The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

다양한 실험 절차 및 인도적인 안락사는 호스트 기관 윤리위원회의 적절한 규제 기관에 의해 승인됩니다. 안락사는 일반적으로 자궁 경부 전위 다음 이산화탄소 질식을 사용하여 달성된다. 1. 장치 <ol><li> 머신이 논문에 기재된 바와 같이 고밀도 아세틸 수지의 고체 블록의 밖으로부터의베이스 장치의 주요부. 양쪽 끝 부분에있는 봉을하려면 다음 2.5 mm의 숲에서 3mm 높은 상승 스트립, 부품 기계를 만드는 (그림 2와 그림 3 참조). </li><li> 반올림 끝 2.4 mm 직경의 스테인레스 스틸 봉을 확인합니다. 참고 : 뚜껑의 주요 프레임은 두랄루민 플레이트에서 가공했다. 마무리 장치의 제한된 수의 박사 Goodlad에서 사용할 수 있습니다. </li></ol> 장치의 2. <ol><li> 가위를 사용하여 복강에서 소장과 대장을 해부하다그리고 장갑을 낀 손가락. 소장에서 당기고 부드럽게 곡선 집게로 잡고하여 장간막을 제거합니다. </li><li> 차가운 인산염 완충 식염수 (PBS, pH를 7.4)가 10 또는 20 ml의 루어 피팅 플라스틱 주사기에 맞게 할 수 있도록 자사의 넓은 끝에서 삭감했다 길슨 형 피펫 팁을 사용하여와 창자를 씻어. </li><li> 종이 타월의 시트에 소장 (SB)를 배치 및 길이 (근위부, 중간 및 원위부 - SB1, SB2 및 SB3)에서 세 개의 동일한 부분으로 나누어 가위를 사용하여. 맹장을 제거하고 대장을 배치. </li><li> 가위로 장 세그먼트로 몇 가지 아주 작은 상처는 유체 탈출과 내장을 통해 종이 타월 한 장을 놓고 부드럽게 유체를 짜내하여 건조시킨다하기 위해 준비를 통해 손가락을 실행할 수 있도록합니다. </li><li> 섹션을 들어 올려 이전에 인산염 완충 생리 식염수의 비커에 담가 적신 된 스테인레스 스틸 봉을 삽입합니다. 주 : 대장이 될 수 있습니다원하는 경우 전향 된 (뒤집어). </li><li> 장치의 기준에 맞게 크기로 카드 또는 필터 종이 잘라 조각을 레이블. 그것은 거의 모든 솔루션에 의해 영향을받지 같이 연필, 최고입니다. 부검 날짜 코드 및 실험 동물 식별 번호가 제안된다. </li><li> 장치의 기지로 카드 나 종이 필터를 놓습니다. 장치의 자료에있는 슬롯에 막대와 창자를 삽입합니다. 세그먼트의 기단부는 표준화 된 방식으로 배치되어 있는지 확인합니다. 기단부는 카드 라벨 ​​가까이 있어야한다. </li><li> 베이스를 통해 장치의 상단 부분을 놓습니다. 길이 방향 부분을 잘라 메스 블레이드를 안내하는 각도 막대를 사용합니다. 참고 : 조직을 부드럽게하고 신중하게 칼을 움직이지 않도록 손가락으로 유지되는 경우가 있습니다. </li><li> 장치의 상단 부분을 제거합니다. 조심스럽게 (자신의 막대에 계속) 필터 종이와 조직을 제거합니다. 참고 : FIL 아래에 배치 뻣뻣한 카드의 조각터 용지 리프팅에 도움이됩니다. </li><li> 세그먼트 (PBS에 담근 장갑 낀 손가락으로) 약간 젖은. 로드 롤, 사이드 장을 열고 평면을 확산 좌우합니다. 조직은 여과지에 부착한다. </li><li> 시각적으로 어떤 심한 병변에 대한 준비를 검사합니다. </li><li> 얕은 욕조 (또는 샌드 박스)를 함유하는 정착액을 여과지에 부착 된 조직을 옮긴다. 주 : 조직은 여과지에 부착 또는 카드에 단단히 부착 후에 남아. 고정 제의 다양한 제제를 보존하는 데 사용될 수있다. 그것은 Carnoy의 유체가 최고의 세포 증식에 이상적인 방법이다 장내 정착 세포 증식 (6)의 연구에 사용되는 것을 권장; 그러나 포르말린 또는 다른 엔드 포인트가 필요한 경우 다른 많은 고정 제를 사용할 수도있다. </li><li> 고정 (보통 3 시간) 한 후, 70 % 에탄올로 준비를 전송합니다. 요구 될 때까지 샘플을 그 다음에 저장 될 수있다. 준비의 C얼굴 연구 도중 및 / 또는 H &amp; E 염색법 또는 다른 조직 학적 기법, 면역 조직 화학 및 / 또는 계내 혼성화에 대한 조직 학적 샘플의 제조에 사용되는. 주 : 장기간 고정은 면역 반응 및 / 또는 현장 혼성화 반응에를 줄일 수 있습니다. 폴리 프로필렌 샌드위치 박스 제제의 다수의 저장에 적합하다. </li><li> 여러 장 세그먼트에서 고정 조직을 요구하는 경우 &#39;스위스 롤&#39;로 만들어 상술 비롯한 조직 학적 방법 (6)의 전체 범위로 염색 할 수있다. &#39;스위스 롤&#39;을 만들기 위해 장 세그먼트는 곤충학 핀 고정 및 왁스 (6)를 포함에 대해 처리 칵테일 스틱이나 이쑤시개 주위 압연 여과지,에서 제거됩니다. </li><li> 필요한 경우, 비정상적인 토굴의 초점 7을 시각화 메틸렌 블루와 대량 조직을 얼룩. </li><li> 에 고정 준비 점수레저. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. 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Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

