These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.

1. Protocole traite souris Les méthodes décrites dans le présent protocole ont été approuvés par IACUC. 1. Séparation du barrage de Offspring <ol><li> Sélectionnez le barrage à traire. Choisissez un barrage avec une portée de 4 ou plus petits qui est de 8-12 jours après l&#39;accouchement de fournir du lait maximale collection-même si la collecte est possible à tout point de temps après l&#39;accouchement jusqu&#39;à 21 jours. </li><li> Séparer le barrage de sa litière au moins 2 heures avant la traite. Remarque: Si un désir de lait plus d&#39;un barrage dans une période de temps donnée, il est acceptable pour abriter les barrages séparés dans la même cage avec une alimentation adéquate et d&#39;eau. </li></ol> 2. L&#39;administration de l&#39;ocytocine, anesthésie et des yeux Lubrifiant <ol><li> Administrer 2 UI / kg par voie intrapéritonéale d&#39;ocytocine (IP). L&#39;ocytocine est une hormone qui agit sur les glandes mammaires de femelles en lactation à stimuler la libération de lait. L&#39;ocytocine peut être acquise from un vétérinaire. </li><li> Administrer un mélange anesthésique contenant 80-100 mg / kg de kétamine en association avec 5-10 mg / kg de xylazine IP. Par exemple, un mélange de 10 ml actions anesthésique peut être préparé à l&#39;avance pour les souris pesant environ 30 g et comprendrait 0,1 ml de xylazine, 8,9 ml H 2 O, et 1,0 ml de kétamine. 0,25 ml anesthésie totale endormir une souris de cette taille environ 20-30 min, ce qui devrait donner suffisamment de temps pour la collecte du lait. Notes: Pour déterminer que l&#39;animal a été anesthésié avec succès, la placer délicatement sur le ventre sur une surface solide; elle ne doit pas être en mouvement ses pieds ou de tenter de monter à ses pieds si elle est complètement anesthésié. Dans le cas d&#39;une souris anesthésiée pas pleinement avec la dose initiale, le chercheur peut administrer un autre quart ou la moitié de la dose initiale du mélange anesthésique en fonction de la taille de la souris et / ou le niveau de sédation que la souris a déjà atteint . Toutefois, cela pourrait iUGMENTATION la probabilité d&#39;une réaction indésirable à l&#39;anesthésie, et peut également conduire à la souris étant anesthésiée plus profondément et / ou l&#39;anesthésie pendant une période de temps plus longue. Remarque: Si la traite plus d&#39;un barrage, il est nécessaire d&#39;échelonner l&#39;ocytocine et les injections anesthésiques en raison de la courte demi-vie de l&#39;ocytocine et les temps de sédation de la kétamine et de xylazine. </li><li> Appliquez une petite quantité de lubrifiant oeil au coin de chaque oeil et se propage à empêcher les yeux de la souris de se dessécher sous anesthésie. </li></ol> 3. Collecte de lait La collecte du lait est plus facilement réalisée avec deux chercheurs: un chercheur de tenir la souris anesthésiée tout en exprimant manuellement le lait (dénommé R1), et un chercheur pour recueillir le lait (R2). Cette méthode peut également être effectuée avec une seule personne, si la souris est fixé sur une surface plane pour éviter un préjudice. <ol><li> R2 doit être équipé tampons à l&#39;alcool stériles, un pip P-200Etman, une pointe de pipette propre pour chaque souris, et un récipient pour contenir le lait, comme un tube Eppendorf de 1,5 ml ou un cryovial 1,2 ml (voir tableau des matériaux). </li><li> Comme l&#39;ocytocine commence à prendre effet, la descente du lait sera visible dans la zone mammaire de la souris (voir la figure 1A). R1: Déballer un tampon à l&#39;alcool stérile et essuyez délicatement la zone mammaire de la souris pour nettoyer la zone avant la traite. Exprimer manuellement le lait du trayon en utilisant le pouce et l&#39;index pour masser doucement et presser le tissu mammaire dans un mouvement ascendant jusqu&#39;à ce qu&#39;un bourrelet visible de lait commence à se former à la base de la tétine. </li><li> Appuyez sur le piston Pipetman P-200 à son premier arrêt pour libérer l&#39;air de la pointe de la pipette et se préparer pour la collecte du lait. </li><li> Placez la pointe de la pipette au sommet de la goutte de lait, et tirez doucement le lait dans la pointe de la pipette en libérant lentement la pression sur le piston. Prenez soin de ne pas mettre la pointe trop près de la tétine ou la peau (voirFigure 1B). Il n&#39;est pas nécessaire de libérer complètement le piston car cela va tirer le lait tout le chemin vers le sommet de la pointe de la pipette et il sera difficile d&#39;expulser le lait souvent visqueux dans le récipient de maintien. </li><li> Expulser le lait dans le récipient à l&#39;aide du pouce sur le piston au-delà de la première étape (voir figure 1C). Afin de faciliter l&#39;expulsion de petits volumes, appuyez sur la pointe de la pipette contre le côté du tube de manière à ce qu&#39;aucun liquide est perdue. </li><li> Continuer à exprimer manuellement le lait de chaque trayon, se déplaçant dans le sens horaire ou antihoraire afin de ne pas sauter des trayons. Il est à la fois acceptable et utile de revenir sans cesse et exprimer le lait de la même tétine doit-il produire plus de lait que les autres. </li></ol> 4. Reprise anesthésique dans le barrage <ol><li> Dans la plupart des cas, il est fréquent que le barrage pour commencer à commencer à se réveiller pendant le processus de traite. Si ce n&#39;est pas le cas, placez le barrage dans un cage indirectement sous une source de chaleur, comme une couverture de circulation chauffée, jusqu&#39;à ce qu&#39;elle commence à se réveiller. Remarque: Comme le barrage commence à se réveiller, garder une surveillance étroite de son activité jusqu&#39;à ce qu&#39;elle est capable de marcher sur sa cage elle-même. </li><li> Une fois le barrage se déplace sur la cage sans lutte, placer son dos dans sa cage d&#39;origine avec sa litière. Pas d&#39;effets néfastes ont été constatés à l&#39;égard de la capacité des petits à nourrir après la collecte du lait. </li></ol> 2. Protocole traite Muntjac Les méthodes décrites dans le présent protocole ont été approuvés par IACUC. 1. Séparation de la Biche de Offspring <ol><li> Sélectionnez la biche à traire. Les cerfs muntjac de Reeves donnent généralement naissance à un faon 2. Traire la biche le jour après l&#39;accouchement afin de permettre la possibilité de faon d&#39;avoir accès à des nutriments essentiels dans le colostrum 8. Remarque: Le faon cache habituellement et ne réapparaît pas au cours de la procedure; la séparation de la paire mère-progéniture n&#39;est pas nécessaire. </li></ol> 2. L&#39;administration de l&#39;ocytocine, anesthésie et des yeux Lubrifiant <ol><li> Administrer 10 UI / kg de l&#39;ocytocine par voie intramusculaire (IM). L&#39;ocytocine est une hormone qui agit sur les glandes mammaires de femelles en lactation à stimuler la déception de lait. L&#39;ocytocine peut être acquis auprès d&#39;un vétérinaire. </li><li> Administrer l&#39;anesthésique BAM IM 11 contenant butorphanol 0,45 mg / kg, azapérone 0,25 mg / kg, medetomadine 0,07 mg / kg. Une dose de mélange anesthésique BAM endormir un muntjac environ 20-30 min, ce qui donne suffisamment de temps pour la collection complète de lait. Une autre option pour l&#39;anesthésie est midazolam à 1-2 mg / kg, ce qui endormir un muntjac environ 10-15 min. Bien que cela fournit suffisamment de temps pour la collecte du lait, ce anesthésique est métabolisé plus rapidement que les BAM et l&#39;animal peuvent tenter de s&#39;échapper à la fin de la période de temps plus courte. Remarque: Une réponse minimale à la douleur, Réflexes mineures en touchant les oreilles, suivies par la capacité de R1 à tenir le MJ sans lutte indique que l&#39;animal a été anesthésié avec succès. Remarque: Dans le cas