ベロニカの Schreiter は、彼女の優秀なテクニカル サポートと確立された凍結保存技術と細胞培養モデルの有用な変更を感謝いたします。さらに、我々 はその後の分析で、優れたテクニカル サポート マレン アンダースと Swanhild よればを感謝したいと思います。

注: ウシ卵巣は商業の屠殺場から得られました。屠畜副産物のコレクションでは、ドイツの法律によると倫理的な承認は必要ありません。
1. 労働条件と準備
<ol><li>無菌性を保証するには、すべてのメディアを実行し、層流ベンチを使用して専門にされた細胞文化ラボですべての文化と同様に、ティッシュの準備作業します。</li>
	<li>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS、pH 7.4) 100 IU ペニシリン、ストレプトマイシン 0.1 mg/mL と卵巣の輸送のための 0.5 μ g/μ L アムホテリシン補足 × 1 を準備します。 注: 卵巣の受信と GC を分離する最大期間はこのセットアップで 2 h です。</li>
</ol>2. ウシ顆粒膜細胞の分離
<ol><li>
血を表面から分離手順を開始する前に削除する (100 IU ペニシリン、0.1 mg/mL ストレプトマイシン 0.5 μ g/μ L アムホテリシンと) 1 × PBS で数回卵巣を洗います。ビーカーを使用、卵巣内に配置、1 × PBS でそれを埋める、PBS をもう一度破棄します。
	<ol>
<li>3-4 x まで卵巣の任意の残りの血液を清掃はこの洗浄工程を繰り返します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>可能な汚染を最小限に抑えるために 70% アルコールを浸したラボ ワイプを使用して 1 つの卵巣を拭いてください。</li>
	<li>3 mL 注射器、18 G 針で穿刺卵胞の中規模によって GC を吸引 (< 6 mm の定規で測定)、し、プールを 1 つ 50 mL 遠心管中の卵胞液。 注記: 注射器を湿らせて、(100 IU ペニシリン、0.1 mg/mL ストレプトマイシン 0.5 μ g/μ L アムホテリシンと) 1 × PBS の少し時間がかかります。これは卵胞液の少量を収集するのに役立ち、シリンジ内付着細胞を防ぎます。</li>
	<li>いくつかの卵胞を穿刺後注射器と中間洗浄の 1x PBS で針をすすいでください。</li>
</ol>3. 細胞の凍結保存
<ol><li>
トリパン ブルー染色を使用し、診断の下のセルをカウントします。
	<ol>
<li>実行可能なセルの数をカウントするには、0.25% トリパン ブルー溶液の 1.5 μ L でチューブを準備します。 注: 生きているセルは、トリパン ブルーは青で表示されますし、死んだ細胞の細胞壁をしかアクセスできないために無染色保持されます。</li>
		<li>トリパン ブルー溶液に顆粒膜細胞懸濁液の 15 μ L を追加し、優しく混ぜます。</li>
		<li>診断の両院で混合物を配置します。生活の数を数える商工会議所あたり 1 つの大きな正方形のセル (例えば、無染色)。 注: いくつかの血液の細胞を見ることができるものの、サイズが非常に小さいことに区別できます。</li>
		<li>一般のガイドラインに従って両方の商工会議所の正方形の平均値を持つ生細胞数を計算します。生きている細胞の割合は卵巣によって異なりますが、6013を超えない。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
さらに分析の参考として新鮮単離顆粒膜細胞のプールからのサンプルを取る。
	<ol>
<li>分離の GC の細胞数、に応じて脇細胞数の適切な標準試料として RNA、DNA、蛋白質の準備を。 注: RNA の隔離および遺伝子発現の後の評価は、1 x 10 の5セル、十分ですが、他のそれに続く分析は、異なる、一般的に高いセル番号を必要があります。</li>
		<li>新鮮なチューブで参照セルの 1 つまたは複数の因数を置き、常温、細胞ペレットを取得する最大速度 (12,000 × g) 1 分間遠心します。上清を捨てます。</li>
		<li>すぐにショックで凍結、液体窒素で。-80 ° C のサンプルを格納します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
凍結をとおり実行します。
	<ol>
<li>80% 牛胎児血清 (FCS) と 20% ジメチルスルホキシド (DMSO) を使用して凍結媒体を準備します。</li>
		<li>GC をペレット優しく、するために遠心分離機の室温および 500 x gで 3 分の GC。</li>
		<li>慎重に上澄みを除去し、細胞を再懸濁します優しくないより多くの細胞まで (例えば、1 mL) 100% の FCS で塊が表示されます。</li>
		<li>細胞懸濁液を準備凍結媒体の 1 ボリューム (例えば、1 mL) を追加し、極低温バイアルに混合物を転送します。 注: 低温保護メディアの最終濃度は 90% の FCS と 10 %dmso になります。</li>
		<li>急速凍結を防ぐ特殊な (市販) 冷凍コンテナーに、セラムを配置します。サンプルの冷却速度-1 ° C/分、少なくとも 4 時間-80 ° C のフリーザーに転送凍結コンテナーを超えてはいけません。</li>
		<li>長期保管のためには、超低温容器 (例えば、液体窒素容器) にセラム チューブを配置します。 注: プロトコルを停止できますここでは、凍結により長期保存として。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. メディアおよび培養皿の細胞培養のための準備
<ol><li>
0.02% コラーゲン R. コート細胞培養皿 注: コラーゲン R 文化で GC の改良された添付ファイルのために不可欠であると知られています。<ol>
<li>精製水の細胞培養に適した 0.02% コラーゲン R 溶液を準備します。</li>
		<li>24 ウェル プレートで 150 μ L/ウェルを追加 (= 2 cm2/よく) 文化の全体の表面はよくコラーゲン R ソリューションでカバーはしています。</li>
		<li>解決策は蓋が数時間開いたまま乾燥または層流フードの一晩をみましょう。</li>
		<li>培養皿が完全に乾燥できたらは、汚染を最小限に抑えるために 10-15 分のために紫外線を照射します。</li>
		<li>必要に応じて、最大 2 ヶ月の 4 ° C でプレートを格納します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>メディアと文化層流フードの下での作業のためのサプリメントを準備します。GC の正常な回復のためには、解凍後すぐに処理する必要が彼ら。</li>
	<li>
次のメディアを準備します。
	<ol>
<li>2 ミリメートル L グルタミン、0.084% 炭酸水素ナトリウム、0.1% ウシ血清アルブミン (BSA)、20 mM HEPES、4 ng/mL のナトリウム亜セレン酸、5 μ G/ml トランスフェリン、10 ng/mL インスリンと 1 mM 非必須アミノ酸と α 最小必須培地 (α-MEM) を補足します。</li>
		<li>また、メディアに 100 IU のペニシリンと 0.1 mg/mL のストレプトマイシンを追加します。 注: 一度暖め、抗生物質は、約 48 時間の安定しています。したがって、分注文化の組み立てのためのメディアと計画の希望の金額を交換します。37 の ° C の水浴中にメディアの因数だけは事前に暖かい。準備されたメディアは、もはや 3 ヶ月以上のための 4 ° C で保存できます。</li>
		<li>培養ウシ GC でステロイドの活動を誘発するには、20 ng/mL 卵胞刺激ホルモン (FSH) とあわせて α MEM、50 ng/mL R3 IGF-1 および 2 μ M アンドロステンジオンを補います。 注: は、常に文化やメディア交換の発症直前にこれらのコンポーネントを補います。ステロイドの活動を危険にさらす可能性がありますこの FSH と IGF-1 の貯蔵液の凍結融解繰り返しを避けてください。</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 細胞培養ワーク
<ol><li>3-4 分の 37 ° C で水バースの迅速に細胞を融解し、37 ° C に予め温めておいた α MEM (ホルモンを補う) なしに細胞懸濁液を転送します。遠心分離、10 mL の最終巻をお勧めします。</li>
	<li>500 × g室温で 3 分の GC を遠心します。上清を捨てます。予め温めておいたと補われた α MEM を追加し、セルを慎重に再懸濁します。</li>
	<li>500 μ L の最終巻で 1 x 10 の5または 1 × 106細胞/ウェルの密度でシード GC には、1 つの条件の少なくとも 3 つの文化井戸の技術的な複製が含まれます。</li>
	<li>8 d のため 5% CO2と 37 ° C でインキュベーターで培養を孵化させなさい。</li>
	<li>メディア交換他の毎日を実行します。ストレスを軽減して細胞の新鮮なメディアへの適応を容易にするための培地の 3 分の 2 のみを交換してください。 注: GC 文化で数日後典型的な線維芽細胞のような表現型を形成し、一緒にクラスター化する傾向があります。高密度培養大規模なクラスターが通常密度 GC 文化 (図 1、左対右パネル) と比較してよりよく見つかります。</li>
</ol>6 培養顆粒膜細胞の後続の分析
<ol><li>ステロイド ホルモンの分析を実行するには、メディアを収集し、-20 ° C の凍結適切な方法を使用すると、使用済みメディア [例えばラジオイムノアッセイ (RIA)]14のエストラジ オールとプロゲステロンの濃度を分析します。</li>
	<li>別のターゲット分子 (RNA、DNA、蛋白質、等) の後続の分析、サプライヤーによって推薦されるよう lysing エージェントが適切な培養皿に直接細胞を溶解します。 注: ほとんどの分離のプロシージャの不可能だここでは、プロトコルを停止する分離細胞を 1 週間の-20 ° C で保存できるよう長期保管のため、細胞保管-80 ° C</li>
	<li>トラン スクリプトの豊かさを決定するには、cDNA を合成し、量的なリアルタイムのポリメラーゼの連鎖反応 (qPCR) テクニック15特定の転写産物を測定します。統計的評価は異なる細胞培養、由来の異なる細胞製剤 (生物的複製) の少なくとも 3 つの複製を含める必要があります。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Gutierrez, C. G., Ralph, J. H., Telfer, E. E., Wilmut, I., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+antrum+formation+of+bovine+preantral+follicles+in+long-term+culture+in+vitro.">Growth and antrum formation of bovine preantral follicles in long-term culture in vitro.</a> Biology of Reproduction. 62 (5), 1322-1328 (2000).</li><li>Cortvrindt, R., Hu, Y., Smitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+luteinizing+hormone+as+a+survival+and+differentiation+factor+increases+oocyte+maturation+in+recombinant+follicle+stimulating+hormone-supplemented+mouse+preantral+follicle+culture.">Recombinant luteinizing hormone as a survival and differentiation factor increases oocyte maturation in recombinant follicle stimulating hormone-supplemented mouse preantral follicle culture.</a> Human Reproduction. 13 (5), 1292-1302 (1998).</li><li>Paes, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+heat+stress+on+the+survival+and+development+of+in+vitro+cultured+bovine+preantral+follicles+and+on+in+vitro+maturation+of+cumulus-oocyte+complex.">Effect of heat stress on the survival and development of in vitro cultured bovine preantral follicles and on in vitro maturation of cumulus-oocyte complex.</a> Theriogenology. 86 (4), 994-1003 (2016).</li><li>Christenson, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resource:+preovulatory+LH+surge+effects+on+follicular+theca+and+granulosa+transcriptomes.">Research resource: preovulatory LH surge effects on follicular theca and granulosa transcriptomes.