These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.

1. Mouse mungitura protocollo I metodi descritti in questo protocollo sono state approvate dal IACUC. 1. Separazione della diga di Offspring <ol><li> Selezionare la diga da mungere. Scegliere una diga con una cucciolata di 4 o più cuccioli che è 8-12 giorni dopo il parto per fornire il latte la massima raccolta, anche se la raccolta è possibile in qualsiasi momento punto di post parto fino a 21 giorni. </li><li> Separare la diga dalla sua cucciolata di almeno 2 ore prima della mungitura. Nota: Se una voglia di mungere più di una diga in un dato periodo di tempo, è accettabile per ospitare le dighe separate nella stessa gabbia con cibo adeguato e acqua. </li></ol> 2. Somministrazione di ossitocina, Anestesia e lubrificante Eye <ol><li> Somministrare 2 UI / kg di ossitocina per via intraperitoneale (IP). L&#39;ossitocina è un ormone che agisce sulle ghiandole mammarie delle femmine in allattamento per stimolare il rilascio di latte. L&#39;ossitocina può essere acquisito from un veterinario. </li><li> Somministrare miscela anestetica contenente 80-100 mg / kg ketamina in combinazione con 5-10 mg / kg IP xilazina. Ad esempio, una miscela di 10 ml di brodo anestetico potrebbe essere preparata in anticipo per topi del peso di circa 30 g ed includerebbe 0,1 ml xilazina, 8,9 ml di H 2 O e 1,0 ml di ketamina. 0,25 ml di anestetico totale sarà sedare un topo di queste dimensioni per circa 20-30 min, che dovrebbe fornire un tempo adeguato per la raccolta del latte. Note: Per determinare che l&#39;animale è stato anestetizzato con successo, dolcemente immettere sul suo stomaco su una superficie solida; non dovrebbe essere in movimento i piedi o il tentativo di salire a piedi se lei è completamente anestetizzato. Nel caso di un topo non essere completamente anestetizzati con il dosaggio originale, il ricercatore può somministrare un altro ¼ o ½ della dose iniziale della miscela anestetica seconda delle dimensioni del mouse e / o il livello di sedazione che il mouse ha già raggiunto . Tuttavia, questo potreincrease la possibilità di una reazione avversa all&#39;anestesia, e può anche comportare il mouse che viene più profondamente anestetizzati e / o anestetizzato per un periodo di tempo più lungo. Nota: Se mungitura più di una diga, è necessario sfalsare ossitocina e iniezioni anestetiche causa della breve emivita di ossitocina e tempi di sedazione per chetamina e xilazina. </li><li> Applicare una piccola quantità di lubrificante dell&#39;occhio verso l&#39;angolo di ogni occhio e la diffusione di evitare gli occhi del topo si secchi mentre sotto anestesia. </li></ol> 3. Milk Collection La raccolta del latte è più facilmente eseguita con due ricercatori: un ricercatore di tenere il mouse anestetizzato esprimendo manualmente il latte (denominato R1), e un ricercatore di raccogliere il latte (R2). Questo metodo può anche essere eseguita con una sola persona, se il mouse è fissato su una superficie piana per evitare un danno. <ol><li> R2 dovrebbe essere dotato di sterili rilievi di preparazione alcol, un pip P-200etman, un puntale pulito per ogni topo, e un contenitore per il latte, quale un tubo Eppendorf da 1,5 ml o un esageratamente 1,2 ml (vedi tabella dei materiali). </li><li> Come l&#39;ossitocina comincia a fare effetto, latte delusione diventerà visibile nella zona mammaria del topo (vedi Figura 1A). R1: Svolgere una sterile tampone imbevuto di alcool e pulire delicatamente la zona mammaria del topo per pulire la zona prima della mungitura. Esprimere manualmente latte dal capezzolo con il pollice e l&#39;indice per massaggiare delicatamente e spremere il tessuto mammario in un movimento verso l&#39;alto finché una goccia visibile di latte comincia a formarsi