mg / kgのキシラジンのIPと組み合わせて、80〜100 mg / kgのケタミンを含む麻酔薬の混合物を管理します。たとえば、10 mlストック麻酔混合物を約30グラムの体重のマウスについて予め用意することができた0.1mlのキシラジン8.9 mlのH 2 O、1.0mlのケタミンを含むであろう。 0.25ミリリットルの合計麻酔薬はミルク収集のための十分な時間を提供する必要があり、これを約20〜30分のために、このサイズのマウスを鎮静します。 注：動物が正常に麻酔をされたことを確認するには、ゆっくりと固体表面上の彼女の胃に彼女を置く。彼女は彼女の足を動かしたり、彼女が完全に麻酔をかけている場合、彼女の足に上昇しようとするべきではありません。完全オリジナルの投与量で麻酔されていないマウスの場合、研究者は別のものを投与することができる4あるいは麻酔薬混合物は、マウスが既に達成しているマウスおよび/または鎮静のレベルの大きさに応じて、元の投与量の2分の1 。しかし、これは私ができた麻酔に対する有害反応の可能性をncrease、またマウスは、より長い期間のためのより深く麻酔および/または麻酔をかけている可能性があります。 注：複数のダムを搾乳する場合は、ケタミンおよびキシラジンのためにオキシトシンとオキシトシンの短い半減期のために麻酔注射し、鎮静時間をずらすことが必要である。 </li><li>それぞれの目の隅に目の潤滑剤を少量塗布し、麻酔下ながら乾燥からマウスの目を防ぐために広がった。 </li></ol> 3。ミルクコレクション牛乳（R2）を収集するために手動で（R1と称する）ミルクを表現しながら、麻酔したマウスを保持する一つの研究者、一研究者：乳コレクションは最も容易に2人の研究者によって行われる。マウスは危害を避けるために、平坦な表面上に固定されている場合、この方法はまた、一人で行うことができる。 <ol><li> R2は、無菌アルコールプレップパッドと、P-200のピップを装備する必要がありますetman、各マウスのきれいなピペットチップ、およびそのような1.5ミリリットルエッペンドルフチュー​​ブまたは1.2ミリリットルクライオバイアルなどの牛乳を、（材料の表を参照）を保持するための容器。 </li><li>オキシトシンを有効にし始めると、ミルクレットダウン（ 図1A参照 ）は、マウスの乳腺領域に見えるようになります。 R1：無菌アルコールプレップパッドをラップを解除し、ゆっくりと前に搾乳する領域をきれいにするには、マウスの乳腺の領域を拭く。手動で牛乳の可視ビーズは乳頭の基部に形成され始めるまで、静かに上向きの動きで乳房組織をマッサージし、圧迫する、親指と人差し指を使って、乳頭からミルクを表現しています。 </li><li>ピペットチップから空気を放出し、牛乳の収集のために準備するために、その最初のピットストップへのP-200ピペットマンのプランジャーを押してください。 </li><li>ミルクの滴の一番上にピペットチップを置き、静かにゆっくりとプランジャーに圧力を解放することによってピペットチップに牛乳を引き出します。 （参照乳首や皮膚に近すぎるチップを入れないように注意してください図1B）。これはすべての方法ピペットチップの上部に牛乳を引っ張ってくると、それが困難な保持容器に、多くの場合、粘性のミルクを排出す​​るようになりますように、完全にプランジャーを解放する必要はありません。 </li><li> （ 図1C参照 ）の最初のピットストップを過ぎてのプランジャーを押すように、親指を使って、容器にミルクを排出する。全く液体が失われないように、少量の排除を容易にするために、チューブの側面にピペットチップを押してください。 </li><li>手動で乳首をスキップしないように、時計回りか反時計方向のいずれかに移動し、それぞれの乳頭からミルクを発現し続ける。それはに戻って来て、それが他よりも多くの牛乳を生産する必要があり、継続的に同じ乳頭からミルクを表現するために許容され、便利でもある。 </li></ol>ダム4。麻酔逆転<ol><li>ほとんどの場合、それはダムが搾乳プロセス中にウェイクアップを開始し始めることが一般的である。そうでない場合は、CAGにダムを配置このような加熱された循環毛布などの熱源の下に間接的にE、彼女は目を覚ますし始めるまで。 注：ダムが目を覚ますし始めると、彼女は彼女自身の彼女のケージについて歩くことができるようになるまで、彼女の活動の注意深い観察を保つ。 </li><li>ダムが闘争することなく、ケージ動き回っていると、彼女のゴミと彼女のオリジナルケージに彼女の背中を置く。悪影響を与えることなく、牛乳コレクション後養うために子犬の能力に関連して指摘されていない。 </li></ol> 2。キョン搾乳プロトコルこのプロトコルで説明する方法は、動物実験委員会によって承認された。 子孫からのドウの1。分離<ol><li>搾乳するDOEを選択します。リーブス「キョンの鹿は、一般的に1子鹿2を出産する。初乳8で必須栄養素へのアクセスを得るため鹿の子機会を可能にするために、DOEの出産の翌日ミルク。 