</a> Molecular Endocrinology. 27 (7), 1153-1171 (2013).</li><li>Havelock, J. C., Rainey, W. E., Carr, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+granulosa+cell+lines.">Ovarian granulosa cell lines.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 228 (1-2), 67-78 (2004).</li><li>Bernath, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+inhibits+fibronectin+gene+expression+in+a+newly+developed+granulosa+cell+line+by+a+mechanism+that+suppresses+cAMP-responsive+element-dependent+transcriptional+activation.">Cyclic AMP inhibits fibronectin gene expression in a newly developed granulosa cell line by a mechanism that suppresses cAMP-responsive element-dependent transcriptional activation.</a> The Journal of Biological Chemistry. 265 (30), 18219-18226 (1990).</li><li>Lerner, A. A., Salamone, D. F., Chiappe, M. E., Baranao, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+studies+between+freshly+isolated+and+spontaneously+immortalized+bovine+granulosa+cells:+protein+secretion,+steroid+metabolism,+and+responsiveness+to+growth+factors.">Comparative studies between freshly isolated and spontaneously immortalized bovine granulosa cells: protein secretion, steroid metabolism, and responsiveness to growth factors.</a> Journal of Cellular Physiology. 164 (2), 395-403 (1995).</li><li>Gutierrez, C. G., Campbell, B. K., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+long-term+bovine+granulosa+cell+culture+system:+induction+and+maintenance+of+estradiol+production,+response+to+follicle-+stimulating+hormone,+and+morphological+characteristics.">Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: induction and maintenance of estradiol production, response to follicle- stimulating hormone, and morphological characteristics.</a> Biology of Reproduction. 56 (3), 608-616 (1997).</li><li>Campbell, B. K., Scaramuzzi, R. J., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+maintenance+of+oestradiol+and+immunoreactive+inhibin+production+with+FSH+by+ovine+granulosa+cells+cultured+in+serum-free+media.">Induction and maintenance of oestradiol and immunoreactive inhibin production with FSH by ovine granulosa cells cultured in serum-free media.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 106 (1), 7-16 (1996).</li><li>Hillier, S. G., Whitelaw, P. F., Smyth, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+Oestrogen+Synthesis+-+The+Two-Cell,+Two-+Gonadotrophin+Model+Revisited.">Follicular Oestrogen Synthesis - The Two-Cell, Two- Gonadotrophin Model Revisited.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 100, 51-54 (1994).</li><li>Silva, J. M., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+follicle-stimulating+hormone+on+steroid+secretion+and+messenger+ribonucleic+acids+encoding+cytochromes+P450+aromatase+and+cholesterol+side-chain+cleavage+in+bovine+granulosa+cells+in+vitro.">Effect of follicle-stimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol side-chain cleavage in bovine granulosa cells in vitro.</a> Biology of Reproduction. 62 (1), 186-191 (2000).</li><li>Portela, V. M., Zamberlam, G., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+plating+density+alters+the+ratio+of+estrogenic+to+progestagenic+enzyme+gene+expression+in+cultured+granulosa+cells.">Cell plating density alters the ratio of estrogenic to progestagenic enzyme gene expression in cultured granulosa cells.</a> Fertility and Sterility. 93 (6), 2050-2055 (2010).</li><li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+cell+plating+density+mimics+an+early+post-LH+stage+in+cultured+bovine+granulosa+cells.">Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells.</a> Cell and Tissue Research. 354, 869-880 (2013).</li><li>Schneider, F., Br&#252;ssow, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+preovulatory+administered+depot+gonadotrophin-releasing+hormone+agonist+on+reproductive+hormone+levels+and+pregnancy+outcome+in+gilts.">Effects of a preovulatory administered depot gonadotrophin-releasing hormone agonist on reproductive hormone levels and pregnancy outcome in gilts.</a> Reproduction, Fertility and Development. 18 (8), 857-866 (2006).</li><li>Baufeld, A., Koczan, D., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+altered+gene+expression+profiles+in+cultured+bovine+granulosa+cells+at+high+cell+density.">Induction of altered gene expression profiles in cultured bovine granulosa cells at high cell density.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 15 (1), (2017).</li><li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactate+promotes+specific+differentiation+in+bovine+granulosa+cells+depending+on+lactate+uptake+thus+mimicking+an+early+post-LH+stage.">Lactate promotes specific differentiation in bovine granulosa cells depending on lactate uptake thus mimicking an early post-LH stage.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 16 (1), 15 (2018).</li><li>Yenuganti, V. R., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+bovine+granulosa+cells+rapidly+lose+important+features+of+their+identity+and+functionality+but+partially+recover+under+long-term+culture+conditions.">Cultured bovine granulosa cells rapidly lose important features of their identity and functionality but partially recover under long-term culture conditions.</a> Cell and Tissue Research. 368 (2), 397-403 (2017).</li><li>Hamel, M., Vanselow, J., Nicola, E. S., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androstenedione+Increases+Cytochrome+P450+Aromatase+Messenger+Ribonucleic+Acid+Transcripts+in+Non-Luteinizing+Bovine+Granulosa+Cells.">Androstenedione Increases Cytochrome P450 Aromatase Messenger Ribonucleic Acid Transcripts in Non-Luteinizing Bovine Granulosa Cells.</a> Molecular Reproduction and Development. 70, 175-183 (2005).</li><li>Gilbert, I., Robert, C., Dieleman, S., Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+effect+of+the+LH+surge+in+bovine+granulosa+cells+during+the+peri-ovulation+period.">Transcriptional effect of the LH surge in bovine granulosa cells during the peri-ovulation period.</a> Reproduction. 141 (2), 193-205 (2011).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

