私たちは、GFAP-EGFPおよびCX3CR1-EGFPマウス系統を提供するための博士フランクキルヒホッフに深く感謝しています。作品は、フィンランドの国際的な流動のセンター、技術庁、神経科学のフィンランド大学院（FGSN）、フィンランドアカデミーからの補助金によって支えられている。

ここで紹介するすべての手順は、動物のケア（動物実験2006分の62にフィンランドACT）のためのローカルのガイダンスに従って行った。動物ライセンス（ESAVI/2857/04.10.03/2012）は、地方自治体（ELÄINKOELAUTAKUNTA-ELLA）から入手した。 1-3ヶ月齢の成体マウス、体重24〜38グラムは、認定大学の動物施設内の個々のケージで飼育し、餌と水を自由に与えた。 1。頭蓋窓を通して脳損傷イメージング<ol><li>動物を麻酔し、演算フィールドを調製する<ol><li>フィルター滅菌リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH7.4中に溶解したケタミン（ケタラール、80ミリグラム/ kg）およびキシラジン（ロンプン、10 mg / kg）の混合物の腹腔内注射によりマウスを麻酔。麻酔の深さを確認するために、マウスの反射神経を定期的に（尾とつま先のピンチプローブ）を確認してください。適切なときに適切な麻酔を維持するために、投与量を増加させるがoverdを避けるOSE。 </li><li>麻酔からの回復後に手術、撮像セッションと最初の1時間加熱パッドを使用して37.0℃で動物を維持する。 </li><li>乾燥からマウスの目を保護するために、目の潤滑剤を塗布。 </li><li>炎症や脳浮腫を軽減するために皮下注射することにより、デキサメタゾン（Rapidexon獣医、2 mg / kgの）を管理。 </li><li>前または直後に手術後30分まで（Ketoprophene腹腔例えば）鎮痛剤を投与する。動物はこのような、移動飲食、または体重減少に難色として痛みの症状を示す場合、流涎、立毛、または異常な呼吸は、手術後、鎮痛剤の注射を繰り返し鳴ります。 </li><li>シェービングマシン（材料および装置を参照）、マウスの頭を剃る。ウィスカーの損傷を防ぐ。 </li><li>剃毛領域をきれいにする70％エタノール溶液でマウスの頭部の皮膚を処置する。 </li><li>外科はさみを使用して（材料とを参照してください。機器）と鉗子（材料および装置を参照）、額に耳の間の中間線から皮膚を切った。 </li><li>優しく鈍い顕微刃で頭蓋骨に付着した結合組織を削り取る。 </li><li>横皮膚の境界線をスライドさせて、わずかに頭と皮膚固定用の頭蓋骨の聴覚オリフィスに耳バーを引き出します。 </li><li>次いで、滅菌綿棒、圧縮空気の組み合わせを使用して、頭蓋骨の表面を乾燥、滅菌PBSで頭蓋骨をきれいにし、0.5％グルコン酸クロルヘキシジンでマウスの頭に手術部位を治療。 </li></ol></li><li>刺す傷害の刑罰<ol><li>位置動物ホルダーと小動物定位装置（材料および装置を参照）。 </li><li>動物の頭蓋骨の表面に集中する次の定位固定装置に双眼顕微鏡の位置を調整します。 </li><li>双眼顕微鏡を用いて、頭蓋骨にブレグマポイントを探します。 </li><li>レジオを識別定位座標を使用して、近隣のnである。 注：直接表面的な皮質血管の上に配置された関心のある分野を避けてください。これらの破壊は強く外傷の進行に影響を与えることができる。 </li><li>選択した領域の上の30のGの針を配置し、頭蓋骨の表面を引っ掻いて標的部位をマーク。 </li><li>影響を受けた骨の表面領域の不要な拡大を避けるために、すべての可能な予防措置で頭蓋骨を開けます。顕微鏡下での高速外科ドリルを（材料および装置を参照）を使用します。液体が掘削領域に表示された場合に掘削を停止します。 </li><li>針で掘削井戸の底に触れてください。 </li><li>プリック適用部位の座標に応じて0.5〜2.0ミリメートルの深さまで、脳（挿入率5〜10ミリメートル/分）にスムーズに針を浸します。 </li><li>所望の深さに達した後、直ちに針を取り外します（後退速度5〜10ミリメートル/分）と小さなタンポンを刺す後に現れる血を拭く（SEE資機材）。 </li><li>マイクロシリンジポンプ（WPI）を使用して病変部位に100μMのローダミン101または関心のある他の化合物のマイクロインジェクションを行い、10μlのハミルトンシリンジをガラスピペットで組み立てる。 