alla base del capezzolo. </li><li> Premere il Pipetman stantuffo P-200 alla sua prima fermata per liberare l&#39;aria dalla punta della pipetta e prepararsi per la raccolta del latte. </li><li> Posizionare la punta della pipetta nella parte superiore della goccia di latte, e tirare delicatamente il latte nella punta della pipetta rilasciando lentamente la pressione sullo stantuffo. Fare attenzione a non mettere la punta troppo vicino al capezzolo o della pelle (vedereFigura 1B). Non è necessario rilasciare completamente il pistone come questa tirerà il latte fino alla parte superiore della punta della pipetta e renderà difficile per espellere il latte spesso viscoso nella tenuta del contenitore. </li><li> Espellere il latte nel contenitore con il pollice per premere lo stantuffo passato il primo arresto (vedere Figura 1C). Per facilitare l&#39;espulsione di piccoli volumi, premere la punta della pipetta contro il lato del tubo in modo che il liquido non viene perso. </li><li> Continuare ad esprimere manualmente latte di ogni capezzolo, muovendosi in senso orario o antiorario in modo da non saltare alcuna tettarelle. E &#39;sia accettabile e utile per tornare e continuamente estrarre il latte dal medesimo capezzolo dovrebbe produrre più latte di un altro. </li></ol> 4. Reversal anestetico nella diga <ol><li> Nella maggior parte dei casi, è comune per la diga di cominciare a cominciare a svegliare durante la mungitura. Se questo non è il caso, posizionare la diga in una cage indirettamente sotto una fonte di calore, come una coperta riscaldata di circolazione, fino a quando lei comincia a svegliarsi. Nota: Poiché la diga comincia a svegliarsi, tenere stretta osservazione della sua attività fino a quando lei è in grado di camminare su di lei gabbia da sola. </li><li> Una volta che la diga si muove sulla gabbia senza lotta, posizionare la schiena nella sua gabbia originale con la sua cucciolata. Senza effetti negativi sono stati notati per quanto riguarda la capacità dei cuccioli &#39;per alimentare dopo la raccolta del latte. </li></ol> 2. Muntjac mungitura protocollo I metodi descritti in questo protocollo sono state approvate dal IACUC. 1. Separazione della Doe di Offspring <ol><li> Selezionare la cerva da mungere. Reeves &#39;muntjac cervo generalmente danno vita ad uno fulvo 2. Mungere la cerva il giorno dopo parto per consentire l&#39;opportunità fulvo di accedere ai nutrienti essenziali nel colostro 8. Nota: Il fulvo di solito si nasconde e non si ripresenta durante il procedure; separazione della coppia madre-prole non è necessario. </li></ol> 2. Somministrazione di ossitocina, Anestesia e lubrificante Eye <ol><li> Somministrare 10 UI / kg di ossitocina per via intramuscolare (IM). L&#39;ossitocina è un ormone che agisce sulle ghiandole mammarie delle femmine in allattamento per stimolare la let-down di latte. L&#39;ossitocina può essere acquistato da un veterinario. </li><li> Amministrare l&#39;anestetico BAM IM 11 contenente Butorfanolo 0,45 mg / kg, azaperone 0,25 mg / kg, medetomadine 0,07 mg / kg. Una dose della miscela di anestetico BAM sarà sedare una muntjac per circa 20-30 min, che prevede ampio spazio per la raccolta del latte completo. Un&#39;altra opzione per anestesia è midazolam 1-2 mg / kg, che sedare una muntjac per circa 10-15 min. Mentre questo fornisce un tempo adeguato per la raccolta del latte, questo anestetico viene metabolizzato più rapidamente di BAM e l&#39;animale può tentare di sfuggire alla fine del periodo di tempo più breve. Nota: Minimal risposta al dolore, Riflessi minori upon toccare le orecchie, seguita dalla capacità di R1 per tenere il MJ senza lotta indica che l&#39;animale è stato anestetizzato con successo. Nota: Nel caso di un muntjac non essendo completamente