提示された細胞培養モデルは、顆粒膜細胞分化体外を分析するためのツールを提供します。いくつかの研究は、無血清培養ある培養ウシ GC または他種8,9GC でステロイドの活動を維持するための前提条件であることを示した。さらに、細胞外基質 (例えばコラーゲン R)13のコンポーネントと培養皿をコーティング、細胞の付着が大幅に改善。もう一つの重要な特徴は、長期培養期間です。最近では、長期培養は充分なステロイド ホルモン産生活性と顆粒膜細胞アイデンティティ マーカー17のバランス式を取得する必要があるれています。それは GC が分離のプロシージャの間に物理的なストレスから回復する時間を必要と表示されます。
FSH、IGF-1、アンドロステンジオンはアロマターゼ活性を誘導するために知られているメディアのサプリメントは、GC を培養しました。特に、アンドロステンジオンと補給が絶対に必要、GC として必要があります前駆体エストラジ オール合成。これはずっと以前11,18を公開し、したがって、さらに検討されなかった本研究中。ただし、FSH、IGF-1、アンドロステンジオン濃度の適応その他の実験のセットアップの必要があります。
ここで説明した凍結技術は複数の卵巣が付いているさまざまな供給から独立したことで組織培養実験の組織を改善するために助けることができます。以前テストによると凍結は GC 表現型またはステロイド生産文化を影響しません。また、培養細胞のマーカーの転写物の豊かさは、以前凍結16を受けると新鮮単離細胞から調製したサンプルを比較差を明らかにしなかった。
現在の GC 文化モデルの重要なパラメーターは、密度をめっきセルです。代表結果で示すように、生理学的・分子的特性の顕著な変化を誘発メッキ密度を増加させます。いくつかの遺伝子は、4,19 vivo にLH の刺激によって誘導される変化と類似した特定の方法で調整されます。セル密度の上昇が培養ウシ GC で差別化のようなプロセスを運転できるという事実は複製間の矛盾した結果を避けるために細心の注意この GCの in vitroモデルで考慮します。したがって、他の研究と矛盾する結果は異なるセル密度に起因するかもしれないより綿密に検証する必要があります。
文化モデル記述されているここで LH に対応することを明らかにした受容体LHCGRの成績としては検出限界の近くにあります。したがって、同様の LH サージのシミュレーション体内状況は13分化を誘導するために失敗しました。それにもかかわらず、このモデルは、初代培養におけるエストラジ オール アクティブ GC の研究に有用なツールを提供します、特にとして機能的なウシ GC ラインが現時点では存在します。
ステロイド生産または GC の分化の調節機構を解明するのに役立ちます現在の GC 文化モデルでは、異なる治療プロトコルをテストできます。発達過程に関与しているさらに、単一の要因は個別に分析できます。したがって、この文化モデルは、多くの異なるアプリケーションのための基礎を提供します。