NOTE：ホウケイ酸ガラス毛細管からガラスピペットの調製中に、10〜20ミクロンの直径に先端を鋭く。 </li><li> 2-5 NL /秒の速度で注射液の25​​0-1,500 NLを吹き込む。 注：その後、ソリューションの流出を防ぐために、ゆっくりと慎重に取り外し、脳実質内に少なくとも5分間の注入の終了後に、ピペットのままにしておきます。 </li></ol></li><li>慢性頭蓋窓のため開頭<ol><li>損傷部位の周りに円窓を作るためにゆっくりと、慎重に頭蓋骨を開けます。 3〜3.5ミリメートルの窓径を使用してください。 </li><li> w iを覆う皮質緩衝液滴（125mMのNaCl、5mMのKCl、10mMのグルコース、10mMのHEPES、蒸留H 2 O中2mMのCaCl 2および2mMのMgSO 4）し適用する表示ウインドウ。 </li><li>頭蓋窓の丸いガラスカバースリップ（＃1.5厚さ）の位置にします。 </li><li>カバーガラスの周りの皮質バッファの過剰を取り除く。 </li><li>アクリル接着剤でカバースリップの端をシール（材料および装置を参照）。 注：接着剤がカバーガラスの上面に塗布されていないことを確認してください。カバーガラスを接着剤で汚染されている場合は、慎重にマイクロブレードを汚染する接着剤を除去すると、ガラスを安定して頭蓋骨に接着されるまで待機し、ガラス表面に接着剤が乾く。 </li><li>接着剤が枯渇せて5分間待ちます。 </li><li>金属ホルダを配置することができるように、耳のバーの高さのネジを使用して、ヘッド位置を調整する。 </li><li> （材料および装置を参照）スチールホルダーのリングにアクリル接着剤の少量を適用します。 </li><li>後方監督の金属ホルダーハンドルカバーガラスにスチールホルダーのリングを接着します。 </li><li>接着剤が枯渇せて5分間待ちます。 </li><li> MIX歯科用セメントの粘性条件を達成するために3.5センチメートルペトリ皿（またはアナログ）にポリアクリル接着剤で（材料および機器を参照）。 </li><li>セメント+接着剤混合物を用いた頭蓋窓の境界をシールし、皮膚の国境まで同じ混合物で頭蓋骨の露出面をカバーしています。 </li><li>セメント+接着剤混合物が枯渇して、耳のバーを削除できるように15分間待ちます。 </li><li>それはプロトコル3に記載のように関心領域及び制御領域の二光子励起顕微鏡（テンソル積展開法）撮影を行う。 </li><li>イメージングの後、動物は加熱パッド上に麻酔から回復し、完全に回復するまで観察下に個々のケージにそれを維持することができます。ウェットフードは、咀嚼や水和を促進するために与えることができます。 </li></ol></li></ol> 2。間伐頭蓋骨を通して脳損傷イメージング<ol><li>動物Anaesthetizingおよび演算フィールドを調製する<ol><li>マウスを麻酔し、外傷誘導のために準備工程1.1に記載のように。 </li></ol></li><li>頭蓋骨の間伐やプリック損傷の刑罰<ol><li>位置動物ホルダーと小動物定位器（材料および機器を参照）。 </li><li>動物の頭蓋骨の表面に集中する次の定位固定装置に双眼顕微鏡の位置を調整します。 </li><li>双眼顕微鏡を用いて頭蓋骨にブレグマ点の位置を確認し、定位座標に基づいて画像化される脳領域を特定し、引っ掻いてそれをマーク。 注：頭蓋骨の安定性は、それらの領域に侵害されたとしてスカル間伐位置は、頭蓋縫合の上または近くに配置するべきではありません。さらに、頭蓋骨縫合糸の下に位置する大皮質または髄膜血管および髄膜は、撮像アーチファクトを引き起こす可能性がある。 </li><li>動物の頭蓋骨に関心のある領域上に接着剤で被覆された金属ホルダーを配置し、光の圧力を適用し、金属ホルダーがしっかりと頭蓋骨に接着されるまで5分間待ちます。 </lI&gt; <li>粘性の条件を達成するために3.5センチメートルペトリ皿（またはアナログ）にポリアクリル接着剤で（材料および機器を参照）歯科用セメントを混ぜる。 </li><li>セメント+接着剤混合物と金属ホルダーの境界をシールし、皮膚の国境まで同じ混合物で頭蓋骨の露出面をカバーしています。 </li><li>セメントや接着剤混合物が枯渇させるために15分間待ちます。 </li><li>非重合接着剤の残りを洗い流すように、薄くなった頭蓋骨領域およびPBSで金属ホルダーの周囲の部分を数回すすいでください。 注意：ホルダーに頭蓋骨の安定した取り付けを確実にするために非常に重要です。