d&#39;un muntjac pas pleinement anesthésiés avec de la dose initiale, le chercheur peut administrer un autre quart ou la moitié de la dose initiale du mélange anesthésique en fonction de la taille de l&#39;animal et / ou le niveau de sédation, qui a déjà été atteint. Toutefois, cela pourrait augmenter le risque d&#39;une réaction indésirable à l&#39;anesthésie, et peut également entraîner la muntjac être plus profondément anesthésié et / ou anesthésié pour une période de temps plus longue. </li><li> Appliquez une petite quantité de lubrifiant dans le coin de chaque oeil et la propagation de prévenir les yeux du muntjac de sécher sous anesthésie. </li></ol> 3. Collecte de lait La collecte du lait est plus facilement réalisée avec deux chercheurs; un chercheur de tenir le muntjac anesthésié dansla tour tout en exprimant manuellement le lait (désigné par R1), et un second chercheur à garder la tête de la muntjac dans une position confortable et sûre et pour recueillir le lait (R2). <ol><li> Selon l&#39;anesthésique utilisé, la traite doit être effectuée soit 1) dans leurs stylos à fournir un endroit sûr pour eux devraient-ils se réveiller au cours de la procédure (midazolam induite) 2) ou dans une antichambre d&#39;une literie à maintenir la propreté (BAM- induite). </li><li> R1 et R2 doivent être équipés d&#39;une gaze imbibée d&#39;éthanol et 15 ml de plusieurs tubes coniques en polypropylene pour maintenir le lait. </li><li> Comme l&#39;ocytocine commence à prendre effet, la descente du lait sera visible dans la zone mammaire du muntjac. R1: Désinfecter les mains gantées et des doigts, ainsi que l&#39;ensemble du pis et les trayons de l&#39;animal individuel avec de la gaze imbibée d&#39;éthanol. R2: Maintenez la tête du muntjac dans une position sûre et confortable pour permettre une facilité de respiration et aider à prévenir la régurgitation rumen. Tenez les cl tubes de prélèvement<html> ose à la tétine étant traire sans le toucher pour éviter la contamination potentielle. </li><li> Exprimez-lait d&#39;une tétine en utilisant le pouce et l&#39;index pour presser doucement le tissu mammaire dans un mouvement ascendant jusqu&#39;à ce que la tétine est gorgé de lait, et rouler doucement le lait du trayon et dans le tube que R2 tient (voir la figure 2 ). </li><li> Remarque: Le lait sort dans un flux, il est donc important pour R2 pour que le tube de prélèvement placé de sorte que peu ou pas de lait sera gaspillée. </li><li> Le pis de l&#39;muntjac est divisé en quadrants. R1: Continuer à exprimer le lait de chaque quadrant jusqu&#39;à ce que le lait ne coule plus facilement. Si le lait ne peut pas être exprimé d&#39;une tétine, exprimer de toutes les autres tétines avant de revenir à la première. Il est à la fois acceptable et utile de revenir sans cesse et exprimer le lait de la même tétine doit-il produire plus de lait que les autres. </li></ol> 4. Reprise anesthésique dans le Doe t &quot;&gt; Il est commun pour une lapine induite midazolam à commencer à se réveiller au cours du processus de traite. Dans la plupart des cas, la biche va tenter de s&#39;échapper avant tout le lait a été exprimé. retenue mineure est utilisé dans un effort pour augmenter le lait rendement, mais la sécurité et le confort des deux chercheurs et la biche sont tout aussi importants. <ol><li> Administrer atipamezole à 2,5 mg / mg medetomadine voie sous-cutanée pour l&#39;inversion rapide de BAM anesthésié biche. Remarque: Avec les deux types d&#39;anesthésique, il est nécessaire de maintenir une surveillance étroite de la biche jusqu&#39;à ce qu&#39;elle est capable de marcher sur son propre sans trébucher et de tomber, et est capable de manger et de boire sans crainte d&#39;aspiration ou d&#39;étouffement. Pas d&#39;effets néfastes ont été constatés en ce qui concerne la capacité de la faon d&#39;allaiter après la collecte du lait. </li></ol>

