著者らは、QSTの犬を扱ってくれたアンドレア・トムソン、ジョン・ハッシュ、ホープ・ウッズ、オータム・アンソニー、犬のスクリーニングに協力してくれた榎本正孝、ホットサーマルQSTのプロトコルの確立に貢献してくれたサム・チウに感謝の意を表します。

すべての手順は、ノースカロライナ州立大学の施設内動物管理および使用委員会によって承認されました。
1.部屋のセットアップと学習科目の順応
<ol><li>QSTオペレーター、ハンドラー、およびあらゆるサイズの犬が快適に動き回れる十分なスペースがある専用スペースでQSTを実行します。聴覚や視覚の気晴らしを最小限に抑え、ホワイトノイズマシンを使用して周囲の音を遮断します。</li>
	<li>大きなヨガマットまたは同様のパッドを床に置いて、テスト中に犬が横臥位で快適になるようにします。</li>
	<li>犬が自由に探索して部屋に順応し、QSTオペレーターとハンドラーに慣れるために少なくとも10分間待ちます。部屋に新鮮な水を 自由に 提供し、時折食べ物の報酬を与えます。</li>
	<li>コイン投げでテストサイト(左側または右側)をランダム化します。足根中足関節と中足指節関節の中間にある第3中足骨と第4中足骨の背側表面間のスペースを中心に、約2 x 4 cmの毛皮のセクションを切り取ります。尺骨上の前腕関節のすぐ近くの外側前腕骨に約1 x 2 cmの毛皮のセクションをクリップします。</li>
</ol>2.電子フォンフレイ麻酔計
<ol><li>機器のセットアップ<ol><li>剛性のある0.9mmフォンフライチップをロードセルにそっと適用し、ロードセルがハンドピースにしっかりとねじ込まれていることを確認します。ハンドピースからのコードをM0チャネルを介して録音デバイスに接続します(図1A、B)。</li>
		<li>記録デバイスの電源を入れ、 MAX ボタンを押すと、犬が加えられた刺激に反応したときに達成される最大の力をデバイスが記録して表示します(図1C)。</li>
		<li>CLRボタンを押して機器をゼロにします。</li>
	</ol></li>
	<li>データ収集<ol><li>閾値を測定するために犬を横臥位に置きます。 注:犬は、左手足の閾値を測定するために右外側横臥位に配置されるか、右肢の閾値を測定するために左外側横臥に配置されます。口頭での合図が与えられたときに犬が喜んで横臥にならない場合、QSTオペレーターとハンドラーは手動で犬を横臥に横たえることができます。</li>
		<li>犬を横臥状態で比較的静止させるために、必要に応じて最小限から中程度の拘束を適用します。 注 : ハンドラーはこの手順を実行します。</li>
		<li>犬が落ち着いてリラックスし、テスト対象の手足が少なくとも70%伸展したら、刺激を適用します。テスト対象の手足を穏やかに手動でサポートして、手足を床から離さないようにし、犬が手足を引っ込めるのを妨げずに力を加えるための安定したバックアップを提供します。 注: QST 演算子がこの手順を実行します。</li>
		<li>フォンフレイの先端を、テスト対象の領域の皮膚に垂直に適用します。犬が皮膚のフォンフレイ先端の感覚から反射運動(例:.、足のけいれんまたは力が加えられる前の手足の撤退)を示す場合は、犬がフォンフレイチップを再適用する前に、犬が再び手足をリラックスさせます。皮膚が反射運動を引き起こさないときに、フォンフレイチップを適用して測定します。</li>
		<li>犬が手足を引っ込めたり、声を出したり、刺激を見るために向きを変えたり、刺激の意識的な知覚を示す他の動きや行動反応を示すまで、フォンフライの先端(~20 g /秒)で着実に増加する力を加えます。犬が手足を引っ込めたとき、または最大力に達したときに刺激を取り除きます。 注意: 1,000gを超えないようにしてください。</li>
		<li>録音デバイスに表示される最大荷重を記録します。 注:1,000 gの安全カットオフの力に達した場合、1,000 gが感覚しきい値として記録され、安全カットオフの前に応答がなかったことに注意してください。</li>
		<li>合計5回の試行で測定を繰り返し、各測定の間に1分(試行間間隔)を許容します。 CLR ボタンを押して、各ステップの間に機器をゼロにします。<ol><li>犬が比較的穏やかでリラックスしたままで、拘束がないか最小限である場合は、試験間隔の間、犬が横横臥状態のままでいることを許可します。それ以外の場合は、犬が座ったり、立ったり、QSTルームを動き回ったりして、快適さを維持できるようにします。その後の測定の前に、犬を横臥に戻します。</li>
		</ol></li>
		<li>0〜5の実現可能性スコアを記録して、データの収集の容易さを示します。 注:実現可能性スコアは次のとおりです:0 =問題なし、1 =軽度の難易度、2 =中程度の難易度、3 =重大な難易度、4 =非常に困難、5 =不可能。実現可能性スコアの割り当てに使用されるルーブリックを 表 1 に示します。</li>
		<li>鈍いプローブ圧力高度計で測定を開始する前に、犬に5分間の休憩を与えてください。</li>
	</ol></li>
</ol>3.鈍いプローブ圧力アルゴメーター
<ol><li>機器のセットアップ<ol><li>小型の鈍いプローブがデバイスにしっかりとねじ込まれていることを確認します(図2A)。</li>
		<li>録音デバイスの電源を入れ、画面にプロンプトが表示されたら MAX ボタンを押して続行します。ユニットが画面の上部にグラム(g)として表示されるまで 、UNIT ボタンを押します(図2B)。</li>
		<li>ZEROボタンを押して機器をゼロにします。</li>
	</ol></li>
	<li>データ収集<ol><li>閾値を測定するために犬を横臥位に置きます。 注:犬は、左手足の閾値を測定するために右外側横臥位に配置されるか、右肢の閾値を測定するために左外側横臥に配置されます。口頭での合図が与えられたときに犬が喜んで横臥にならない場合、QSTオペレーターとハンドラーは手動で犬を横臥に横たえることができます。</li>
		<li>犬を横臥状態で比較的静止させるために、必要に応じて最小限から中程度の拘束を適用します。 注 : ハンドラーはこの手順を実行します。</li>
		<li>犬が落ち着いてリラックスし、テスト対象の手足が約70%伸展したら、刺激を適用します。犬が手足を引き抜くのを妨げずに、手足を床から離さないように、テスト対象の手足を穏やかに手動でサポートし、力を加えるための安定した背中を提供します。 注: QST 演算子がこの手順を実行します。</li>
		<li>鈍いプローブをテスト対象の領域の皮膚に垂直に適用します(図2C)。犬が皮膚の鈍いプローブの感覚から反射運動(例:.、足のけいれんや力が加えられる前の手足の撤退)を示す場合は、犬が手足を再びリラックスさせてから、鈍いプローブを再適用します。鈍いプローブを皮膚に適用しても反射運動が起こらない場合は、測定してください。</li>