これは、撮影時の準備の安定性を可能にします。 </li><li>双眼顕微鏡の高倍率モードを使用して、直径〜0.5〜1.5ミリメートルの薄くなった頭蓋骨領域を作成するために、高速マイクロドリルで頭蓋骨の上層を除去します。骨の破片を除去するために掘削中に圧縮空気を使用しています。掘削intermittentlを行う摩擦によって誘発される過熱を避けるために、間伐手順中Y。室温溶液を用いてドリルビットを冷却し、定期的に熱を吸収するために薄型化エリアへのバッファを適用します。 注：皮質の損傷を回避するために、薄い層（&lt;50ミクロン）まで大きな領域（&gt; 1.5ミリメートル）上でドリルダウンしません。 注：齧歯類頭蓋骨構造は、海綿骨の厚い層で分離された緻密骨の2の薄層で構成されています。海綿骨の小さな空洞が血管を含有する、同心円および細管を形成する。外部コンパクト骨層とスポンジ状の層のほとんどの両方を削除するために、マイクロドリルを使用しています。海綿骨内の血管の破壊は、出血を引き起こすことがあります。この出血を止めるために止血コラーゲンスポンジを使用してください。 </li><li>海綿骨の大部分が削除されたかどうか検査するために第二高調波発生（SHG）イメージングを使用してください。残りの骨が目であることを確認して、過度の薄肉化を避けるように注意してください準備のこの段階では50μmよりicker。 </li><li>薄くなった領域の上に暖かいバッファー（35〜37℃）の低下を置く。さらに、骨の層を除去し、〜20μmの骨の厚さ、直径〜700ミクロンの円滑なエリアを形成するためにバールを仕上げ顕微ブレードやマイクロを使用してください。このステップの間に、反復的なSHGイメージングを行い、定期的に骨の厚さを測定するために有用である。 </li><li>関心領域とコントロール領域のためのテンソル積展開法の撮影を行う。 </li><li>領域は厳密に水平に配置されて薄くなったように耳のバーの高さのネジを使用してヘッド位置を調整します。薄くなった領域の上に針を置き、標的部位の下に大きな船がないことを確認してください。 </li><li>薄くなった頭蓋骨表面から0.5〜2.0ミリメートルの深さに、脳内に針を浸し、プリック適用部位の座標に応じによって病巣を作る。 </li><li>針を外し、T後に現れる出血を抑える彼は止血タンポン（材料および機器を参照）脳損傷、急性。損傷部位での血の塊の形と血管の脈動が停止するまで待ちます。 </li><li>セクション1.2.10で説明したように、100μMのローダミン101または病変部位への関心の別の化合物のマイクロインジェクションを実行します。 </li><li>プロトコル3に記載のように損傷の進行および回復をモニターするためにテンソル積展開法撮影を行う。 </li><li>イメージングの後、動物は加熱パッド上に麻酔から意識を回復することができます。無人の動物を残し、唯一のフル物理復旧後にそのホームケージに戻すことはありません。 </li></ol></li></ol> 3。イメージング<ol><li>カスタム構築されたフレームに金属ホルダーを装着することにより、顕微鏡下で動物を置きます。 </li><li>イメージングのために、 例えばマイタイDeepSeeのレーザーとのin vivo二光子用に最適化さXLPLN 25X 1.05 NAの水浸対物レンズを搭載したFV1000MPE 2光子顕微鏡を使用イメージング。 </li><li>広視野蛍光モードを用いて顕微鏡下で病変部位を同定する。脳血管系を視覚化し、血管の観察されたパターンに従って制御領域を選択するためにロングパスフィルタを使用する。 </li><li>画像の第二高調波発生（SHG）信号、同調波長800nm​​のフェムト秒レーザー380から410 nmのバイパス·フィルタを用いて放出された光を集める。蛍光イメージングのために、放射された光を収集するためにバンドパスフィルタ（515から560 nm）を使用し、以下の波長が蛍光励起するために使用される：GFP-860 nmのYFP-950ナノメートル。 </li><li>画像取得のためのFLUOVIEWソフトウェアを使用してください。 </li><li>ストアは、その後の反復的なイメージングのためのすべてのROIの座標。時間をかけて画像と同じ関心領域を、座標の画像の重なりを最大化するたびに調整してください。 </li><li>適切なソフトウェア（ 例えば 。のImageJ）を使用して画像を分析します。ここに提示再構成は、IMARISソフトウェアを用いて行った。 </li></ol>

<ol>
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Methodology and local effects of contusions in the rat.</a> Brain Res. 211 (1), 67-77 (1981).</li><li>Bardehle, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+astrocyte+responses+to+acute+injury+reveals+selective+juxtavascular+proliferation.">Live imaging of astrocyte responses to acute injury reveals selective juxtavascular proliferation.</a> Nat. Neurosci. 16 (5), 580-586 (2013).</li><li>Sword, J., Masuda, T., Croom, D., Kirov, S. 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Cell. Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li><li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Kerr, J. N. D., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulforhodamine+101+as+a+specific+marker+of+astroglia+in+the+neocortex+in+vivo.">Sulforhodamine 101 as a specific marker of astroglia in the neocortex in vivo.</a> Nat. Methods. 1 (1), 31-37 (2004).</li><li>Carr&#233;, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+aspects+of+an+impact+acceleration+traumatic+brain+injury+rat+model+with+potential+suitability+for+both+microdialysis+and+PtiO2+monitoring.">Technical aspects of an impact acceleration traumatic brain injury rat model with potential suitability for both microdialysis and PtiO2 monitoring.</a> J. Neurosci. Methods. 140, 23-28 (2004).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat. Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice.">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat. Protoc. 5, 201-208 (2010).</li><li>Cianchetti, F. A., Kim, D. H., Dimiduk, S., Nishimura, N., Schaffer, C. 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著者らは、開示することは何もありません。