anestetizzati con il dosaggio originale, il ricercatore può somministrare un altro ¼ o ½ della dose iniziale della miscela anestetica seconda delle dimensioni dell&#39;animale e / o il livello di sedazione che è già stato raggiunto. Tuttavia, questo potrebbe aumentare la probabilità di una reazione avversa all&#39;anestesia, e può anche comportare la muntjac essere più profondamente anestetizzati e / o anestetizzato per un periodo di tempo più lungo. </li><li> Applicare una piccola quantità di lubrificante fino all&#39;angolo di ciascun occhio e la diffusione di evitare gli occhi del muntjac si secchi mentre sotto anestesia. </li></ol> 3. Milk Collection La raccolta del latte è più facilmente eseguita con due ricercatori; un ricercatore di tenere il muntjac anestetizzato inil giro mentre esprimendo manualmente il latte (di seguito R1), e un secondo ricercatore per mantenere la testa del muntjac in una posizione comoda e sicura e per raccogliere il latte (R2). <ol><li> A seconda del anestetico usato, la mungitura deve essere effettuata sia 1) nei loro recinti per fornire un luogo sicuro per loro dovrebbero svegliarsi durante la procedura (2) o midazolam-indotta) in un antibagno-biancheria da letto libero per mantenere la pulizia (BAM- indotta). </li><li> R1 e R2 devono essere dotati di una garza imbevuta di etanolo e diverse provette da 15 ml in polipropilene coniche per contenere il latte. </li><li> Come l&#39;ossitocina comincia a fare effetto, latte delusione diventerà visibile nella zona mammaria del muntjac. R1: Sterilizzare mani guantate e le dita, così come l&#39;intera mammella e ogni singolo capezzolo dell&#39;animale con la garza imbevuta di etanolo. R2: Tenere la testa del muntjac in una posizione sicura e confortevole per consentire facilità di respirazione e aiutare a prevenire rumine rigurgito. Tenere le cl tubo di raccolta<html> ose al capezzolo essere munte senza toccarla per evitare potenziali contaminazioni. </li><li> Esprimere il latte da un capezzolo con il pollice e l&#39;indice per premere delicatamente il tessuto mammario in un movimento verso l&#39;alto fino a quando il capezzolo è gonfio di latte, e rotolare delicatamente il latte dal capezzolo e nel tubo che R2 è in possesso (vedi Figura 2 ). </li><li> Nota: Il latte viene fuori in un flusso, quindi è importante per R2 per avere il tubo di raccolta posizionato in modo che poco o nessun latte sarà sprecato. </li><li> Mammella della muntjac è diviso in quadranti. R1: Continuare a estrarre il latte da ogni quadrante fino a che il latte non scorre più facilmente. Se il latte non può essere espresso da una tettarella, espresso da tutte le altre tettarelle prima di tornare al primo. E &#39;sia accettabile e utile per tornare e continuamente estrarre il latte dal medesimo capezzolo dovrebbe produrre più latte di un altro. </li></ol> 4. Reversal anestetico nel Doe t &quot;&gt; E &#39;comune per midazolam indotta doe per cominciare a svegliarsi durante il processo di mungitura. Nella maggior parte dei casi, la cerva tenterà di fuggire prima che tutto il latte è stato espresso. ritenuta minore è usata in uno sforzo per aumentare il latte rendimento, ma la sicurezza e il comfort sia dei ricercatori e la cerva sono ugualmente importanti. <ol><li> Somministrare atipamezolo a 2,5 mg / mg medetomadine per via sottocutanea per una rapida inversione della BAM anestetizzato doe. Nota: Con entrambi i tipi di anestesia, è necessario mantenere una stretta osservazione del doe fino a quando lei è in grado di camminare da sola senza inciampare o cadere, ed è in grado di mangiare e bere senza timore di aspirazione o di soffocamento. Senza effetti negativi sono stati notati in relazione alla capacità del fulvo ad allattare dopo la raccolta del latte. </li></ol>