注意：子鹿は通常、非表示にし、PROC時に再表示されません。edure;母の子孫のペアの分離は必要ありません。 </li></ol>オキシトシン、麻酔および眼潤滑剤の2。管理<ol><li>筋肉内にオキシトシン10 IU / kgの（IM）を管理します。オキシトシンは、牛乳のレットダウンを刺激するために、授乳中の雌の乳腺に作用するホルモンである。オキシトシンは、獣医師から取得することができる。 </li><li> BAM麻酔IM 11含むブトルファノール0.45 mg / kgでの管理、0.25 mg / kgのアザペロン、0.07 mg / kgでのmedetomadine。 BAMの麻酔混合物の1回投与は、完全なミルク収集のための十分な時間を提供して約20〜30分間キョンを鎮静します。麻酔のための別のオプションは、約10〜15分間キョンを鎮静します1〜2 mg / kgで、でミダゾラムです。これは牛乳収集のための十分な時間を提供するが、この麻酔薬は、より迅速にBAMよりも代謝され、動物は短い時間期間の終了時に脱出しようと試みることができる。 注：痛みに対する最小限の応答、闘争なしでMJを保持するために、R1の能力が続く耳に触れたとき、マイナー反射は、動物が正常に麻酔をされたことを示します。 注：完全オリジナルの投与量で麻酔されていないキョンの場合、研究者は別のものを投与することができる4あるいは既にされている鎮静の動物および/またはレベルの大きさに応じて麻酔薬の混合物の本来の投与量の2分の1達成しました。しかしながら、これは、麻酔に対する有害反応の可能性を増大させることができ、また、キョンより深く麻酔し、および/またはより長い期間を麻酔さをもたらし得る。 </li><li>麻酔下ながら乾燥からキョンの目を防ぐために、それぞれの目と普及の隅に潤滑油を少量を適用します。 </li></ol> 3。ミルクコレクション牛乳コレクションは、最も簡単に2人の研究者によって行われる。に麻酔をかけたキョンを保持する1研究者手動（R1と呼ばれる）ミルクを表現しながら、ラップ、そして快適で安全な位置にキョンの頭を保つために、牛乳（R2）を収集するために第二の研究者。 <ol><li>使用麻酔薬によっては、搾乳者は（ミダゾラムにより誘導される）または2）のベッドのない控え室での清浄度を維持するために、（BAM-手順の間に目を覚ますべき彼らのために安全な場所を提供するために、自分のペンのいずれか1）を実行する必要があります誘導された）。 </li><li> R1とR2は、牛乳を保持するために、エタノールに浸したガーゼといくつかの15ミリリットルコニカルポリプロピレンチューブに装備する必要があります。 </li><li>オキシトシンを有効にし始めると、ミルクレットダウンはキョンの乳腺領域に表示になります。 R1：手袋をはめた手や指だけでなく、全体の乳房とエタノールに浸したガーゼで動物の個々の乳頭をサニタイズ。 R2：呼吸のしやすさを可能にし、第一胃の​​逆流を防ぐために、安全で楽な姿勢でキョンの頭を持ってください。コレクションチューブCLを保持する<html>潜在的な汚染を防ぐために、それに触れることなく、搾乳されている乳首へオース。 </li><li>乳首がミルクで充血されるまで、ゆっくりと上向きの動きで乳房組織を圧迫するために親指と人差し指を使って、1乳頭からミルクを表現し、ゆっくりと乳首から、R2が保持しているチューブに牛乳をロールします（ 図2を参照してください。 ）。 </li><li>注：R2は無し、牛乳はほとんどが無駄になりますように収集管が配置されていることが重要であるので、ミルクは、ストリームに出てくる。 </li><li>キョンの乳房を象限に分割されている。 R1：牛乳はもはや簡単に流れるまで各象限からミルクを発現し続けるん。牛乳は1乳頭から発現させることができない場合は、最初に戻る前に他のすべての乳首から発現する。それはに戻って来て、それが他よりも多くの牛乳を生産する必要があり、継続的に同じ乳頭からミルクを表現するために許容され、便利でもある。 </li></ol>ドウ中の4。麻酔逆転すべてのミルクが表明される前にTが &quot;&gt;ミダゾラムによって誘発されるDOEは搾乳プロセス中に目を覚ますために開始することが一般的です。ほとんどの場合、DOEは脱出しようとします。マイナー拘束ミルクを高めるための努力で使用されている収量はあるが、研究者とDOEの両方の安全性と快適性も同様に重要である。 <ol><li> BAMの急速な反転のため/ mgのmedetomadine皮下2.5ミリグラムでアチパメゾール管理DOEを麻酔。 注意：麻酔薬の両方のタイプで、それは彼女がつまずきや転倒することなく、彼女自身で歩くことができるようになるまで、DOEの注意深い観察を維持する必要があり、誤嚥の恐怖や窒息せずに食べて、飲んですることができます。悪影響を与えることなく、牛乳コレクション後看護する子鹿の能力に関連して指摘されていない。 </li></ol>