		<li>犬が手足を引っ込めたり、声を出したり、刺激を見るために向きを変えたり、刺激の意識的な知覚を示す他の動きや行動反応を示すまで、プローブで着実に増加する力(~20 g / s)を加えます。犬が手足を引っ込めたとき、または最大力に達したときに刺激を取り除きます。 注意: 2,500gを超えないようにしてください。</li>
		<li>録音デバイスに表示される最大荷重を記録します。 注:2,500 gの安全カットオフに達した場合、2,500 gが感覚しきい値として記録され、安全カットオフ前に応答がなかったことに注意してください。</li>
		<li>合計5回の試行で測定を繰り返し、各測定の間に1分(試行間間隔)を許容します。 ZERO ボタンを押して、各ステップの間に機器をゼロにします。<ol><li>犬が比較的落ち着いていて、拘束がないか最小限の拘束でリラックスしている場合は、試験間隔の間、犬が横臥状態のままでいることを許可します。それ以外の場合は、犬が座ったり、立ったり、QSTルームを動き回ったりして、快適さを維持できるようにします。その後の測定の前に、犬を横臥に戻します。</li>
		</ol></li>
		<li>0〜5の実現可能性スコアを記録して、データの収集の容易さを示します。 注:実現可能性スコアは次のとおりです:0 =問題なし、1 =軽度の難易度、2 =中程度の難易度、3 =重大な難易度、4 =非常に困難、5 =不可能。</li>
		<li>高温のサーマルプローブで測定を開始する前に、犬に5分間の休憩を与えてください。</li>
	</ol></li>
</ol>4.ホットサーマルプローブ
<ol><li>機器のセットアップ<ol><li>USBケーブル を介して 熱感覚アナライザーをコンピューターに接続し、16 x 16 mmのサーモードがアナライザーに接続されていることを確認します。アナライザーをオンにします。</li>
		<li>コンピューターで熱感覚アナライザーソフトウェアを開き、スタートアップメニューからTSA IIアナライザーを選択します。アナライザーのセルフテストのポップアップ警告で [OK ]をクリックします。セルフテスト中は、サーモードが被験者に接続されていないことを確認してください。</li>
		<li>[テスト] タブ (右上隅) の [患者の選択] プロンプト (画面の左側) で、リスト内の名前をダブルクリックして適切な患者を選択します。<ol><li>新しい患者を作成するには、[テスト] タブの右側にある [患者] タブをクリックします。左下隅にある新しい患者のアイコンをクリックし、患者の詳細(部門、患者の姓名、ID、性別、生年月日)を入力します。</li>
		</ol></li>
		<li>[TEST]タブの[プログラムの選択]プロンプトで、リスト内のプログラムをダブルクリックして適切なプログラムを選択します。<ol><li>新しいプログラムを作成するには、[患者]タブの右側にある[プログラム]タブをシングルクリックします。左下隅にある[新しいプログラム]アイコンをクリックして、プログラムの詳細を入力します。 メモ: このプロトコルの場合、プログラムの詳細は表 2 に記載されています。ボディサイトは、[テスト]タブの[ボディサイトの選択]プロンプトで選択する必要はありません。</li>
		</ol></li>
		<li>適切な患者とプログラムを選択したら、[テスト]タブの下にある [テストに移動 ]プロンプトをクリックします。 左下隅にある Pre-Test ボタンを1回クリックして、指定したプログラムに合わせてアナライザを校正します。</li>
		<li>事前テストが完了すると、[事前テスト]ボタンが[開始]ボタンに置き換わり、テストウィンドウが表示されます。 [開始]ボタンを押してテストを開始します(図3A)。</li>
		<li>サーモデケーブルをほどき、サーモデに簡単にアクセスできるようにします。</li>
	</ol></li>
	<li>データ収集<ol><li>熱潜時を測定するために、犬を横臥状態にします。 注:犬は、左手足の閾値を測定するために右外側横臥位に配置されるか、右肢の閾値を測定するために左外側横臥に配置されます。口頭での合図が与えられたときに犬が喜んで横臥にならない場合、QSTオペレーターとハンドラーは手動で犬を横臥に横たえることができます。</li>
		<li>犬を横臥状態で比較的静止させるために、必要に応じて最小限から中程度の拘束を適用します。 注 : ハンドラーはこの手順を実行します。</li>
		<li>犬が落ち着いてリラックスし、テスト対象の手足が約70%伸展したら、刺激を適用します。犬が手足を引っ込めるのを妨げずに、手足を床から離さないように、テスト対象の手足に穏やかな手動サポートを提供します。また、手足を支えた手でストップウォッチを持って操作します。 注: QST 演算子がこの手順を実行します。</li>
		<li>テスト対象の領域の皮膚にサーモードを適用します(図3B)。犬が皮膚のサーモデの感覚から反射運動(例:.、足のけいれんまたは熱が加えられる前の手足の撤退)を示す場合は、サーモードを再適用する前に、犬が再び手足をリラックスさせます。サーモドを皮膚に塗布しても反射運動が起こらない場合は、測定してください。</li>
		<li>[テスト]タブの左下隅にある[ 開始 ]ボタンをクリックして、 テスト を開始します。 注:QSTオペレーターはハンドラーにテストを開始するように合図し(頭をうなずくなど)、QSTオペレーターは同時にストップウォッチを開始します。</li>
		<li>犬が手足を引っ込めたり、声を出したり、向きを変えて刺激を見たり、刺激の意識的な知覚を示す他の動きや行動反応を示したり、ストップウォッチを同時に停止しながら最大遅延に達したりすると、サーモデを取り外します。 注: QST 演算子がこの手順を実行します。サーモデ塗布の20秒または最高サーモデ温度の49°Cを超えないようにしてください。</li>
		<li>撤退までの待ち時間を記録します。サーモデ塗布の20秒の安全カットオフに達した場合は、感覚潜時として20秒を記録し、安全カットオフの前に応答がなかったことに注意してください。</li>
		<li>合計5回の試行で測定を繰り返し、各測定の間に1分(試行間間隔)を許容します。テストの 終了 ボタンをクリックし、各測定の間に事前 テスト ボタンをクリックして、サーモデの加熱を停止し、サーモデを再校正して次のアプリケーションの準備をします。 注 : ハンドラーはこの手順を実行します。<ol><li>犬が比較的落ち着いていて、拘束がないか最小限の拘束でリラックスしている場合は、試験間隔の間、犬が横臥状態のままでいることを許可します。それ以外の場合は、犬が座ったり、立ったり、QSTルームを動き回ったりして、快適さを維持できるようにします。その後の測定の前に、犬を横臥に戻します。</li>