<ol>
	<li>Dueling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).</li><li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+(Muntiacus+reevesi+micrurus)+in+northern+Taiwan,+Republic+of+China.">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li><li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP.">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li><li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+antibody+via+mother's+milk.">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li><li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein.">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+collecting+milk+from+mice.">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+effects+of+litter+size+and+lactation.">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+mouse.">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li><li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior.">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li><li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer.">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Mouse Ci sono diversi fattori da prendere in considerazione durante la raccolta del latte da un mouse, di cui 1) la quantità di tempo dedicato per la raccolta, 2) la dose di ossitocina somministrata, 3) quanti cuccioli la diga è attualmente infermieristica e 4) l&#39;importo di tempo che è trascorso da quando parto al momento della raccolta. Utilizzando gli studi precedenti come linee guida, abbiamo deciso di ottimizzare le condizioni per la produzione di latte. <p cl...

Modelli animali forniscono informazioni patologia malattia che non può essere acquisita mediante analisi in vitro. Per fornire i risultati più efficaci, è importante utilizzare un modello animale che è strettamente correlata alla malattia e specie di interesse. Ad esempio, la Reeves &#39;muntjac (Muntiacus reevesi), un piccolo cervo asiatico 1,2, e topi transgenici che esprimono la proteina prionica cervide (CerTgPrP) 3 sono modelli animali utili per le specie di cervidi. Entrambe le specie sono polyestrous, che permette tutto l&#39;anno di allevamento, e quindi una fonte costante per i tessuti e fluidi legate alla gravidanza per studiare meccanismi specifici di cervidi biologia. Studi di latte hanno una vasta gamma di applicazioni che sono più semplice (ed economico) compiute in modelli animali che nell&#39;uomo. I ricercatori hanno potuto studiare il latte e il colostro come una potenziale fonte di 1) trasmissione di malattie infettive, 2) immunoglobuline trasferiti dalla madre alla prole in svipment dell&#39;immunità passiva 4 e 3) lattoferrina, una proteina presente nel latte materno umano coinvolto nella immunità passiva che i ricercatori stanno tentando di produrre commercialmente 5. La raccolta di una notevole quantità di latte proveniente da animali di piccola taglia può rivelarsi un compito difficile. Rogers ha proposto un metodo per raccogliere il latte da ratti 6, che è stato successivamente utilizzato in topi. DePeters e Hovey proposti due metodi per la raccolta del latte, uno con un aspirapolvere manualmente generata prodotta da una lampadina pipetta gomma collegata ad una pipetta Pasteur, e una seconda che richiede la costruzione di un gruppo di mungitura, che viene poi collegato ad una sorgente di vuoto (ad esempio come un rubinetto) per raccogliere il latte topo 7. Qui vi proponiamo un metodo semplice ed economico per la raccolta del latte da entrambi i topi e Reeves &#39;muntjac cervo, che richiede solo prontamente disponibili attrezzature di laboratorio e le competenze tecniche di base. Il nostro metodo produce quantità sufficienti di latte per varieapplicazioni.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:360px;">Materials-Mouse</td>
			<td style="width:297px;"></td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:116px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>011075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>NADA 139236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eye lubricant</td>
			<td>MWI/Apexa</td>
			<td>701013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (2 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Materials- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Midazolam (1-2 mg/kg)</td>
			<td>Amerisource Bergen Drug Corp</td>
			<td>924326</td>
			<td>optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td>Fort Dodge Animal Health</td>
			<td>NADA 135-780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>NADA 141-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (10 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-200 Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 &#956;L pipette tips</td>
			<td>Light Labs</td>
			<td>B-2004-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>005427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">27 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>002031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">22 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 ml luer lock syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>001377</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Mouse Dai nostri esperimenti, abbiamo determinato che è possibile raccogliere circa 100-400 ml di latte da un topo di laboratorio, dipendenti da diverse variabili. Queste variabili includono 1) la quantità di tempo dedicato per la raccolta, 2) la dose di ossitocina somministrata, 3) quanti cuccioli la diga è attualmente infermieristica e 4) la quantità di tempo dopo il parto. I nostri studi hanno dimostrato che il rendimento massimo si ottiene quando le dighe sono separa...