成功した排卵と黄体は、細かく調整・うまく仕組まれた分子変異が別体濾胞細胞の種類によって異なります。これらの発達のプロセスの詳細はまだ完全に理解されない、さらに明確化が必要です。生体内でのアプローチは手の込んだ、高価な、特に、アドレス特定の分子機構卵胞発育中に発生する失敗します。したがって、ベイストの in vitroモデルはさらに、細胞と分子の詳細洞察力を提供するために必要です。さまざまな研究では、体外受精技術1,2,3のコンテキスト内の全体の卵胞の文化について説明します。研究者は分化のメカニズムに興味があるので、多くの研究卵胞 GC に焦点を当てます。卵子に直接関連付けられているこれらの細胞はエストロゲン産生の主要な源であるし、したがって、卵胞発育と黄体化4全体で重要な役割を果たします。
GC の行は、異なる種から開発されている細胞を不死化。しかし、それらのほとんどは十分なステロイド ホルモン生産5を表示されません。これまでのところ、GC がされているウシの 1 つだけセルライン確立6が、この行はいくつかの通路7後ステロイド産生活性を失った。したがって、以来ステロイド生合成機能や、特定のエストラジ オール産生が GC 機能の基本的な特徴、一次電池文化モデルのこれらの面を研究することをお勧めします。以前の研究でかなりのエストラジ オール産生できますのみ無血清培養条件8,9の下で観察されることを示した。さらに、エストラジ オールの合成の前駆体の補充は、別の前提条件 GC 失敗アンドロステンジオン10にプロゲステロンを変換することができます必要な酵素を表現します。また、FSH と IGF-1 補充の in vitroの相乗効果は、エストラジ オール合成11の鍵酵素アロマターゼの最適化活動を明らかにしました。この議定書で GC 文化モデルの相当な影響がある他の重要な要因についても述べる。特に、密度をめっきセルには、実験12の結果に途方もない効果があります。さらに、文化の GC の生理学と大幅に干渉しない牛の GC の凍結保存技術が確立でした。細胞文化仕事の組織を改善するために、最寄りのメッキ密度を最適化するために、このテクニックが役立ちます。

<table><tbody><tr><td>PBS Instamed w/o Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;, Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;</td><td>Merck-Millipore</td><td>L 182-05</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>penicillin / streptomycin (10,000 IU / 10,000 &amp;micro;g/mL)</td><td>Merck-Millipore</td><td>A 2213</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>amphotericin (250 &amp;micro;g/mL)</td><td>Merck-Millipore</td><td>A 2612</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>3 mL syringe (Omnifix Luer)</td><td>Braun</td><td>4616025V</td><td></td></tr><tr><td>18 G needle</td><td>Roth</td><td>C724.1</td><td></td></tr><tr><td>fetal calf serum</td><td>Merck-Millipore</td><td>S 0115</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>cryo-preservation vials (2 mL)</td><td>TPP Faust</td><td>TPP 89020</td><td></td></tr><tr><td>CoolCell LX cell freezing container</td><td>Corning</td><td>432004</td><td></td></tr><tr><td>culture dish, 24-well, flat bottom</td><td>TPP Faust</td><td>TPP 92424</td><td></td></tr><tr><td>collagen R (0.2 %)</td><td>Serva</td><td>47254</td><td></td></tr><tr><td>&amp;alpha;-MEM</td><td>Merck-Millipore</td><td>F 0915</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Merck-Millipore</td><td>K 0282</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>sodium bicarbonate</td><td>Merck-Millipore</td><td>L 1713</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Merck-Millipore</td><td>L 1603</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>sodium selenite</td><td>Sigma</td><td>S9133</td><td>dissolved in sterile water</td></tr><tr><td>transferrin</td><td>Sigma</td><td>T1283</td><td>dissolved in sterile water</td></tr><tr><td>insulin (10 mg/mL)</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td>dissolved in 1x PBS</td></tr><tr><td>NEA</td><td>Merck-Millipore</td><td>K 0293</td><td>originally purchased at Biochrom AG that is now part of the Merck-Millipore Company; the Cat.-No of Biochrom still exists</td></tr><tr><td>FSH</td><td>Sigma</td><td>F4021</td><td>we prefer to use a stock solution of 2 &amp;micro;g/mL, diluted in 0.9 % NaCl</td></tr><tr><td>LR3-IGF-1</td><td>Sigma</td><td>I1146</td><td>we use a stock solution of 2 &amp;micro;g/mL, dissolved in 10 mM HCl and 1x PBS with 1 mg/mL BSA</td></tr><tr><td>androstenedione</td><td>Sigma</td><td>46033</td><td>we use a stock solution of 10 mM, diluted in 100 % ethanol</td></tr></tbody></table>

a tissue culture model of estrogen-producing primary bovine granulosa cells

卵巣顆粒膜細胞 (GC) は、エストラジ オールの合成の主要なソースです。排卵黄体形成ホルモン (LH) のサージによって誘導される細胞、莢の特に、顆粒膜細胞層の深く、形態学的、生理学的、および分子の特性を変更し、プロゲステロン生産コーパスを形成黄体は妊娠を維持するために責任があります。細胞モデルは、濾胞黄体の変換に関与する基になる機構を研究する重要なツールです。提案するプロトコルは中規模包 (< 6 mm) から牛の GC の凍結と分離のプロシージャに焦点を当てください。この手法では、GC のほぼ純粋な人口を取得できます。凍結保存プロシージャ大幅に細胞培養の管理は直接プライマリ組織 (卵巣) 供給の独立して動作時間を容易します。このプロトコルでは、ウシの GC のエストラジ オール アクティブ状態を模した無血清細胞培養モデルについて説明します。成功したステロイド アクティブ培養に欠かせない重要な条件は、プロトコルを通して説明します。変更された遺伝子の発現プロファイルとホルモン生産によって示されているように、セルのメッキ密度の増加に特定の応答を誘導することを示した。さらに、このモデルは、GC の分化に関するさらなる研究のための基礎および他のアプリケーションに提供します。

GC 1 x 10 の5細胞/ウェルの表示で典型的な線維芽細胞のような外観としてメッキ彼らを形成する線維芽細胞に匹敵するセルの拡張 (図 1 a 1 c) クラスターを構築する傾向があります。によるメッキ密度を 10 倍増やす 1 x 106細胞/ウェルの形態を変更していないが (図 1 bと1 d矢印) より多くの細胞塊を観察できます。既に、前の文書で示されてとして培養皿のコラーゲン コーティングは主細胞13の添付ファイルを改善しました。
初期凍結新鮮単離試料から直接培養に比べて培養細胞の生理的特性をかなり変えなかった。これは、冷凍や新鮮単離のプールに由来する培養細胞を比較するとき、遺伝子は認められなかったいくつかのマーカーの (qPCR 測定) トラン スクリプトの豊かさとして図 2に示すです。
図 3は、通常対高密度培養ウシ GC でステロイド ホルモンの分析 (RIA で測定) の代表の結果を示します。一方、プロゲステロンの生産は高い傾向が標準密度培養と比較して高密度培養でエストラジ オールの濃度が大幅に低下します。
高速対標準密度の文化 (qPCR によって測定される) 複数の遺伝子の比較解析では、大きな影響を与える (図 4) を明らかにしました。CYP19A1は、 FSHR、性腺刺激ホルモン受容体と同様に、エストラジ オール生合成アロマターゼの重要酵素がダウン規制大幅。対照的に、 RGS2とVNN2遺伝子は重要なアップレギュレーションを示した。これらの結果は明らかに細胞分化の特定のプロセスが密度をめっきセルを増やすことによって誘導されることをお勧めします。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58208/58208fig1.jpg"> 図 1: 通常 (左のパネル)、高細胞密度 (右側のパネル) で牛の顆粒膜細胞を培養します。1 x 10 の5細胞/ウェルの密度で培養(とc)のセルには、線維芽細胞のような典型的な表現型が表示されます。(b 、 d)GC は、通常の密度 (左側のパネル) の下のセルと比較すると多く大細胞クラスター (矢印) を形成する傾向が高いめっき密度 (1 x 106細胞/ウェル) で培養します。スケール バー = 100 μ m.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58208/58208fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58208/58208fig2.jpg"> 図 2: 直接分離と凍結保存後の培養細胞の比較。セルは、ウェルあたり 1 x 10 の5セルの密度で培養しました。いくつかのマーカーの転写産物の発現を評価した培養細胞初期凍結の有無の違いは認められなかった.箱型図に示しますnの中央値 = 3。2-スチューデントの両側t-テスト、 p-値に含まれます。この図は16Baufeld と vanselow-投稿日時再現します。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58208/58208fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58208/58208fig3.jpg"> 図 3: 異なるめっき密度で培養顆粒膜細胞のステロイド ホルモン濃度。エストラジ オール (E2) 濃度は有意に低下した GC が高い細胞密度で培養したときプロゲステロン (P4) 濃度のみ高くなる傾向にあったに対し。ホルモン濃度は異なるセルの番号を正規化する DNA の内容に修正しました。平均値とnの SEM = 3 が表示されます。p > 0.05, 2 スチューデントの両側t-テストします。この図は Baufeldらから再現します。15.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58208/58208fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58208/58208fig4.jpg"> 図 4: する通常対で培養顆粒膜細胞の機能キー転写物の豊富なめっき密度。8 d のための無血清条件下で培養したウシの GC では、いくつかの選択したマーカー遺伝子の特定の規制を明らかにしました。Nの中央値を表示、箱型図 3 各レプリケートします。p < 0.05, 2 スチューデントの両側t-テストします。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58208/58208fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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A Tissue Culture Model of Estrogen-producing Primary Bovine Granulosa Cells

無血清条件下でウシ顆粒膜細胞の長期培養モデルを説明します。このモデルにより、エストロゲン産生特性の異なるめっき密度として多様な因子と条件の効果を研究に研究をウシ顆粒膜細胞。

細胞のエストロゲン産生主ウシ顆粒の組織培養モデル

Ovarian granulosa cells (GC) are the major source of estradiol synthesis. Induced by the preovulatory luteinizing hormone (LH) surge, cells of the theca ...

a-tissue-culture-model-estrogen-producing-primary-bovine-granulosa

Research

JoVE Journal

Biology

9.1K ビュー.  Leibniz Institute for Farm Animal Biology (FBN). 無血清条件下でウシ顆粒膜細胞の長期培養モデルを説明します。このモデルにより、エストロゲン産生特性の異なるめっき密度として多様な因子と条件の効果を研究に研究をウシ顆粒膜細胞。