<ol>
	<li>Dueling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).</li><li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+(Muntiacus+reevesi+micrurus)+in+northern+Taiwan,+Republic+of+China.">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li><li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP.">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li><li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+antibody+via+mother's+milk.">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li><li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein.">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+collecting+milk+from+mice.">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+effects+of+litter+size+and+lactation.">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+mouse.">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li><li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior.">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li><li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer.">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Souris Il ya plusieurs facteurs à prendre en considération lors de la collecte de lait d&#39;une souris, y compris 1) le temps mis de côté pour la collecte, 2) la dose d&#39;ocytocine administrée, 3) combien de chiots barrage est actuellement infirmière et 4) le montant de temps qui s&#39;est écoulé depuis la mise bas au moment de la collecte. En utilisant des études précédentes que les lignes directrices, nous avons décidé d&#39;optimiser les conditions pour la...

Les modèles animaux donnent un aperçu de la pathologie de la maladie qui ne peut être obtenu par une analyse in vitro. De fournir les résultats les plus efficaces, il est important d&#39;utiliser un modèle animal qui est étroitement liée à la maladie et des espèces d&#39;intérêt. Par exemple, le muntjac de l&#39;Reeves (Muntiacus reevesi), un petit cerf Asie 1,2, et les souris transgéniques exprimant la protéine prion des cervidés (CerTgPrP) 3 sont des modèles animaux utiles pour les espèces de cervidés. Les deux espèces sont polyestrous, permettant l&#39;année élevage, et donc une source constante pour les tissus et les fluides liés à la grossesse pour étudier les mécanismes spécifiques à la biologie des cervidés. Études de lait ont une vaste gamme d&#39;applications qui sont plus simplement (et peu coûteuse) accomplis dans des modèles animaux que chez les humains. Les chercheurs peuvent étudier lait et le colostrum comme une source potentielle de 1) la transmission de maladies infectieuses, 2) des immunoglobulines transférés de la mère à la progéniture dans le dévepement de l&#39;immunité passive 4 et 3) la lactoferrine, une protéine présente dans le lait maternel humain impliqué dans l&#39;immunité passive que les chercheurs tentent actuellement de produire commercialement 5. Collecte une quantité importante de lait des petits animaux peut s&#39;avérer être une tâche difficile. Rogers propose une approche de la collecte du lait de rats 6, qui a ensuite été utilisés chez la souris. Depeters et Hovey proposé deux procédés pour la collecte du lait, l&#39;une utilisant un vide manuellement généré produite par une ampoule de pipette en caoutchouc à l&#39;aide d&#39;une pipette Pasteur, et un second nécessitant la construction d&#39;une unité de traite, qui est ensuite fixé à une source de dépression (par exemple comme un robinet) pour récolter le lait de la souris 7. Nous proposons ici une méthode simple et peu coûteuse pour la collecte du lait de la souris et le muntjac le cerf de Reeves, qui nécessite un équipement de laboratoire seulement facilement disponibles et les compétences techniques de base. Notre méthode donne des volumes suffisants de lait pour diversapplications.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:360px;">Materials-Mouse</td>
			<td style="width:297px;"></td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:116px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>011075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>NADA 139236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eye lubricant</td>
			<td>MWI/Apexa</td>
			<td>701013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (2 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Materials- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Midazolam (1-2 mg/kg)</td>
			<td>Amerisource Bergen Drug Corp</td>
			<td>924326</td>
			<td>optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td>Fort Dodge Animal Health</td>
			<td>NADA 135-780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>NADA 141-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (10 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-200 Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 &#956;L pipette tips</td>
			<td>Light Labs</td>
			<td>B-2004-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>005427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">27 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>002031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">22 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 ml luer lock syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>001377</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Souris De nos expériences, nous avons déterminé qu&#39;il est possible de collecter environ 100-400 pi de lait d&#39;une souris de laboratoire, en fonction de plusieurs variables. Ces variables comprennent: 1) le temps mis de côté pour la collecte, 2) la dose d&#39;ocytocine administrée, 3) combien de chiots barrage est actuellement infirmière et 4) le montant de la post accouchement de temps. Nos études ont montré que le rendement le plus élevé est obtenu lorsque...