脳外傷は突然の、予期できないイベントです。ここでは、このような神経変性、樹状突起の除去、脳浮腫、グリア性瘢痕、焦点くも膜下出血との透過性の増大と相まって、大脳皮質内の出血などの脳損傷後のヒト患者で観察病理学的変化のスペクトルを再現する動物モデルを記述する血液脳関門。プライマリとセカンダリの病因を研究だけでなく、外傷後の回復には、この損傷モデルは、細?...

急性脳損傷は、自動車のクラッシュにおける損傷の高い発生率と有意な公衆衛生問題である落下又は暴行、およびその後の慢性障害の有病率が高い。脳損傷の治療に対する治療的アプローチは、このように、病院前の手術や救命医療の有効性を制限する、完全に症候性のまま。これは脳損傷の社会的·経済的影響が特に深刻になる。様々な理由のために、臨床試験のほとんどは、新規な治療アプローチを使用して脳損傷後の回復の改善を示すことができなかった。 動物モデルは、薬効が脳損傷を有する患者において予測することができるステージに向けて新たな治療戦略を開発するために重要である。現時点では、頭部外傷のいくつかの十分に確立された動物モデルは、制御された皮質衝撃1は、流体パーカッション傷害2、動的変形皮質3、体重低下を含む、存在する4とフォト損傷5。実験モデルの数は、頭部外傷に関連した病理学の特定の形態学、分子生物学および行動の側面を研究するために使用されてきた。しかし、単一の動物モデルは、新たな治療戦略の検証において完全に成功していない。脳損傷の、信頼性の高い再現性及び制御された動物モデルの開発は、複雑な病理学的プロセスを評価する必要がある。 最新の顕微鏡イメージング技術と遺伝的に符号化された蛍光レポーターの新規な組み合わせは、一次損傷、二次的損傷、および再生の広がり、原発傷害を含む脳損傷のすべてのフェーズを、調査する前例のない機会を提供しています。具体的には、in vivoでの 2光子顕微鏡は、げっ歯類の脳の深部皮質層の細胞でも細胞内構造をリアルタイムに可視化を可能にする独自の非線形光学技術です。細胞やORGAにはいくつかの種類Nelles社は、異なる蛍光マーカーを組み合わせることによって同時に撮像することができる。この強力なツールを使用して、我々は外傷後の条件での脳の生活の動的な形態学的および機能的変化を視覚化することができます。脳損傷の研究にin vivoでの 2光子顕微鏡の利点は、最近キーロフと同僚6によって実証された。軽度の焦点皮質挫傷モデルを使用して、これらの著者は、pericontusional皮質の急性樹状損傷がローカルの血流の減少によりゲート制御されることを示した。さらに、それらは挫傷部位の周囲の代謝的に損なわ皮質をさらに脱分極拡散によって損傷されることを実証した。この二次的な損傷は、外傷性脳損傷の影響がより深刻なこと、シナプス回路に影響を与えます。 ここでは、地元の頭脳のための高度なモデルとして、同時局所薬物のアプリケーションと組み合わせることができる注射針で刺す定位の方法を提案する傷害およびin vivoで哺乳動物の脳内の急性外傷の病態生理学的影響を研究するためのツールとして。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2A-sa dumb Tweezers, 115mm</td>
			<td style="width:71px;">XYtronic</td>
			<td style="width:119px;">XY-2A-SA</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">30G &#189;&#8217;&#8217; needle</td>
			<td style="width:71px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 304000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Animal trimmer, shaving machine</td>
			<td style="width:71px;">Aesculap</td>
			<td style="width:119px;">Isis GT420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Binocular Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Stemi 2000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Biological Temperature Controller with stainless steel heating pad</td>
			<td style="width:71px;">Supertech</td>
			<td style="width:119px;">TMP-5b</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blunt microsurgical blade</td>
			<td style="width:71px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 374769</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Borosilicate tube with filament</td>
			<td style="width:71px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">BF120-69-10</td>
			<td style="width:167px;">For glass pipette production</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Carprofene</td>
			<td style="width:71px;">Pfizer</td>
			<td style="width:119px;">Rimadyl vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Chlorhexidine digluconate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C9394</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Dental cement</td>
			<td style="width:71px;">DrguDent, Dentsply</td>
			<td style="width:119px;">REF 640 200 271</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:71px;">FaunaPharma</td>
			<td style="width:119px;">Rapidexon vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Disposable drills</td>
			<td style="width:71px;">Meisinger</td>
			<td style="width:119px;">HP 310&#160;104&#160;001&#160;001&#160;008</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dulbeco&#8217;s PBS 10X</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D1408</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dumont #5 forceps, 110 mm</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">91150-20</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Ealing microelectrode puller</td>
			<td style="width:71px;">Ealing</td>
			<td style="width:119px;">50-2013</td>
			<td style="width:167px;">Vertical puller for glass pipette production</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eyes-ointment</td>
			<td style="width:71px;">Novartis</td>
			<td style="width:119px;">Viscotears</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foredom drill control</td>
			<td style="width:71px;">Foredom&#160;</td>
			<td style="width:119px;">FM3545</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foredom micro motor handpiece</td>
			<td style="width:71px;">Foredom</td>
			<td style="width:119px;">MH-145</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Gas anesthesia platform for mice</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting</td>
			<td align="right" style="width:119px;">50264</td>
			<td style="width:167px;">Assembled on stereotaxic instrument</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Hemostasis Collagen Sponge</td>
			<td style="width:71px;">Avitene, Ultrafoam BARD</td>
			<td style="width:119px;">Ref 1050050</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Imaris</td>
			<td style="width:71px;">Bitplane</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:71px;">Intervet</td>
			<td style="width:119px;">Ketaminol vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Mai Tai DeepSee laser</td>
			<td style="width:71px;">Spectra-Physics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Metal holder</td>
			<td style="width:71px;">Neurotar</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro dressing forceps, 105 mm</td>
			<td style="width:71px;">Aesculap</td>
			<td style="width:119px;">BD302R</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Microfil</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">MF34G-5</td>
			<td style="width:167px;">Micro syringe filling capillaries</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Multiphoton Laser Scanning Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">FV1000MPE</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NanoFil Syringe 10 microliter</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">NANOFIL</td>
			<td style="width:167px;">Hamilton syringe</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Nonwoven swabs 5&#215;5</td>
			<td style="width:71px;">Molnlycke Health Care</td>
			<td style="width:119px;">Mesoft</td>
			<td style="width:167px;">Surgical tampons</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">polyacrylic glue</td>
			<td style="width:71px;">Henkel</td>
			<td style="width:119px;">Loctite 401</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Round glass coverslip&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 thickness&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Small animal stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:71px;">David Kopf Instruments</td>
			<td align="right" style="width:119px;">900</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Stoelting mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51625</td>
			<td style="width:167px;">Assembled on stereotaxic instrument.</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Student iris scissors, straight 11.5 cm</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">91460-11</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Sulforhodamine 101</td>
			<td style="width:71px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">S-359</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">UMP3 microsyringe pump and Micro 4 microsyringe pump controller</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">UMP3-1</td>
			<td style="width:167px;">Microinjector and controller</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:71px;">Bayer Health Care</td>
			<td style="width:119px;">Rompun vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acute brain trauma in mice followed by longitudinal two-photon imaging

急性脳外傷は多くの場合、異なる事故頭部損傷に起因して、人口のかなりの部分に影響を与えますが、そのための有効な治療法がありません。現在使用されている動物モデルの制限は、病理メカニズムの理解を妨げる。多光子顕微鏡は、長手方向の生理学的および病理学的条件の下で、無傷の動物の脳内の細胞や組織を研究できます。ここでは、外傷後の条件下で脳細胞挙動の二光子イメージングによって研究急性脳損傷の2つのモデルを記載している。選択された脳領域は、脳実質内の制御幅と深さの外傷を生成するために鋭利な針でけがをされている。我々の方法は、同時薬物アプリケーションと組み合わせることができ、注射針で刺す定位を使用しています。我々は、この方法は、哺乳動物の脳における急性の外傷の病態生理学的影響の細胞機構を研究するための高度なツールとして使用することができることを提案する<em&gt;生体内で。頭蓋窓や頭蓋骨間伐：このビデオでは、我々は2製剤による急性脳損傷を兼ね備えています。我々はまた、外傷後の脳再生のマルチセッションイメージングのための両方の製剤の利点と制限について説明します。

トランスジェニックマウスにおける外傷後の脳の画像化のために、1）慢性頭蓋窓および2）頭蓋骨間伐：我々は2つ​​の操作方法を最適化しています。実験的製剤の模式図が図1に示されている。の0.3mm OD（G 30）のスチール針による穿刺外傷性は、当穿孔（ 図1A）に印加される。 THY1-YFP-の三次元再構成で示されているように頭蓋骨間伐は、約300ミクロン?...

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Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

急性脳外傷は現在まで適切な治療を持っていない重傷です。多光子顕微鏡は、縦方向に急性脳外傷開発のプロセスを研究し、げっ歯類における治療的戦略をプロービングできます。脳のin vivo二光子イメージングに師事急性脳外傷の二つのモデルは、このプロトコルで実証されています。

縦二光子イメージングに続いてマウスの急性脳外傷

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

acute-brain-trauma-in-mice-followed-by-longitudinal-two-photon-imaging

Research

JoVE Journal

Medicine

12.3K ビュー.  University of Helsinki. 急性脳外傷は現在まで適切な治療を持っていない重傷です。多光子顕微鏡は、縦方向に急性脳外傷開発のプロセスを研究し、げっ歯類における治療的戦略をプロービングできます。脳のin vivo二光子イメージングに師事急性脳外傷の二つのモデルは、このプロトコルで実証されています。 

ビデオ: Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; this response is often accompanied by a delayed immunosuppression that adds the clinical complications of infection and can also increase mortality.1-9 Many studies have begun to assess these changes in the reactivity of the immune system following trauma.10-15 
Immunologic studies are greatly supported through the wide variety of transgenic and knockout mice available for in vivo modeling; these strains aid in detailed investigations to assess the molecular pathways involved in the immunologic responses.16-21
The challenge in experimental murine trauma modeling is long term investigation, as fracture fixation techniques in mice, can be complex and not easily reproducible.22-30
This pseudofracture model, an easily reproduced trauma model, overcomes these difficulties by immunologically mimicking an extremity fracture environment, while allowing freedom of movement in the animals and long term survival without the continual, prolonged use of anaesthesia. The intent is to recreate the features of long bone fracture; injured muscle and soft tissue are exposed to damaged bone and bone marrow without breaking the native bone.
The pseudofracture model consists of two parts: a bilateral muscle crush injury to the hindlimbs, followed by injection of a bone solution into these injured muscles. The bone solution is prepared by harvesting the long bones from both hindlimbs of an age- and weight-matched syngeneic donor. These bones are then crushed and resuspended in phosphate buffered saline to create the bone solution.
Bilateral femur fracture is a commonly used and well-established model of extremity trauma, and was the comparative model during the development of the pseudofracture model. Among the variety of available fracture models, we chose to use a closed method of fracture with soft tissue injury as our comparison to the pseudofracture, as we wanted a sterile yet proportionally severe peripheral tissue trauma model. 31
Hemorrhagic shock is a common finding in the setting of severe trauma, and the global hypoperfusion adds a very relevant element to a trauma model. 32-36 The pseudofracture model can be easily combined with a hemorrhagic shock model for a multiple trauma model of high severity. 37

Pseudofracture, a reproducible murine model of sterile musculoskeletal trauma, allows for evaluation of late term post-traumatic immune responses. This article describes the procedural execution of the model step by step, including the potential for experimental model combinations to permit study of multiple trauma.

偽骨折：急性末梢組織外傷モデル

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; ...

医学

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel underlying neurobiological mechanisms behind drug action and neurotransmitter-related disorders, such as depression and ADHD. Like most of the imaging methods (PET, SPECT, CT) it represents a progress in the investigation of brain disorders and the related function of neurotransmitter pathways in a non-invasive way with respect of the overall neuronal connectivity. Moreover it also provides the ideal tool for translation to clinical investigations. MRI, while still behind in molecular imaging strategies compared to PET and SPECT, has the great advantage to have a high spatial resolution and no need for the injection of a contrast-agent or radio-labeled molecules, thereby avoiding the repetitive exposure to ionizing radiations. Functional MRI (fMRI) is extensively used in research and clinical setting, where it is generally combined with a psycho-motor task. phMRI is an adaptation of fMRI enabling the investigation of a specific neurotransmitter system, such as serotonin (5-HT), under physiological or pathological conditions following activation via administration of a specific challenging drug.
The aim of the method described here is to assess brain 5-HT function in free-breathing animals. By challenging the 5-HT system while simultaneously acquiring functional MR images over time, the response of the brain to this challenge can be visualized. Several studies in animals have already demonstrated that drug-induced increases in extracellular levels of e.g. 5-HT (releasing agents, selective re-uptake blockers, etc) evoke region-specific changes in blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signals (signal due to a change of the oxygenated/deoxygenated hemoglobin levels occurring during brain activation through an increase of the blood supply to supply the oxygen and glucose to the demanding neurons) providing an index of neurotransmitter function. It has also been shown that these effects can be reversed by treatments that decrease 5-HT availability16,13,18,7. In adult rats, BOLD signal changes following acute SSRI administration have been described in several 5-HT related brain regions, i.e. cortical areas, hippocampus, hypothalamus and thalamus9,16,15. Stimulation of the 5-HT system and its response to this challenge can be thus used as a measure of its function in both animals and humans2,11.