<ol>
	<li>Dueling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).</li><li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+(Muntiacus+reevesi+micrurus)+in+northern+Taiwan,+Republic+of+China.">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li><li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP.">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li><li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+antibody+via+mother's+milk.">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li><li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein.">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+collecting+milk+from+mice.">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+effects+of+litter+size+and+lactation.">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+mouse.">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li><li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior.">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li><li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer.">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

マウス 1を含むマウスの乳を収集するとき考慮すべきいくつかの要因が、）は、コレクションのために取っておく時間の量、投与オキシトシンの2）の投与量、3）ダムは現在、看護や4）の量でどのように多くの子犬があります収集時に分娩から経過した時間。ガイドラインとしてこれまでの研究を用いて、乳量のための条件を最適化するために設定してくだ...

動物モデルは、 インビトロ分析によって得られることができない疾患病理への洞察を提供しています。最も有効な結果を提供するためには、疾患および対象の種と密接に関連して動物モデルを使用することが重要である。たとえば、リーブス」キョン（ キョン ）、小アジアの鹿1,2、およびシカのプリオンタンパク質（CerTgPrP）3を発現するトランスジェニックマウスは、シカ科の種のための有用な動物モデルである。両種は、年間を通して繁殖が可能、多発情性のある、したがって、妊娠関連組織および体液のための一貫性のあるソースは、シカ科生物学の特定のメカニズムを研究する。牛乳の研究では、ヒトより動物モデルで達成より簡単に（かつ安価に）されているアプリケーションの広大な配列を持っている。研究者たちは、1）感染症伝達の潜在的な原因として、牛乳や初乳を調査できた、develoの中で子孫に母親から転送された2）免疫グロブリン受動免疫4および3）ラクトフェリンのpment、研究者は、現在、商業的に5を生産しようとしている、受動免疫に関与するヒトの母乳中に見出されるタンパク質。 小さな動物から牛乳のかなりの量を収集することは困難な作業であることを証明することができます。ロジャースは、その後、マウスを使用したラット6からミルクを収集するための手法を提案した。 DePeters及びハービ次いで真空源に取り付けられた搾乳ユニット（の構築を必要とする牛乳の収集、パスツールピペットに取り付けられたゴム製のピペット球によって産生さ手動生成された真空を用いたもの、及び第二の2つの方法を提案し、このようなマウスのミルク7を収穫する蛇口）など。ここでは、マウスだけで容易に利用可能な実験装置と基本的な技術的なスキルを必要としリーブス」キョン鹿、両方からミルクを収集するためのシンプルで低コストの方法を提案する。我々の方法は、様々なミルクの十分なボリュームをもたらすアプリケーション。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:360px;">Materials-Mouse</td>
			<td style="width:297px;"></td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:116px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>011075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>NADA 139236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eye lubricant</td>
			<td>MWI/Apexa</td>
			<td>701013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (2 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Materials- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Midazolam (1-2 mg/kg)</td>
			<td>Amerisource Bergen Drug Corp</td>
			<td>924326</td>
			<td>optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td>Fort Dodge Animal Health</td>
			<td>NADA 135-780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>NADA 141-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (10 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-200 Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 &#956;L pipette tips</td>
			<td>Light Labs</td>
			<td>B-2004-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>005427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">27 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>002031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">22 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 ml luer lock syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>001377</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