		</ol></li>
		<li>0〜5の実現可能性スコアを記録して、データの収集の容易さを示します。 注:実現可能性スコアは次のとおりです:0 =問題なし、1 =軽度の難易度、2 =中程度の難易度、3 =重大な難易度、4 =非常に困難、5 =不可能。</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Hunt, J., Knazovicky, D., Lascelles, B. D. X., Murrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+sensory+testing+in+dogs+with+painful+disease:+A+window+to+pain+mechanisms.">Quantitative sensory testing in dogs with painful disease: A window to pain mechanisms.</a> The Veterinary Journal. 243, 33-41 (2019).</li><li>Purves, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+and+subcutaneous+somatic+sensory+receptors.">Cutaneous and subcutaneous somatic sensory receptors.</a> Neuroscience, 2nd edition. , (2001).</li><li>Gorney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+and+thermal+sensory+testing+in+normal+chondrodystrophic+dogs+and+dogs+with+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+herniations.">Mechanical and thermal sensory testing in normal chondrodystrophic dogs and dogs with spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc herniations.</a> Journal of Veterinary Internal Medicine. 30 (2), 627-635 (2016).</li><li>Song, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Frey+anesthesiometry+to+assess+sensory+impairment+after+acute+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+extrusion+in+dogs.">von Frey anesthesiometry to assess sensory impairment after acute spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc extrusion in dogs.</a> The Veterinary Journal. 209, 144-149 (2016).</li><li>Moore, S. A., Hettlich, B. F., Waln, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+an+electronic+von+Frey+device+for+evaluation+of+sensory+threshold+in+neurologically+normal+dogs+and+those+with+acute+spinal+cord+injury.">The use of an electronic von Frey device for evaluation of sensory threshold in neurologically normal dogs and those with acute spinal cord injury.</a> The Veterinary Journal. 197 (2), 216-219 (2013).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregabalin+for+the+treatment+of+syringomyelia-associated+neuropathic+pain+in+dogs:+A+randomized,+placebo-controlled,+double-masked+clinical+trial.">Pregabalin for the treatment of syringomyelia-associated neuropathic pain in dogs: A randomized, placebo-controlled, double-masked clinical trial.</a> The Veterinary Journal. 250, 55-62 (2019).</li><li>Brydges, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+assessments+of+increased+sensory+sensitivity+in+dogs+with+cranial+cruciate+ligament+rupture.">Clinical assessments of increased sensory sensitivity in dogs with cranial cruciate ligament rupture.</a> The Veterinary Journal. 193 (2), 546-550 (2012).</li><li>Williams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+thermal+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs+and+dogs+with+hind+limb+osteoarthritis-associated+pain.">Feasibility and repeatability of thermal quantitative sensory testing in normal dogs and dogs with hind limb osteoarthritis-associated pain.