臨床的に使用されるオンマヤ貯水池を模倣するマウス・オンマヤは、研究者が前臨床モデルで脳転移および普遍的に致命的なレプトメニンゲア病に対する様々な直接的標的療法をテストすることを可能にする。この技術の利点は、研究者が血液脳関門をバイパスして、中枢神経系の転移を治療するために脳脊髄液に直接マイクロリットルの薬物を送達できることです。このM.M.Ommayaの注入プロトコルは、この手順の成功を確実にするために不可欠な、立体的手術経験と無菌技術トレーニングを有する研究者または技術者のために設計されています。
この手順のデモンストレーションは、南フロリダ大学の比較医学のマーギー・ボールドウィンとミシェル・ダニエルソン、モフィットがんセンターと研究所のピーター・フォーサイス博士の研究室の上級研究員であるヴィンセント・ローです。まず、1キログラム当たり1ミリグラムのブプレノルフィンでマウスを皮下注射する。マウスを麻酔した後、手術のために準備します。
切開部位を汚染しないように十分な境界領域で外科部位をクリップします。頭部の表面全体の毛皮を剃り、滅菌技術を用いて皮膚を準備する。その後、殺菌性皮膚消毒剤でサイトを飽和させ、部位の中心から周辺まで働き、乾燥させます。
背骨が水槽マグナと同じレベルに保たれるように体を配置します。尾にわずかなトラクションを適用しながら、それを固定するためにテールベースにテープを置きます。滅菌ドレープまたは滅菌接着剤を用いたプラスチックドレープ材料を塗布して、外科現場を汚染から保護します。
首を完全に伸ばして、外科用はさみの先端を後頭部の骨を横切ってわずかな圧力で下方に走り、ピネの間から始めます。触診した凹部の少し上に、小さな3〜5ミリメートルの正中線切開を行います。30ゲージハミルトンシリンジに細胞懸濁液の5マイクロリットルを引き込みます。
1〜2ミリメートルの先端で鈍い先端鉗子を使用して、水槽のマグナを静かに押し下げます。閉じた位置にチップを導入し、硬膜に下圧を加えながら開きます。硬膜が容易に同定され、関連する血管が露出領域に見えるまで、鈍い解剖を繰り返す。
鉗子を開いたまま、周囲の筋肉を引っ込めるために、傾斜器を視覚化するために硬膜の下に30ゲージの非採点針を導入し、針がベベル自体を越えて導入されることを確認します。ゆっくりと注射器プランジャーを展開し、硬膜のすぐ下に細胞を送達します。噴射部位の漏れが指摘された場合は、綿先端のアプリケータで穏やかな圧力を加えます。
傷のクリップまたは皮膚接着剤のマイクロドロップを適用することにより、皮膚を閉じます。最初の週の手術後、毎日マウスを監視します。マウスが痛みや苦痛を感じているように見える場合は、獣医の相談と指令に基づいて、12〜24時間に1回、1キログラム当たり10ミリグラムの皮下注射で治療してください。
25ゲージのミニチュア注入口および1ミリメートルのスペーサーディスクを使用して、マウス・オンマヤ注入装置を組み立てます。シアノクリレート滅菌接着剤を使用して、右脳半球への約2.5ミリメートルの金属カニューレの浸透を確保し、滅菌技術に従って皮膚を準備します。小さな皮膚切開を行い、その後、下層の皮下組織を鈍い解剖して頭蓋骨を露出させる。
過酸化水素を使用して頭蓋骨を乾燥させます 綿ひっくり返ったアプリケータースティックを浸します。0.5ミリメートル後部の頭蓋骨に0.9ミリメートルのバリ穴を開け、ブレグマの1.1ミリメートルの側面を掘削して、硬膜を露出させます。マイクロドリルを脇に移動し、バリ穴を囲む骨をそっと採点します。
シアノクリレート滅菌接着剤を使用して、頭蓋骨に注入ポートを貼り付け、約2.5ミリメートルの深さまで挿入します。縫い目は、中断されたステッチパターンまたは財布ひも縫合糸で4-0非吸収性ナイロン縫合糸を使用して切開を縫合する。回復のために個々のケージに手術後のマウスを収容する。
マウスを投与するには、ポートインジェクションアダプターとハミルトン注射器を使用してマウスオンマヤにアクセスします。鉗子を使用して、ミニチュア注入口の上部を保持し、ポートインジェクタアダプタをポートセプタムに完全に静かに挿入します。注入が行われたら、鉗子を使用してポートインジェクションアダプターからマウス・オムマヤを取り外します。
注射の経路を視覚化するために、2%エバンスブルーは、マウス・オンマヤモデルを介して注入された。染料は15分で心室と脳に浸透に成功した。30分後、色素が脊髄に見えるようになった。
概念実証として、BALB/cマウスにルシメラーゼ標識Her2+TUBO乳癌細胞株を内分槽内に注射し、マウス・オンマヤスを移植した。注射から約1週間後、マウスはLMDを発症し始めた。これらのマウスは、腹腔内注射またはマウス・オンマヤを介した腹腔内療法を介して、Her2抗体免疫療法で週に1回最大4週間治療した。
未治療のマウスは19日目までに死亡したが、マウス・オンマヤを通じて内腔内療法を取り出したすべてのマウスは生き残った。第4週までに、腫瘍の完全な退行が観察された。全身療法で治療されたマウスと比較して、脳内療法を受けたマウスは、全体的な生存期間がはるかに長かった。
この手順を試みる場合、マウスオンマヤを配置する前に頭蓋骨が乾燥することが重要です。少量の接着剤を使用し、マウス・オンマヤを約10秒間置いて頭蓋骨に付着させます。この技術により、研究者は、中枢神経系転移患者の合理的な治療戦略を設計するのに臨床的に関連するマウスモデルにおける幅広いがん治療薬を探求することができます。
