The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

様々な実験手順と人道的な安楽死は、ホスト機関の倫理委員会によって、適切な規制当局によって承認されています。安楽死は、通常、頸椎脱臼に続いてCO 2窒息を使用して達成されます。 1.デバイス<ol><li>この原稿に記載されているように、高密度アセチル樹脂の固体ブロックのうちから機械装置の基部の主要部分を、。各終わりに棒を取るために、これらの2.5ミリメートル畑のうち、3ミリメートル、高上昇ストリップ、及び一部のマシンを作成します （図2と図3を参照）。 </li><li>丸められた端部を備えた2.4ミリメートルの直径のステンレス鋼からの棒を作ります。 注：蓋のメインフレームは、ジュラルミン板から機械加工されました。完成したデバイスの数は限られて博士グッドラードから入手可能です。 </li></ol>デバイスの2. <ol><li>はさみを使用して腹腔から小腸および結腸を解剖そして、手袋をはめた指。曲がったピンセットでそれを保持し、ゆっくりと腸から離れて引いて、腸間膜を削除します。 </li><li>それが10または20ミリリットルルアーフィッティングプラスチックシリンジに合うことができるように、その広い端で切られていたギルソンタイプのピペットチップを使用して、冷リン酸緩衝生理食塩水（PBS、pH7.4）で腸を洗浄します。 </li><li>紙タオルのシート上に小腸（SB）をレイアウトし、長さ（基端部、中間、および遠位 - SB1、SB2とSB3）に3等分に分割はさみを使用して。盲腸を削除し、コロンをレイアウト。 </li><li>ハサミで腸のセグメントにいくつかの非常に小さなカットは、流体が脱出し、腸の上に紙タオルのシートを置き、静かに液体を絞り出す、乾燥ブロットする準備の上で指を実行できるようにしてください。 </li><li>セクションを持ち上げて、以前にリン酸緩衝生理食塩水の入ったビーカーに浸漬して湿らせたステンレス製の棒を挿入します。 注：腸ですることができます必要に応じて（裏返し）verted。 </li><li>デバイスのベースに適合するようにサイズにカットカードやフィルター紙のラベルを付けます。それは事実上すべてのソリューションの影響を受けないよう鉛筆は、最高です。剖検日付は、実験的なコードや動物識別番号が提案されています。 </li><li>装置の基部にカードまたはろ紙を置きます。デバイスのベースのスロットにロッド、腸を挿入します。セグメントの近位端が標準化された方法で配置されていることを確認します。近位端は、カードのラベルの近くにある必要があります。 </li><li>ベースの上にデバイスのトップピースを置きます。縦方向のセクションをカットする手術用メスの刃を案内するための角度付きのバーを使用します。 注：組織を穏やかにし、慎重にナイフで移動しないことを確実にするために指で開催されている場合に役立ちます。 </li><li>デバイスのトップ部分を削除します。慎重に（その棒の上にまだ）ろ紙と組織を除去します。 注：FILの下に配置硬いカードの一枚ター紙がリフティングを支援します。 </li><li>セグメント（PBSに浸した手袋をはめた指先で）やや湿りました。腸を開き、平らそれを広めるために左右にロッド、サイドをロールバックします。組織はその後、ろ紙に付着します。 </li><li>視覚的に任意の肉眼的病変の準備を調べます。 </li><li>浅い浴（またはサンドイッチボックス）を含む固定液にろ紙に付着した組織を転送します。 注：組織は、ろ紙に付着するか、カードにそれがしっかりと取り付けられたままになります後。固定剤の広範囲の製剤を保持するために使用することができます。これは、カルノア液が最良の細胞増殖法のための理想的な固定である腸細胞増殖で6、の研究のために使用することをお勧めします。他のエンドポイントが必要な場合は、ホルマリンまたはその他の多くの固定剤を使用することもできます。 </li><li>固定（通常3時間）した後、70％エタノールに準備を移します。次いで、試料を、必要になるまで保存することができます。準備のC顔専用検討及び/又はH＆Eまたは他の組織学的染色技術、免疫組織化学および/ ​​またはin situハイブリダイゼーションのための組織サンプルの調製のために使用されます。 注：長期固定および/ ​​またはin situハイブリダイゼーション反応において免疫組織化学的反応性を減少させることができます。ポリプロピレンサンドイッチボックスは、製剤の多数を格納するための理想的です。 </li><li>必要に応じて種々の腸セグメントからの固定組織は、「スイスロール」にされ、上述のものを含む組織学的方法6の全範囲を用いて染色することができます。 「スイスロール」を行うには、腸のセグメントは、昆虫学、ピンで固定し、ワックスが6を埋め込 ​​むために処理カクテルスティックや爪楊枝に巻き付けろ紙、から削除されます。 </li><li>必要に応じて、異常な陰窩巣7を可視化するためにメチレンブルーとバルク組織を染色します。 </li><li>固定された準備をスコアレジャー。 </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

2つの演算子が完全に6分以内にマウスを剖検することができるようにデバイスを大幅にプロセスをスピードアップします。これは明らかな肉眼的病変と計量と主要な臓器を固定するための目視検査が含まれます。また、オペレータは、すすぎブロットと胃、盲腸、小腸および結腸の重さと全体のマウントを準備することができます。フラット化組織は非常に迅速に固定され、したがって、分?...

マウスおよび遺伝子改変マウス1-3は、様々な病理特に癌および胃腸管の炎症との関係の研究のための貴重なモデルです。これは多くの場合、小腸および/または結腸のホールマウントの準備が必要です。 ホールマウントの準備はオフセットはさみの精密ペアで行うことができますが、それはマウス 4当たり約20分を取ることができます。これは、マウスのかなりの量を必要とする比較研究のための非常に実用的ではありません（統計分析にグループ対象ごとに10を言います）。また、撮影した時間の長さは、組織の劣化の危険性を増大させます。この問題を軽減しようとすると、さまざまな切削製剤助剤の試験につながりました。最初は、切削溝と、金属プレートのシリーズに基づいているが、プレートは、組織を不明瞭にし、切断を制御することが困難でした。 conventiona私たちはその後、半分鉛筆の形状はメスのための良いガイド（ 図1）を作成する方法を見ることができるようリットル六面鉛筆は、最終的に、切断装置のためのインスピレーションを提供しました。これは、4切断ガイド5とフレームのデザインになりました。 図4の準備がはさみ準備とデバイスの準備の間の差を実証するように、このデバイスの有効性は劇的でした。 元のデバイスの頂部は、金属のいくつかの部分が、後のものから構成され、現在のモデルは、ジュラルミンの固体片から機械加工されました。ベースは、最高品質の高密度樹脂から機械加工しました。 デバイスは、それが大幅に高速化し、広範囲の用途を持つ製剤の品質と一貫性を向上させるように、マウス腸のホールマウントを調製するための非常に有用であることが証明されています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Delrin</td>
			<td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>High-density acetal resin similar material would suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duralumin plate</td>
			<td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finished device(s) ready for use</td>
			<td>Contact Dr Goodlad&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Contact&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk&#160; for supply details</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

その後の分析や定量化のためのマウス小腸および結腸の全体のマウントの準備には時間がかかり、困難な場合があります。我々は、切断し、「ロール」のマウスの腸は、急速に手で達成できるものよりも優れ、均一な品質の全載標本を調製するために簡単な装置の使用を記載しています。装置4は、ステンレス鋼ロッド、切断ガイドとして作用するトップを保持するベースを備えます。ロッドは、小腸[三分のに分割]および結腸の内腔に挿入されます。ロッド、サンプルは、デバイスのベースに保持スロットにろ紙またはカードの一枚の上に配置されています。装置の上面は、その後に配置され、切断ガイドとして機能します。トップピースの中央に2つの傾斜部分は、ナイフまたはメスを導くために使用され、ロッドの上に縦方向に腸を切断します。腸の切片を切断した後、上部が除去され、カード、TISSUEとロッドを穏やか装置から取り出し、ベンチ上に置きました。ロッドはそっとろ紙またはカードの基礎となる作品に腸部分を平らにし、固執する横ロールバックされます。最終調製物は、次いで、調べまたは固定し、後の分析のために保存することができます。製剤は、正常または遺伝的に改変されたマウスモデルにおける腸の変化の研究のための貴重です。製剤は、損傷、前癌病変は（異常クリプト巣（ACFを）と枯渇病巣（のMDFを）ムチン）、炎症の影響（炎）の研究と定量化のために使用されており、ポリープまたは腫瘍。

ポリープは（ 図4）は、組織を照らす左右に冷光源と実体顕微鏡下で識別しやすくなっています。これは、ポリープが得点については後述することができ、異なる事業者が合意に達することができるようにするために観察されたときに鉛筆マークのカードをマークすると便利です。組織はまた、上記またはトランス照明（ 図5）によってからの照明により病巣（の...

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A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

急速にマウス腸のホールマウントを準備するための簡単​​な装置

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Research

JoVE Journal

Medicine

19.4K ビュー.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

急速にマウス腸のホールマウントを準備するための簡単​​な装置

急速にマウス腸のホールマウントを準備するための簡単な装置