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Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

19.6K vues.  Colorado State University. Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer. 

Vidéo: Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain quality. F. graminearum also causes stalk and ear rots of maize and is a producer of mycotoxins such as the trichothecenes that contaminate grain and are harmful to humans and livestock (Goswami and Kistler, 2004).

The fungus produces two types of spores. Ascospores, the propagules resulting from sexual reproduction, are the main source of primary infection.  These spores are forcibly discharged from mature perithecia and dispersed by wind (Francl et al 1999). Secondary infections are mainly caused by macroconidia which are produced by asexual means on the plant surface. To study the developmental processes of ascospores in this fungus, a procedure for their collection in large quantity under sterile conditions was required. Our protocol was filmed in order to generate the highest level of information for understanding and reproducibility; crucial aspects when full genome gene expression profiles are generated and interpreted. In particular, the variability of ascospore germination and biological activity are dependent on the prior manipulation of the material. The use of video for documenting every step in ascospore production is proposed in order to increase standardization, complying with the increasingly stringent requirements for microarray analysis. The procedure requires only standard laboratory equipment. Steps are shown to prevent contamination and favor time synchronization of ascospores.

To study the developmental processes of ascospores in Gibberella zeae, a procedure for collection under sterile conditions is filmed in order to generate the highest level of information for protocol description. This should facilitate the reproducibility of the experiment, a crucial aspect when full genome expression profile tests are implemented.

Gibberella zeae ascospores production et la collecte d&#39;expériences sur biopuces.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain ...

Recherche

Biologie

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

L&#39;échantillonnage d&#39;eau de mer et de Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Autopsie de diagnostic et de certains tissus et de collecte des échantillons dans les rats et les souris

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

De base<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Méthodes: Synchronisation et d&#39;observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound responses and repair in this model have illuminated our understanding of the cytoskeletal and genomic responses to tissue damage. The two most commonly used methods to wound the C. elegans adult skin are pricks with microinjection needles, and local laser irradiation. Needle wounding locally disrupts the cuticle, epidermis, and associated extracellular matrix, and may also damage internal tissues. Laser irradiation results in more localized damage. Wounding triggers a succession of readily assayed responses including elevated epidermal Ca2+ (seconds-minutes), formation and closure of an actin-containing ring at the wound site (1-2 hr), elevated transcription of antimicrobial peptide genes (2-24 hr), and scar formation. Essentially all wild type adult animals survive wounding, whereas mutants defective in wound repair or other responses show decreased survival. Detailed protocols for needle and laser wounding, and assays for quantitation and visualization of wound responses and repair processes (Ca dynamics, actin dynamics, antimicrobial peptide induction, and survival) are presented.

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The adult C. elegans skin is a tractable model for studies of epithelial wound responses, including wound closure, scar formation, and innate immunity.

Méthodes pour Blessant Peau et Essais pour les réponses de blessure dans<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

La collecte du lait dans le rat en utilisant tubes capillaires et estimation de la teneur du lait en matières grasses en Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). These pacemaker APs reflect the coordinated activity of numerous membrane currents and intracellular calcium cycling. However the precise mechanisms that drive spontaneous pacemaker activity in SAMs remain elusive. Acutely isolated SAMs are an essential preparation for experiments to dissect the molecular basis of cardiac pacemaking. However, the indistinct anatomy, complex microdissection, and finicky enzymatic digestion conditions have prevented widespread use of acutely isolated SAMs. In addition, methods were not available until recently to permit longer-term culture of SAMs for protein expression studies. Here we provide a step-by-step protocol and video demonstration for the isolation of SAMs from adult mice. A method is also demonstrated for maintaining adult mouse SAMs in vitro and for expression of exogenous proteins via adenoviral infection. Acutely isolated and cultured SAMs prepared via these methods are suitable for a variety of electrophysiological and imaging studies.