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Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Metodi Latte di raccolta per topi e Reeves &#39;Muntjac

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

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Research

JoVE Journal

Biology

19.7K Views.  Colorado State University. Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer. 

Video: Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain quality. F. graminearum also causes stalk and ear rots of maize and is a producer of mycotoxins such as the trichothecenes that contaminate grain and are harmful to humans and livestock (Goswami and Kistler, 2004).

The fungus produces two types of spores. Ascospores, the propagules resulting from sexual reproduction, are the main source of primary infection.  These spores are forcibly discharged from mature perithecia and dispersed by wind (Francl et al 1999). Secondary infections are mainly caused by macroconidia which are produced by asexual means on the plant surface. To study the developmental processes of ascospores in this fungus, a procedure for their collection in large quantity under sterile conditions was required. Our protocol was filmed in order to generate the highest level of information for understanding and reproducibility; crucial aspects when full genome gene expression profiles are generated and interpreted. In particular, the variability of ascospore germination and biological activity are dependent on the prior manipulation of the material. The use of video for documenting every step in ascospore production is proposed in order to increase standardization, complying with the increasingly stringent requirements for microarray analysis. The procedure requires only standard laboratory equipment. Steps are shown to prevent contamination and favor time synchronization of ascospores.

To study the developmental processes of ascospores in Gibberella zeae, a procedure for collection under sterile conditions is filmed in order to generate the highest level of information for protocol description. This should facilitate the reproducibility of the experiment, a crucial aspect when full genome expression profile tests are implemented.

Gibberella zeae ascospore di produzione e di raccolta di esperimenti di microarray.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain ...

Ricerca

Biologia

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

Campionamento di acqua di mare e di raccolta

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Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Necroscopia diagnostica e selezionati Collezione di tessuti e campioni di ratti e topi

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

Di base<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metodi: sincronizzazione e di osservazione

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound responses and repair in this model have illuminated our understanding of the cytoskeletal and genomic responses to tissue damage. The two most commonly used methods to wound the C. elegans adult skin are pricks with microinjection needles, and local laser irradiation. Needle wounding locally disrupts the cuticle, epidermis, and associated extracellular matrix, and may also damage internal tissues. Laser irradiation results in more localized damage. Wounding triggers a succession of readily assayed responses including elevated epidermal Ca2+ (seconds-minutes), formation and closure of an actin-containing ring at the wound site (1-2 hr), elevated transcription of antimicrobial peptide genes (2-24 hr), and scar formation. Essentially all wild type adult animals survive wounding, whereas mutants defective in wound repair or other responses show decreased survival. Detailed protocols for needle and laser wounding, and assays for quantitation and visualization of wound responses and repair processes (Ca dynamics, actin dynamics, antimicrobial peptide induction, and survival) are presented.

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The adult C. elegans skin is a tractable model for studies of epithelial wound responses, including wound closure, scar formation, and innate immunity.

Metodi per la pelle Ferimento e saggi per risposte ferita<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from zebrafish has not been established. The previous methods for blood collection from zebrafish are lethal, such as lateral incision, decapitation and tail ablation. Thus we have developed a novel &#8220;repeated&#8221; blood collection method, and present here a detailed protocol outlining this procedure. This method is minimally invasive and results in a very low mortality rate (2.3%) for zebrafish, thus enabling repeated blood sampling from the same individual. The maximum volume of blood sampling is dependent on body weight of the fish. The volume for repeated blood sampling at intervals should be&#160;&#8804;0.4% of body weight every week or &#8804;1% every 2 weeks, which were evaluated by measurements of blood hemoglobin. Additionally, hemoglobin, fasting blood glucose, plasma triacylglycerol (TG) and total cholesterol levels in male and female adult zebrafish were measured. We also applied this method to investigate the dysregulation of glucose metabolism in diet-induced obesity. This blood collection method will allow many applications, including glucose and lipid metabolism and hematological studies, which will increase the use of zebrafish as a human disease model organism.