The goal of this technique is to assess serotonin (5-HT) neurotransmitter function in the live and free-breathing animal with pharmacological magnetic resonance imaging (phMRI) and an intravenous challenge with a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), fluoxetine.

前臨床研究における薬理学的チャレンジのfMRIの利用：5-HTシステムへの応用

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

同所神経膠芽腫モデルマウスは、脳実質細胞の物理的制約を維持し、生体内二光子顕微鏡に適し

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Ultrasound Imaging-guided Intracardiac Injection to Develop a Mouse Model of Breast Cancer Brain Metastases Followed by Longitudinal MRI

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 months. It is critical to have suitable animal models to mimic the hemodynamic spread of the metastatic cells in the clinical scenario. Here, we are introducing the use of small animal ultrasound imaging to guide an accurate injection of brain tropical breast cancer cells into the left ventricle of athymic nude mice. Longitudinal MRI is used to assessing intracranial initiation and growth of brain metastases. Ultrasound-guided intracardiac injection ensures not only an accurate injection and hereby a higher successful rate but also significantly decreased mortality rate, as compared to our previous manual procedure. In vivo high resolution MRI allows the visualization of hyperintense multifocal lesions, as small as 310 &#181;m in diameter on T2-weighted images at 3 weeks post injection. Follow-up MRI reveals intracranial tumor growth and increased number of metastases that distribute throughout the whole brain.

A breast cancer brain metastasis mouse model is established with ultrasound imaging-guided intracardiac injection of MDA-MB231/Br-GFP cells. Development of multifocal intracranial metastases has been monitored longitudinally using high-resolution 9.4 T MRI.

縦MRIが続く乳がんの脳転移のマウスモデルを開発するために、超音波画像誘導心臓内注射

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 ...

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans biofilms have been studied predominantly in vitro but there is a crucial need for better understanding of this dynamic process under in vivo conditions. We developed an in vivo subcutaneous rat model to study C. albicans biofilm formation. In our model, multiple (up to 9) Candida-infected devices are implanted to the back part of the animal. This gives us a major advantage over the central venous catheter model system as it allows us to study several independent biofilms in one animal. Recently, we adapted this model to study C. albicans biofilm development in BALB/c mice. In this model, mature C. albicans biofilms develop within 48 hr and demonstrate the typical three-dimensional biofilm architecture. The quantification of fungal biofilm is traditionally analyzed post mortem and requires host sacrifice. Because this requires the use of many animals to perform kinetic studies, we applied non-invasive bioluminescence imaging (BLI) to longitudinally follow up in vivo mature C. albicans biofilms developing in our subcutaneous model. C. albicans cells were engineered to express the Gaussia princeps luciferase gene (gLuc) attached to the cell wall. The bioluminescence signal is produced by the luciferase that converts the added substrate coelenterazine into light that can be measured. The BLI signal resembled cell counts obtained from explanted catheters. Non-invasive imaging for quantifying in vivo biofilm formation provides immediate applications for the screening and validation of antifungal drugs under in vivo conditions, as well as for studies based on host-pathogen interactions, hereby contributing to a better understanding of the pathogenesis of catheter-associated infections.

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

We present an experimental procedure of Candida albicans biofilm development in a mouse subcutaneous model. Fungal biofilms were quantified by determining the number of colony forming units and by a non-invasive bioluminescence imaging, where the amount of light that is produced corresponds with the number of viable cells.

生物発光イメージングが続くマウス皮下モデルにおける医学関連の異物にカンジダ·アルビカンスバイオフィルム発展

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular plasticity or damage occurring overtime and in relation to neuronal activity or blood flow. In vivo two-photon microscopy allows the study of the structural and functional plasticity of large cellular units in the living brain. In particular, the thinned-skull window preparation allows the visualization of cortical regions of interest (ROI) without inducing significant brain inflammation. Repetitive imaging sessions of cortical ROI are feasible, providing the characterization of disease hallmarks over time during the progression of numerous CNS diseases. This technique accessing the pial structures within 250 &#956;m of the brain relies on the detection of fluorescent probes encoded by genetic cellular markers and/or vital dyes. The latter (e.g., fluorescent dextrans) are used to map the luminal compartment of cerebrovascular structures. Germane to the protocol described herein is the use of an in vivo marker of amyloid deposits, Methoxy-O4, to assess Alzheimer&#39;s disease (AD) progression. We also describe the post-acquisition image processing used to track vascular changes and amyloid depositions. While focusing presently on a model of AD, the described protocol is relevant to other CNS disorders where pathological cerebrovascular changes occur.