두 사업자가 완전히 6 분내 마우스를 해부 할 수 있도록 장치는 크게 프로세스 속도. 이것은 분명 심한 병변과 무게와 주요 장기를 고정하기위한 육안 검사가 포함됩니다. 또한 운영자, 린스 오점과 위, 맹장, 소장 및 대장의 무게를 전체 마운트를 준비 할 수 있습니다. 평평 조직은 매우 빠르게 고정 따라서 저하 아티팩트를 방지 할 수 있습니다. (분리 속도에서) 장치의 주요 ...

마우스와 유전자 변형 마우스 1-3 다양한 병리 특히 암과 위장관의 염증과의 관계 연구를위한 귀중한 모델입니다. 이것은 종종 소장 및 / 또는 대장의 전체 마운트의 준비가 필요합니다. 전체 마운트의 제조는 오프셋 위 정밀 쌍으로 수행 될 수 있지만, 마우스를 4 내지 약 20 분 걸릴 수있다. 이 마우스의 상당한 양을 필요로 비교 연구, 매우 실용적되지 않습니다 (통계 분석에 그룹 주제 당 10 말). 또한, 촬영 시간의 길이는 조직의 열화의 위험을 증가시킨다. 이 문제를 완화하려는 시도는 다양한 절단 준비 에이즈의 재판을했다. 첫째는 절단 로브와, 금속판의 시리즈에 기초하지만, 판 조직을 가려 및 절단을 제어하는​​ 것이 곤란 하였다. 통상도우리는 다음 반 연필 모양 메스 (그림 1)에 대한 좋은 가이드를 만들 것입니다 방법을 볼 수 있기 때문에 L 여섯 양면 연필 마지막으로, 절단 장치에 대한 영감을 제공했다. 이 4 개의 절단 가이드 5 프레임의 설계 결과. 도 4의 제제는 가위 제조 및 제조 장치의 차이점을 설명으로이 장치의 효과는 극적이었다. 원래 장치의 상단 금속의 여러 조각, 나중에 사람들로 구성되었으며, 현재의 모델은 두랄루민의 단단한 조각에서 가공했다. 염기는 고품질 고밀도 수지에서 가공 하였다. 장치는 크게 속도 및 넓은 범위의 애플리케이션들을 갖는다는 제제의 품질 및 일관성을 향상으로 마우스의 소장 전체 마운트의 제조에 아주 유용하게 사용될 입증되었다.

<table><tbody><tr><td>Delrin</td><td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td><td></td><td>High-density acetal resin similar material would suffice</td></tr><tr><td>Duralumin plate</td><td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td><td></td><td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Finished device(s) ready for use</td><td>Contact Dr Goodlad&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk</td><td></td><td>Contact&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details</td></tr></tbody></table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

이후 분석 또는 정량 마우스 소장과 대장의 전체 마운트를 준비하는 것은 시간이 많이 걸리고 어려울 수 있습니다. 우리는 신속하게 손에 의해 달성 될 수있는 그에게 우수하고 균일 한 품질의 전체 마운트 준비를 준비하는 절단 할 수있는 간단한 장치의 사용과 &#39;롤&#39;마우스의 장에 대해 설명합니다. 장치는 4 스테인리스 봉 및 절단 가이드 역할 가기를 보유 염기를 포함한다. 로드는 소장 [분으로 분할] 및 결장의 루멘에 삽입된다. 로드 및 샘플을 다음의 장치를베이스에 유지 슬롯 여과지 또는 카드의 부분 위에 배치된다. 소자의 상단은 위치 및 절단 가이드로서 기능한다. 상부 부분의 중앙에 두 개의 각진 부분이 칼이나 외과 용 메스를 안내하는데 사용 봉의 상부에 종 방향으로 장을 절단한다. 장내 부분이 절단 된 후에, 상부는 제거되고, 카드, 담배 마는UE와로드 부드럽게 장치에서 제거하고 벤치에 배치합니다. 로드는 부드럽게 평평 및 필터 종이 또는 카드의 기본 조각에 장 세그먼트를 막대기 옆으로 롤백됩니다. 최종 제제는 조사 또는 고정하고 나중에 분석을 위해 저장 될 수있다. 준비는 정상 또는 유전자 변형 마우스 모델에서 장 변화의 연구를위한 귀중한 있습니다. 준비는 염증 (대장염), 손상, 전암 병변의 효과에 대한 연구 및 정량화를 위해 사용되어왔다 (비정상적인 토굴 초점 (하는 ACF)과 초점 (MDF에서) 고갈 점액) 및 용종 또는 종양.

폴립 (그림 4) 조직을 조명 옆으로 차가운 광원과 실체 현미경 하에서 쉽게 식별 할 수 있습니다. 그것은 용종이 득점 나중에 논의 될 수 있으며, 다른 사업자들이 합의에 도달 할 수 있도록 관찰 할 때 연필 표시가있는 카드를 표시하는 데 도움이됩니다. 조직은 [메틸렌 블루로] 확인하는 염색 대량 될 수 비정상적인 토굴의 초점 8 이상 또는 트랜스 조명에 의해에서 조명에 의?...

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A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

간단한 장치는 빠르게 마우스 소장의 전체 마운트를 준비하는 방법

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Research

JoVE Journal

Medicine

19.6K 조회수.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

비디오: A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a population of rapidly cycling intestinal stem cells (ISCs) characterized by their expression of the Lgr5 gene. These are supported by a quiescent stem cell population, marked by Bmi-1 expression, capable of replacing them in the event of injury. Investigating the interactions between these populations is crucial to understanding their roles in disease and cancer. The ISCs exist within crypts on the intestinal surface, these niches support the ISC in replenishing the epithelia. The interaction between active and quiescent ISCs likely involves other differentiated cells within the niche, as it has previously been demonstrated that the &#8216;&#8216;stemness&#8217;&#8217; of the Lgr5 ISC is closely tied to the presence of their neighboring Paneth cells. Using conditional cre-lox mouse models we tested the effect of deleting the majority of active ISCs in the presence or absence of the Paneth cells. Here we describe the techniques and analysis undertaken to characterize the intestine and demonstrate that the Paneth cells play a crucial role within the ISC niche in aiding recovery following substantial insult.

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Intestinal epithelial stem cells (ISCs) are intermingled with Paneth cells. These cells are differentiated progeny of the ISC, which support the ISCs and provide antibacterial protection. Here we demonstrate how we used transgenic conditional mouse models to establish that Paneth cells play a crucial role in maintaining the intestinal epithelia.

조건을 사용하여 쥐 소장에서 재생성 Paneth 세포의 역할을 분석하기위한 프로토콜<em&gt; Cre 호텔-LOX</em&gt; 마우스 모델

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a ...

연구

발생학

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

의학

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

The advent of 3D in vitro organoids that mimic the in vivo tissue architecture and morphogenesis has greatly advanced the ability to study key biological questions in cell and developmental biology. In addition, organoids together with recent technical advances in gene editing and viral gene delivery promises to advance medical research and development of new drugs for treatment of diseases. Organoids grown in vitro in basement matrix provide powerful model systems for studying the behavior and function of various proteins and are well suited for live-imaging of fluorescent-tagged proteins. However, establishing the expression and localization of the endogenous proteins in ex vivo tissue and in in vitro organoids is important to verify the behavior of the tagged proteins. To this end we have developed and modified tissue isolation, fixation, and immuno-labeling protocols for localization of microtubules, centrosomal, and associated proteins in ex vivo intestinal tissue and in in vitro intestinal organoids. The aim was for the fixative to preserve the 3D architecture of the organoids/tissue while also preserving antibody antigenicity and enabling good penetration and clearance of fixative and antibodies. Exposure to cold depolymerizes all but stable microtubules and this was a key factor when modifying the various protocols. We found that increasing the ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) concentration from 3 mM to 30 mM gave efficient detachment of villi and crypts in the small intestine while 3 mM EDTA was sufficient for colonic crypts. The developed formaldehyde/methanol fixation protocol gave very good structural preservation while also preserving antigenicity for effective labeling of microtubules, actin, and the end-binding (EB) proteins. It also worked for the centrosomal protein ninein although the methanol protocol worked more consistently. We further established that fixation and immuno-labeling of microtubules and associated proteins could be achieved with organoids isolated from or remaining within the basement matrix.

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

We present protocols for isolation of intestinal 3D structures from in vivo tissue and in vitro basement matrix embedded organoids, and detail different fixation and staining protocols optimized for immuno-labeling of microtubule, centrosomal, and junctional proteins as well as cell markers including the stem cell protein Lgr5.

Microtubules 및 전 비보 장 조직 및 장 Organoids 3 차원 생체 외에서 Centrosomal 단백질의 면역 형광 라벨

The advent of 3D in vitro organoids that mimic the in vivo tissue architecture and morphogenesis has greatly advanced the ability to study key biological ...

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

그만큼<em&gt; 전의 VIVO</em마우스 소장 Organoids의&gt; 문화 및 패턴 인식 수용체 자극

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

면역학 및 감염병학

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal (ICC) Network in Mice

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves required for peristalsis and mediate neuronal input from the enteric nervous system1. Different subtypes of ICC form distinct networks in the muscularis of the GI tract 2,3. Loss or injury to these networks is associated with a number of motility disorders4. ICC cells express the KIT receptor tyrosine kinase on the plasma membrane and KIT immunostaining has been used for the past 15 years to label the ICC network5,6. Importantly, normal KIT activity is required for ICC development5,6. Neoplastic transformation of ICC cells results in gastrointestinal stromal tumor (GIST), that frequently harbor gain-of-function KIT mutations7,8. We recently showed that ETV1 is a lineage-specific survival factor expressed in the ICC/GIST lineage and is a master transcriptional regulator required for both normal ICC network formation and for of GIST tumorigenesis9. We further demonstrate that it cooperates with activating KIT mutations in tumorigenesis. Here, we describe methods for visualization of ICC networks in mice, largely based on previously published protocols10,11. More recently, the chloride channel anoctamin 1 (ANO1) has also been characterized as a specific membrane marker of ICC11,12. Because of their plasma membrane localization, immunofluorescence of both proteins can be used to visualize the ICC networks. Here, we describe visualization of the ICC networks by fixed-frozen cyrosections and whole mount preparations.