Repeated blood sampling is necessary and important in animal research. We developed a novel, non-lethal and reliable method for repeated blood collection from adult zebrafish, and applied this method to the study of blood biochemistry, including glucose metabolism.

Ripetuto il prelievo di sangue per esami del sangue in Zebrafish adulti

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

Milk Collection nella Rat Utilizzando tubi capillari e stima di tenore di materia grassa per Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). These pacemaker APs reflect the coordinated activity of numerous membrane currents and intracellular calcium cycling. However the precise mechanisms that drive spontaneous pacemaker activity in SAMs remain elusive. Acutely isolated SAMs are an essential preparation for experiments to dissect the molecular basis of cardiac pacemaking. However, the indistinct anatomy, complex microdissection, and finicky enzymatic digestion conditions have prevented widespread use of acutely isolated SAMs. In addition, methods were not available until recently to permit longer-term culture of SAMs for protein expression studies. Here we provide a step-by-step protocol and video demonstration for the isolation of SAMs from adult mice. A method is also demonstrated for maintaining adult mouse SAMs in vitro and for expression of exogenous proteins via adenoviral infection. Acutely isolated and cultured SAMs prepared via these methods are suitable for a variety of electrophysiological and imaging studies.

Methods are demonstrated for the isolation of sinoatrial node myocytes (SAMs) from adult mice for patch clamp electrophysiology or imaging studies. Isolated cells can be used directly or can be maintained in culture to permit expression of proteins of interest, such as genetically encoded reporters.

Metodi per l&#39;isolamento, la cultura, e la caratterizzazione funzionale di seno-atriale Nodo miociti da topi adulti

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in mammals. However, humans cannot oxidize cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid to cytidine monophosphate-N-glycolylneuraminic acid due to a primary exon deletion of the CMAH gene. To understand the effects and implications of the lack of CMAH activity in more detail, a Cmah knock-out model in mice is of keen interest in basic and applied research. The analysis method to determine the phenotype of this mouse model is herein described in detail, and is based on the detection of both N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in the liver and milk of wild-type and Cmah knock-out mice. Endogenous sialic acids are released and derivatized with o-phenylenediamine to generate fluorogenic derivatives, which can be subsequently analyzed by HPLC. The presented protocol can be also applied for the analysis of milk and tissue samples from various other origins, and may be of use to investigate the nutritional and health effects of N-glycolylneuraminic acid.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

We describe a HPLC-based method for the determination of N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in mouse liver and milk.

Determinazione degli acidi sialici nei campioni di fegato e latte di tipo selvatico e<em&gt; CMAH</em&gt; Mouse Knock-out.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish species is that it possesses interfertile cave and river-dwelling populations. This enables the genetic mapping of heritable traits that were fixed during adaptation to the different environments of these populations. While this species can be maintained and bred in the lab, it is challenging to both obtain embryos during the daytime and create hybrid embryos between strains. In vitro fertilization (IVF) has been used with a variety of different model organisms to successfully and repeatedly breed animals in the lab. In this protocol, we show how, by acclimatizing A. mexicanus to different light cycles coupled with changes in water temperature, we can shift breeding cycles to a chosen time of the day. Subsequently, we show how to identify suitable parental fish, collect healthy gametes from males and females, and produce viable offspring using IVF. This enables related procedures such as the injection of genetic constructs or developmental analysis to occur during normal working hours. Furthermore, this technique can be used to create hybrids between the cave and surface-dwelling populations, and thereby enable the study of the genetic basis of phenotypic adaptations to different environments.

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

In vitro fertilization is a commonly used technique with a variety of model organisms to maintain lab populations and produce synchronized embryos for downstream applications. Here, we present a protocol that implements this technique for different populations of the Mexican tetra fish, Astyanax mexicanus.

Collezione Gamete e Fecondazione in vitro di Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish ...