このプロトコルは、フェレットの早期脳損傷を感作した炎症の最初のモデルを提供し、重大かつ持続的な傷害をもたらすため、重要である。この技術は、早期の人間の乳児に見られる脳損傷の種類に寄与すると考えられている引き金と生化学的メカニズムの多くを組み込んだ長期侮辱を含む。脳の測定手順を実証するには、私たちの研究室の研究科学者カイリー・コリーと学部生のオリビア・ホワイトです。
手術開始の30分前に、1キログラム当たりLPS IPあたり3ミリグラムを傷害群のキットに投与し、動物を制御するために1グラム当たり3マイクロリットルの無菌生理食塩水の同等の量を投与する。手順を開始する前に、小さな動物のバリカンを使用して、フェレットの腹側頸部領域のすべての毛髪を長方形のパターンで除去し、皮膚をニッキングしたり、熱発疹を発生させないように注意してください。剃毛領域に局所麻酔を投与し、ポビトンヨウ素と70パーセントのエタノールの3つの交互の綿棒で皮膚を消毒します。
つまみつまみによって適切なレベルの沈着を確認した後、動物を首の領域を露出させる無菌、使い捨ての切り取りドレープで覆う。両側頸動脈結紮の場合は、1回使用番号10メスブレードを使用して首の中央に1.5センチメートルの正中線切開を行い、細かい止血と湾曲した鉗子を使用して左頸動脈までぶっきらぼうに解剖します。露出した動脈を関連する神経血管束から離れて解剖する。
そして、動脈の下に無菌5/0シルク縫合糸のループ10センチメートルの長さを渡すために湾曲した細かい鉗子のペアを使用してください。縫合糸を半分に切り、縫合糸の両方の長さをしっかりと結んで動脈をリゲートし、結び目の間に少なくとも2ミリメートルを残します。縫合糸の間の左頸動脈をトランセクトし、神経をそのまま残し、右側の解剖を繰り返すように注意する。
単一の無菌1/8インチ臍結びで右頸動脈を可逆的にリゲートする。そして、外科用皮膚クリップで傷口を閉じます。次いで、低酸素症の前にモニタリングして、少なくとも30分間、温度制御水浴中で回復させる。
逐次低酸素症、高酸素症および低酸素症治療のために、動物を水浴内の気密室の傷害群に入れる。チャンバー内の酸素濃度と、少なくとも1つのセンチネル動物の直腸温度を継続的に監視します。加湿9%の酸素と91パーセントの窒素でチャンバーを洗い流し、チャンバーのサイズに応じて毎分3〜5リットルの流量を維持します。
チャンバー内の酸素濃度が9%に達したら、30分間送達を続ける。低酸素処理の終了時に、ガス供給を80%加湿酸素と20%窒素に切り替えます。ハイオキシアの30分後、チャンバーを開けてノルモキシアに達し、室内空気と平衡化し、チャンバーを密閉し、再び9%加湿酸素で洗い流す。
この第2回低酸素症の間にすべての動物を継続的に監視し、徐呼吸を示す動物に注意してください。チャンバー内の酸素濃度が9%に達したら、低酸素治療を30分間継続する。治療の最後に、右頸動脈から臍帯テープを同定し、解くために湾曲した鉗子を使用した。
外科用スキンクリップで傷口を閉じてください。その後、看護と回復のために60分間ジルにすべてのキットを返します。回復期間の終わりに、負傷した動物を摂氏37~40度の水浴場に6時間戻し、必要に応じて水温を調整し、直腸温度を36~37°Cに保ちます。
その後、キットをジルに戻します。適切な実験エンドポイントで脳の収穫と固定の後、各脳の背側および腹側の側面に電子キャリパーの先端を置き、各負傷および非負傷した脳の高さを測定する。側頭葉の最も外側の部分にキャリパーの先端を置き、各脳の幅を測定し、各脳の重さを測定します。
キャリパーを使用して、縦方向の裂け目、対応するスルカスの最も明確な部分の最初と最後からすべてのスルチ、および各対応する回の最も広い側面からすべてのジャイリを測定するために使用します。次に、キャリパーの一方の先端を縦裂の最も後方の点に置き、もう一方の先端を小脳の最後部に置き、露出した小脳の量を測定する。この研究で侮辱にさらされた6匹のごみから34匹の動物のうち、5匹の動物が中等度の傷害を受け、4匹の動物が重傷を負った。
傷害の増加に伴い、側頭葉および/または後頭部葉のジャイリの狭小化が観察され、最も重傷を負った動物における縦裂および嚢胞組織喪失のより大きな領域の関連する硫黄の短縮および拡大を伴う。反射試験期間中、負傷した動物は負のジオタキシスタスクで回転する時間が遅くなります。クリフ回避タスクでエッジから離れて回転する時間が遅く、右に時間が遅くなります。
キャットウォークでは、負傷した動物はコントロールと同様の平均速度を示しますが、各走行中に速度変動の有意に大きな程度を表示します。足と後足の間の体重調整距離は、負傷した動物では有意に大きく、ユニット足面積当たりの圧力は少なく、4つの足を通る。オープンフィールドでは、負傷した動物はより少ない総距離をカバーし、より頻繁に停止し、フィールドの中心で大幅に多くの時間を費やし、コーナーでの時間を減らす。
ここでは、制御および負傷した動物の代表的なヒートマップが観察できる。付属神経から動脈を解剖し、可能な限り低酸素時間を可能にするように注意してください。これらのステップは、動物の大半が生き残ることを保証します, また、怪我を持続しながら、.
この手順に従って、生化学的、病理学的または行動的な結果は、通常脳損傷のげっ歯類モデルに制限される評価を含む評価することができる。