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal ICC Network in Mice

The interstitial cells of Cajal (ICC) are the pacemaker cells of the gastrointestinal (GI) tract. They form complex networks between smooth muscle cells and post-ganglionic neuronal fibers to regulate GI contractility. Here, we present immunofluorescence methods cross-sectional and whole-mount visualization of murine ICC networks.

마우스의 Cajal (ICC) 네트워크의 중간 세포의 시각화

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves ...

생물학

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over developmental stages. Three-dimensional information from thin serial sections can be challenging to interpret because of the difficulty of reconstructing serial sections perfectly and maintaining proper orientation of the tissue over serial sections. Recent findings by Grosse et al., 2011 highlight the importance of three- dimensional information in understanding morphogenesis of the developing villi of the intestine1. Three-dimensional reconstruction of singly labeled intestinal cells demonstrated that the majority of the intestinal epithelial cells contact both the apical and basal surfaces. Furthermore, three-dimensional reconstruction of the actin cytoskeleton at the apical surface of the epithelium demonstrated that the intestinal lumen is continuous and that secondary lumens are an artifact of sectioning. Those two points, along with the demonstration of interkinetic nuclear migration in the intestinal epithelium, defined the developing intestinal epithelium as a pseudostratified epithelium and not stratified as previously thought1. The ability to observe the epithelium three-dimensionally was seminal to demonstrating this point and redefining epithelial morphogenesis in the fetal intestine. With the evolution of multi-photon imaging technology and three-dimensional reconstruction software, the ability to visualize intact, developing organs is rapidly improving. Two-photon excitation allows less damaging penetration deeper into tissues with high resolution. Two-photon imaging and 3D reconstruction of the whole fetal mouse intestines in Walton et al., 2012 helped to define the pattern of villus outgrowth2. Here we describe a whole organ culture system that allows ex vivo development of villi and extensions of that culture system to allow the intestines to be three-dimensionally imaged during their development.

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Improved imaging technology is allowing three-dimensional imaging of organs during development. Here we describe a whole organ culture system that allows live imaging of the developing villi in the fetal mouse intestine.

에 대한 마우스 태아의 전체 소장 문화 시스템<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 신호 전달 경로와 융모 개발의 3 차원 라이브 영상의 조작

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

<meta charset="utf8"></head><body>장 조작을 통한 수술 후 장폐색(Postoperative Ileus)을 연구하기 위한 쥐 모델(Murine Model for Study Postative Ileus through Intestinal Manipulation)

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>수술 후 장폐색 쥐 모델

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

수술 후 장폐색 쥐 모델

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current literature describes several different methodological approaches to obtain images of intestinal tissues for data validation. In this paper, we delineate a common protocol relating to the derivation and processing of mouse intestinal tissues. Proper fixation of intestinal tissues and Swiss-roll techniques that enhance intestinal epithelial morphology are discussed. Postresection processing and reorientation of embedded intestinal tissues are critical in obtaining paraffin-embedded blocks that display intact intestinal structural features after sectioning. The Swiss-rolling technique helps in histological assessment of the complete intestinal or colonic sections examined. An ability to differentiate intestinal structural features can be vital in quantitative measurements of intestinal inflammation and tumorigenesis along the entire length. Finally, paraffin-embedded sections are ideal for robust processing using both immunohistochemical and immunofluorescent detection methods. Nonfluorescent immunohistochemical sections provide a vibrant image of the tissue detailing different cellular structural features but do not provide flexibility for intracellular co-localization experiments. Multiple fluorescent channels can be appropriately utilized with immunofluorescent detection for co-localization experiments, lending support to mechanistic studies.

Accurate identification and location of epithelial cells along the intestinal mucosal lining are essential to define different cell lineages. Proper imaging of intestinal tissues is crucial for identification of protein expression patterns with maximum resolution. This study aims to delineate the optimal methods and conditions for processing mouse intestinal tissues.

면역 조직 화학적 및 면역 형광 분석을위한 창자 조직 준비를위한 향상된 스위스 압연 기술

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수술 후 장폐색 쥐 모델

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