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Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

三次元異<em&gt; in vitroで</em卵巣がんの発生と進行中に間質相互作用の上皮&gt;モデリング

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

医学

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, regulation occurs at the hypothalamic-pituitary-gonadal axis level and on developing follicles in the ovary. Despite active studies, follicle development mechanisms are not clear because of the several steps involved from the dormant primordial follicle activation to ovulation, and because of the regulation complexity that differs at each follicular stage. To investigate the mechanisms of follicle development, and the dynamics of follicles throughout the estrus cycle, we developed a mouse ovarian tissue culture model that can be used to observe follicle development using a microscope. Systematic follicle development, periodical ovulation, and follicle atresia can all be reproduced in the cultured ovary model, and the culture conditions can be experimentally modulated. Here, we demonstrate the usefulness of this method in the study of the regulatory mechanisms of follicle development and other ovarian phenomena.

Ovarian tissue cultures can be used as models of follicle development, ovulation, and follicle atresia and indicate regulatory mechanisms of dynamic ovarian processes.

「マウス卵巣における現象を可視化する卵巣の組織培養

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

発生生物学

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods rely on the ability of cells either to attach to a solid substratum of a tissue culture dish or to grow in suspension in liquid medium. Multiple immortal cell lines have been created and grown using such approaches, however, these methods frequently fail when primary cells need to be grown ex vivo. Such failure has been attributed to the absence of the appropriate extracellular matrix components of the tissue microenvironment from the standard systems where tissue culture plastic is used as a surface for cell growth. Extracellular matrix is an integral component of the tissue microenvironment and its presence is crucial for the maintenance of physiological functions such as cell polarization, survival, and proliferation. Here we present a 3-dimensional tissue culture method where primary bone marrow cells are grown in extracellular matrix formulated to recapitulate the microenvironment of the human bone (rBM system). Embedded in the extracellular matrix, cells are supplied with nutrients through the medium supplemented with human plasma, thus providing a comprehensive system where cell survival and proliferation can be sustained for up to 30 days while maintaining the cellular composition of the primary tissue. Using the rBM system we have successfully grown primary bone marrow cells from normal donors and patients with amyloidosis, and various hematological malignancies. The rBM system allows for direct, in-matrix real time visualization of the cell behavior and evaluation of preclinical efficacy of novel therapeutics. Moreover, cells can be isolated from the rBM and subsequently used for in vivo transplantation, cell sorting, flow cytometry, and nucleic acid and protein analysis. Taken together, the rBM method provides a reliable system for the growth of primary bone marrow cells under physiological conditions.

In standard culture methods cells are taken out of their physiological environment and grown on the plastic surface of a dish. To study the behavior of primary human bone marrow cells we created a 3-D culture system where cells are grown under conditions recapitulating the native microenvironment of the tissue.

初代ヒト骨髄およびその悪性腫瘍を研究する三次元組織培養モデル

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is limited to cell proliferation and gene expression endpoints. However, in the organism, mammary morphogenesis occurs in a 3D environment. 3D culture systems help bridge the gap between monolayer cell culture (2D) and the complexity of the organism. Herein, we describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action. It uses the commercially available hormone-responsive human breast epithelial cell line, T47D, and rat tail collagen type 1 as a matrix. This 3D culture model responds to the main mammotropic hormones: estradiol, progestins and prolactin. The influence of these hormones on epithelial morphogenesis can be observed after 1- or 2-week treatment according to the endpoint. The 3D cultures can be harvested for analysis of epithelial morphogenesis, cell proliferation and gene expression.

We describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action.

ヒト乳腺上皮のホルモン応答性の3D培養モデル

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is ...

生物工学

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, which is regulated by a variety of soluble and physical signals in the microenvironment. Described here is a method created to study the process of branching morphogenesis by forming engineered three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined shape and size that are completely embedded within an extracellular matrix (ECM). This method enables the formation of arrays of identical tissues and enables the control of a variety of environmental factors, including tissue geometry, spacing, and ECM composition. This method can also be combined with widely used techniques such as traction force microscopy (TFM) to gain more information about the interactions between cells and their surrounding ECM. The protocol can be used to investigate a variety of cell and tissue processes beyond branching morphogenesis, including cancer invasion.

This manuscript describes a soft lithography-based technique to engineer uniform arrays of three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined geometry surrounded by extracellular matrix. This method is amenable to a wide variety of cell types and experimental contexts and allows for high-throughput screening of identical replicates.

細胞外マトリックス内に埋め込まれたエンジニアリング三次元上皮組織

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can also become diseased and cause morbidity and even death. Model systems to study human endometrial biology have been limited to in vitro culture systems of single cell types. In addition, the epithelial cells, one of the major cell types of the endometrium, do not propagate well or retain their physiological traits in culture, and thus our understanding of endometrial biology remains limited. We have generated, for the first time, endometrial organoids that consist of both epithelial and stromal cells of the human endometrium. These organoids do not require any exogenous scaffold materials and specifically organize so that epithelial cells encompass the spheroid-like structure and become polarized with stromal cells in the center that produce and secrete collagen. Estrogen, progesterone and androgen receptors are expressed in the epithelial and stromal cells and treatment with physiological levels of estrogen and testosterone promote the organization of the organoids. This new model system can be used to study normal endometrial biology and disease in ways that were not possible before.