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

This manuscript describes a procedure to track the remodeling of the cerebrovasculature during amyloid plaque accumulation in vivo using longitudinal two-photon microscopy. A thinned-skull preparation enables the visualization of fluorescent dyes to assess the progression of cerebrovascular damage in a mouse model of Alzheimer&#39;s disease.

縦<em&gt;インビボ</em&gt;脳血管系のイメージング：中枢神経系疾患との関連

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an increased use of mouse models in orthopedic research was noted, most probably because mouse models offer a large number of genetically-modified strains and special antibodies for the analysis of molecular mechanisms of fracture healing. To control the biomechanical conditions, well-characterized osteosynthesis techniques are mandatory, also in mice. Here, we report on the design and use of a closed bone healing model to stabilize femur fractures in mice. The intramedullary screw, made of medical-grade stainless steel, provides through fracture compression an axial and rotational stability compared to the mostly used simple intramedullary pins, which show a complete lack of axial and rotational stability. The stability achieved by the intramedullary screw allows the analysis of endochondral healing. A large amount of callus tissue, received after stabilization with the screw, offers ideal conditions to harvest tissue for biochemical and molecular analyses. A further advantage of the use of the screw is the fact that the screw can be inserted into the femur with a minimally invasive technique without inducing damage to the soft tissue. In conclusion, the screw is a unique implant that can ideally be used in closed fracture healing models offering standardized biomechanical conditions.

This protocol describes a minimally invasive osteosynthesis technique using an intramedullary screw for standardized stabilization of femur fractures, which can be used to analyze endochondral bone healing in mice.

癒しの標準化された生体力学的条件下でマウスの軟骨破壊を分析する低侵襲モデル

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

直接気管内リポ多糖刺激によるマウスの急性肺損傷の誘導

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Orthopedic Robot-Assisted Femoral Neck System in the Treatment of Femoral Neck Fracture

Cannulated screw fixation is the main therapy for femoral neck fractures, especially in young patients. The traditional surgical procedure uses C-arm fluoroscopy to place the screw freehand and requires several guide wire adjustments, which increases the operation time and radiation exposure. Repeated drilling can also cause damage to the blood supply and bone quality of the femoral neck, which can be followed by complications such as screw loosening, nonunion, and femoral head necrosis. In order to make fixation more precise and reduce the incidence of complications, our team applied robot-assisted orthopedic surgery for screw placement using the femoral neck system to modify the traditional procedure. This protocol introduces how to import a patient's X-ray information into the system, how to perform screw path planning in software, and how the robotic arm assists in screw placement. Using this method, the surgeons can place the screw successfully the first time, improve the accuracy of the procedure, and avoid radiation exposure. The whole protocol includes the diagnosis of femoral neck fracture; the collection of intraoperative X-ray images; screw path planning in the software; precise placement of the screw under the assistance of the robotic arm by the surgeon; and verification of the implant placement.

This article introduces a method of robot-assisted orthopedic surgery for screw placement during the treatment of femoral neck fracture using the femoral neck system, which allows for more accurate screw placement, improved surgical efficiency, and fewer complications.

大腿骨頸部骨折の治療における整形外科ロボット支援大腿骨頸部システム

Cannulated screw fixation is the main therapy for femoral neck fractures, especially in young patients. The traditional surgical procedure uses C-arm ...

Urethral Stricture Induction Followed by Buccal Mucosa Graft Urethroplasty in a Rat Model

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is necessary, although in some cases, it is inappropriate or needs to be optimized to repair a given stricture. Therefore, developing innovative procedures and evaluating their putative success in experimental models is crucial to fit the clinical need. With this goal, this study describes a protocol in which urethral stricture was induced by electrocautery in Wistar rats. Urethral reconstruction was performed 1 week later with a buccal mucosa graft, harvested from the lower lip, and placed in a ventral onlay fashion. A retrograde urethrogram showed a significant improvement in urethral diameter after urethroplasty compared to the respective value after stricture induction. Additionally, the graft placement was assessed by blood perfusion analysis using laser Doppler. As expected, a dark blue area corresponded to the non-vascularized buccal mucosa graft. This procedure can successfully simulate the normal pathophysiological process of urethral injury and tissue modulation, as well as urethral reconstruction using a buccal mucosa graft in a reproducible manner, and serve as the basis for future research based on tissue engineering or urethral grafts.

In the present protocol, a urethral stricture induction was developed in Wistar rats, followed by urethral reconstruction with a buccal mucosa graft. A retrograde urethrogram and laser Doppler assessment were performed, validating urethral reconstruction (after stricture formation) and graft placement.

ラットモデルにおける尿道狭窄誘導とそれに続く頬粘膜移植尿道形成術

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is ...