Methods are demonstrated for the isolation of sinoatrial node myocytes (SAMs) from adult mice for patch clamp electrophysiology or imaging studies. Isolated cells can be used directly or can be maintained in culture to permit expression of proteins of interest, such as genetically encoded reporters.

Méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in mammals. However, humans cannot oxidize cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid to cytidine monophosphate-N-glycolylneuraminic acid due to a primary exon deletion of the CMAH gene. To understand the effects and implications of the lack of CMAH activity in more detail, a Cmah knock-out model in mice is of keen interest in basic and applied research. The analysis method to determine the phenotype of this mouse model is herein described in detail, and is based on the detection of both N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in the liver and milk of wild-type and Cmah knock-out mice. Endogenous sialic acids are released and derivatized with o-phenylenediamine to generate fluorogenic derivatives, which can be subsequently analyzed by HPLC. The presented protocol can be also applied for the analysis of milk and tissue samples from various other origins, and may be of use to investigate the nutritional and health effects of N-glycolylneuraminic acid.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

We describe a HPLC-based method for the determination of N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in mouse liver and milk.

Détermination des acides sialiques dans les échantillons de foie et de lait de type sauvage et<em&gt; CMAH</em&gt; Souris knock-out.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish species is that it possesses interfertile cave and river-dwelling populations. This enables the genetic mapping of heritable traits that were fixed during adaptation to the different environments of these populations. While this species can be maintained and bred in the lab, it is challenging to both obtain embryos during the daytime and create hybrid embryos between strains. In vitro fertilization (IVF) has been used with a variety of different model organisms to successfully and repeatedly breed animals in the lab. In this protocol, we show how, by acclimatizing A. mexicanus to different light cycles coupled with changes in water temperature, we can shift breeding cycles to a chosen time of the day. Subsequently, we show how to identify suitable parental fish, collect healthy gametes from males and females, and produce viable offspring using IVF. This enables related procedures such as the injection of genetic constructs or developmental analysis to occur during normal working hours. Furthermore, this technique can be used to create hybrids between the cave and surface-dwelling populations, and thereby enable the study of the genetic basis of phenotypic adaptations to different environments.

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

In vitro fertilization is a commonly used technique with a variety of model organisms to maintain lab populations and produce synchronized embryos for downstream applications. Here, we present a protocol that implements this technique for different populations of the Mexican tetra fish, Astyanax mexicanus.

Collection de gamètes et fertilisation in vitro d'Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish ...

Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of these methods to non-model organisms. A series of protocols to optimize tissue collection from bats has been developed for a series of high-throughput sequencing approaches. Outlined here are protocols for the capture of bats, desired demographics to be collected for each bat, and optimized methods to minimize stress on a bat during tissue collection. Specifically outlined are methods for collecting and treating tissue to obtain (i) DNA for high molecular weight genomic analyses, (ii) RNA for tissue-specific transcriptomes, and (iii) proteins for proteomic-level analyses. Lastly, also outlined is a method to avoid lethal sampling by creating viable primary cell cultures from wing clips. A central motivation of these methods is to maximize the amount of potential molecular and morphological data for each bat and suggest optimal ways to preserve tissues so they retain their value as new methods develop in the future. This standardization has become particularly important as initiatives to sequence chromosome-level, error-free genomes of species across the world have emerged, in which multiple scientific parties are spearheading the sequencing of different taxonomic groups. The protocols outlined herein define the ideal tissue collection and tissue preservation methods for Bat1K, the consortium that is sequencing the genomes of every species of bat.

This is a protocol for the optimal tissue preparation for genomic, transcriptomic, and proteomic analyses of bats caught in the wild. It includes protocols for bat capture and dissection, tissue preservation, and cell culturing of bat tissue.

Collection de tissus de chauves-souris pour -Analyses d'omics et culture cellulaire primaire

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of ...