マウス 我々の実験から、我々は、いくつかの変数に依存して、ある実験用マウスからの乳の約100-400液を収集することが可能であると判断した。これらの変数）は、コレクションのために取っておく時間の長さ、2）オキシトシンの投与量は、投与を、1を含む3）ダムは現在、看護や時間ポスト分娩の4）の量でどのように多くの子犬。我々の研究は、ダムは、...

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Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

マウスおよびリーブス」キョン鹿のためのミルク収集方法

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

19.7K ビュー.  Colorado State University. Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer. 

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Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain quality. F. graminearum also causes stalk and ear rots of maize and is a producer of mycotoxins such as the trichothecenes that contaminate grain and are harmful to humans and livestock (Goswami and Kistler, 2004).

The fungus produces two types of spores. Ascospores, the propagules resulting from sexual reproduction, are the main source of primary infection.  These spores are forcibly discharged from mature perithecia and dispersed by wind (Francl et al 1999). Secondary infections are mainly caused by macroconidia which are produced by asexual means on the plant surface. To study the developmental processes of ascospores in this fungus, a procedure for their collection in large quantity under sterile conditions was required. Our protocol was filmed in order to generate the highest level of information for understanding and reproducibility; crucial aspects when full genome gene expression profiles are generated and interpreted. In particular, the variability of ascospore germination and biological activity are dependent on the prior manipulation of the material. The use of video for documenting every step in ascospore production is proposed in order to increase standardization, complying with the increasingly stringent requirements for microarray analysis. The procedure requires only standard laboratory equipment. Steps are shown to prevent contamination and favor time synchronization of ascospores.

To study the developmental processes of ascospores in Gibberella zeae, a procedure for collection under sterile conditions is filmed in order to generate the highest level of information for protocol description. This should facilitate the reproducibility of the experiment, a crucial aspect when full genome expression profile tests are implemented.

マイクロアレイ実験のためのジベレラzeae子嚢胞子の生産とコレクション。

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain ...

生物学

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

海水のサンプリングとコレクション

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

診断剖検及びラット及びマウスで選択された組織とサンプル集

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

基本的な<em&gt;線虫Caenorhabditis elegans</em&gt;方法：同期との観測

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound responses and repair in this model have illuminated our understanding of the cytoskeletal and genomic responses to tissue damage. The two most commonly used methods to wound the C. elegans adult skin are pricks with microinjection needles, and local laser irradiation. Needle wounding locally disrupts the cuticle, epidermis, and associated extracellular matrix, and may also damage internal tissues. Laser irradiation results in more localized damage. Wounding triggers a succession of readily assayed responses including elevated epidermal Ca2+ (seconds-minutes), formation and closure of an actin-containing ring at the wound site (1-2 hr), elevated transcription of antimicrobial peptide genes (2-24 hr), and scar formation. Essentially all wild type adult animals survive wounding, whereas mutants defective in wound repair or other responses show decreased survival. Detailed protocols for needle and laser wounding, and assays for quantitation and visualization of wound responses and repair processes (Ca dynamics, actin dynamics, antimicrobial peptide induction, and survival) are presented.

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The adult C. elegans skin is a tractable model for studies of epithelial wound responses, including wound closure, scar formation, and innate immunity.

創傷応答のためのスキン傷つけ処理のための方法およびアッセイ<em&gt; C。エレガンス</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). These pacemaker APs reflect the coordinated activity of numerous membrane currents and intracellular calcium cycling. However the precise mechanisms that drive spontaneous pacemaker activity in SAMs remain elusive. Acutely isolated SAMs are an essential preparation for experiments to dissect the molecular basis of cardiac pacemaking. However, the indistinct anatomy, complex microdissection, and finicky enzymatic digestion conditions have prevented widespread use of acutely isolated SAMs. In addition, methods were not available until recently to permit longer-term culture of SAMs for protein expression studies. Here we provide a step-by-step protocol and video demonstration for the isolation of SAMs from adult mice. A method is also demonstrated for maintaining adult mouse SAMs in vitro and for expression of exogenous proteins via adenoviral infection. Acutely isolated and cultured SAMs prepared via these methods are suitable for a variety of electrophysiological and imaging studies.