A protocol to generate human primary endometrial organoids that consist of epithelial and stromal cells and retain characteristics of the native endometrial tissue is presented. This protocol describes methods from uterine tissue acquisition to the histologic processing of endometrial organoids.

多細胞ヒト初等子宮内膜オルガノイドの生成

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that during the reproductive life span only about 1% of the oocytes in an ovary mature and ovulate, several techniques have been developed to increase the exploitation of the ovarian reserve to the growing population of non-ovulatory follicles. Such technologies have allowed interventions of fertility preservation, selection programs in livestock, and conservation of endangered species. However, the vast potential of the ovarian reserve is still largely unexploited. In cows, for instance, some attempts have been made to support in vitro culture of oocytes at specific developmental stages, but efficient and reliable protocols have not yet been developed. Here we describe a culture system that reproduce the physiological conditions of the corresponding follicular stage, defined to develop in vitro growing oocytes collected from bovine early antral follicles to the fully-grown stage, corresponding to the medium antral follicle in vivo. A combination of hormones and a phosphodiesterase 3 inhibitor was used to prevent untimely meiotic resumption and to guide oocyte&#39;s differentiation.

We describe the procedures for isolation of growing oocytes from ovarian follicles at early stages of development, as well as the setup of an in vitro culture system which can support the growth and differentiation up to the fully-grown stage. &#160;

牛の初期のアンタル卵胞からの卵母細胞のための体外培養戦略

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

3Dウシ回腸エンテロイド培養からの2D単分子膜の確立

Generation of a Bovine Primary Enteroid-Derived Two-Dimensional Monolayer Culture System for Applications in Translational Biomedical Research

Organoid cell culture systems can recapitulate the complexity observed in tissues, making them useful in studying host-pathogen interactions, evaluating drug efficacy and toxicity, and tissue bioengineering. However, applying these models for the described reasons may be limited because of the three-dimensional (3D) nature of these models. For example, using 3D enteroid culture systems to study digestive diseases is challenging due to the inaccessibility of the intestinal lumen and its secreted substances. Indeed, stimulation of 3D organoids with pathogens requires either luminal microinjection, mechanical disruption of the 3D structure, or generation of apical-out enteroids. Moreover, these organoids cannot be co-cultured with immune and stromal cells, limiting in-depth mechanistic analysis into pathophysiological dynamics. To circumvent this, we optimized a bovine primary cell two-dimensional (2D) enteroid-derived monolayer culture system, allowing co-culture with other relevant cell types. Ileal crypts isolated from healthy adult cattle were cultured to generate 3D organoids that were cryopreserved for future use. A 2D monolayer was created using revived 3D enteroids that were passaged and disrupted to yield single cells, which were seeded on basement membrane extract-coated transwell cell culture inserts, thereby exposing their apical surface. The intestinal monolayer polarity, cellular differentiation, and barrier function were characterized using immunofluorescence microscopy and measuring transepithelial electrical resistance. Stimulation of the apical surface of the monolayer revealed the expected functionality of the monolayer, as demonstrated by cytokine secretion from both apical and basal compartments. The described 2D enteroid-derived monolayer model holds great promise in investigating host-pathogen interactions and intestinal physiology, drug development, and regenerative medicine.

著者スポットライト:宿主と病原体の相互作用を研究するための高度なエンテロイドモデル 

Enteroids are emerging as a novel model for studying tissue physiology and pathophysiology, drug development, and regenerative medicine. Here, we describe a bovine primary cell 2D enteroid-derived culture system that permits co-culture with relevant tissue cell types. This model offers a translational advantage for gastrointestinal research modeling.

トランスレーショナルバイオメディカル研究への応用を目指したウシ一次エンテロイド由来2次元単層培養系の作製

Organoid cell culture systems can recapitulate the complexity observed in tissues, making them useful in studying host-pathogen interactions, evaluating ...

細胞のエストロゲン産生主ウシ顆粒の組織培養モデル

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「マウス卵巣における現象を可視化する卵巣の組織培養

初代ヒト骨髄およびその悪性腫瘍を研究する三次元組織培養モデル

ヒト乳腺上皮のホルモン応答性の3D培養モデル

細胞外マトリックス内に埋め込まれたエンジニアリング三次元上皮組織

多細胞ヒト初等子宮内膜オルガノイドの生成

牛の初期のアンタル卵胞からの卵母細胞のための体外培養戦略

トランスレーショナルバイオメディカル研究への応用を目指したウシ一次エンテロイド由来2次元単層培養系の作製

トランスレーショナルバイオメディカル研究への応用を目指したウシ一次エンテロイド由来2次元単層培養系の作製

トランスレーショナルバイオメディカル研究への応用を目指したウシ一次エンテロイド由来2次元単層培養系の作製