Methods are demonstrated for the isolation of sinoatrial node myocytes (SAMs) from adult mice for patch clamp electrophysiology or imaging studies. Isolated cells can be used directly or can be maintained in culture to permit expression of proteins of interest, such as genetically encoded reporters.

成体マウスから洞房結節筋細胞の単離、培養、および機能解析のための方法

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in mammals. However, humans cannot oxidize cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid to cytidine monophosphate-N-glycolylneuraminic acid due to a primary exon deletion of the CMAH gene. To understand the effects and implications of the lack of CMAH activity in more detail, a Cmah knock-out model in mice is of keen interest in basic and applied research. The analysis method to determine the phenotype of this mouse model is herein described in detail, and is based on the detection of both N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in the liver and milk of wild-type and Cmah knock-out mice. Endogenous sialic acids are released and derivatized with o-phenylenediamine to generate fluorogenic derivatives, which can be subsequently analyzed by HPLC. The presented protocol can be also applied for the analysis of milk and tissue samples from various other origins, and may be of use to investigate the nutritional and health effects of N-glycolylneuraminic acid.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

We describe a HPLC-based method for the determination of N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in mouse liver and milk.

野生型および肝臓の肝臓試料および牛乳試料中のシアル酸の定量<em&gt; CMAH</em&gt;ノックアウトマウス。

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish species is that it possesses interfertile cave and river-dwelling populations. This enables the genetic mapping of heritable traits that were fixed during adaptation to the different environments of these populations. While this species can be maintained and bred in the lab, it is challenging to both obtain embryos during the daytime and create hybrid embryos between strains. In vitro fertilization (IVF) has been used with a variety of different model organisms to successfully and repeatedly breed animals in the lab. In this protocol, we show how, by acclimatizing A. mexicanus to different light cycles coupled with changes in water temperature, we can shift breeding cycles to a chosen time of the day. Subsequently, we show how to identify suitable parental fish, collect healthy gametes from males and females, and produce viable offspring using IVF. This enables related procedures such as the injection of genetic constructs or developmental analysis to occur during normal working hours. Furthermore, this technique can be used to create hybrids between the cave and surface-dwelling populations, and thereby enable the study of the genetic basis of phenotypic adaptations to different environments.

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

In vitro fertilization is a commonly used technique with a variety of model organisms to maintain lab populations and produce synchronized embryos for downstream applications. Here, we present a protocol that implements this technique for different populations of the Mexican tetra fish, Astyanax mexicanus.

アスティアナックスメキシコのガメテコレクションと体外受精

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish ...

Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of these methods to non-model organisms. A series of protocols to optimize tissue collection from bats has been developed for a series of high-throughput sequencing approaches. Outlined here are protocols for the capture of bats, desired demographics to be collected for each bat, and optimized methods to minimize stress on a bat during tissue collection. Specifically outlined are methods for collecting and treating tissue to obtain (i) DNA for high molecular weight genomic analyses, (ii) RNA for tissue-specific transcriptomes, and (iii) proteins for proteomic-level analyses. Lastly, also outlined is a method to avoid lethal sampling by creating viable primary cell cultures from wing clips. A central motivation of these methods is to maximize the amount of potential molecular and morphological data for each bat and suggest optimal ways to preserve tissues so they retain their value as new methods develop in the future. This standardization has become particularly important as initiatives to sequence chromosome-level, error-free genomes of species across the world have emerged, in which multiple scientific parties are spearheading the sequencing of different taxonomic groups. The protocols outlined herein define the ideal tissue collection and tissue preservation methods for Bat1K, the consortium that is sequencing the genomes of every species of bat.

This is a protocol for the optimal tissue preparation for genomic, transcriptomic, and proteomic analyses of bats caught in the wild. It includes protocols for bat capture and dissection, tissue preservation, and cell culturing of bat tissue.

-オミクス分析と原発細胞培養のためのコウモリの組織採取

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of ...