</a> The Veterinary Journal. 199, 63-67 (2014).</li><li>Freire, M., Knazovicky, D., Case, B., Thomson, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+client-owned+dogs+with+chronic+naturally+occurring+pain+and+normal+dogs.">Comparison of thermal and mechanical quantitative sensory testing in client-owned dogs with chronic naturally occurring pain and normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 210, 95-97 (2016).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+somatosensory+sensitivity+in+naturally+occurring+canine+model+of+osteoarthritis.">Widespread somatosensory sensitivity in naturally occurring canine model of osteoarthritis.</a> Pain. 157 (6), 1325-1332 (2016).</li><li>Lascelles, B. D. X., Cripps, P. J., Jones, A., Waterman, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+central+hypersensitivity+and+pain:+The+pre-emptive+value+of+pethidine+for+ovariohysterectomy.">Post-operative central hypersensitivity and pain: The pre-emptive value of pethidine for ovariohysterectomy.</a> Pain. 73 (3), 461-471 (1997).</li><li>Slingsby, L. S., Waterman-Pearson, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+post-operative+analgesic+effects+of+ketamine+after+canine+ovariohysterectomy+-+a+comparison+between+pre-+or+post-operative+administration.">The post-operative analgesic effects of ketamine after canine ovariohysterectomy - a comparison between pre- or post-operative administration.</a> Research in Veterinary Medicine. 69 (2), 147-152 (2000).</li><li>Sammarco, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+analgesia+for+stifle+surgery:+A+comparison+of+intra-articular+bupivacaine,+morphine,+or+saline.">Post-operative analgesia for stifle surgery: A comparison of intra-articular bupivacaine, morphine, or saline.</a> Veterinary Surgery. 25 (1), 59-69 (1996).</li><li>Tomas, A., Marcellin-Little, D. J., Roe, S. C., Motsinger-Reif, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+mechanical+thresholds+and+limb+use+in+dogs+with+coxofemoral+joint+OA-associated+pain+and+the+modulating+effects+of+pain+alleviation+from+total+hip+replacement+on+mechanical+thresholds.">Relationship between mechanical thresholds and limb use in dogs with coxofemoral joint OA-associated pain and the modulating effects of pain alleviation from total hip replacement on mechanical thresholds.</a> Veterinary Surgery. 43 (5), 542-548 (2014).</li><li>Briley, J. D., Williams, M. D., Freire, M., Griffith, E. H., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+cold+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs.">Feasibility and repeatability of cold and mechanical quantitative sensory testing in normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 199 (2), 246-250 (2014).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicate+effects+and+test-retest+reliability+of+quantitative+sensory+threshold+testing+in+dogs+with+and+without+chronic+pain.">Replicate effects and test-retest reliability of quantitative sensory threshold testing in dogs with and without chronic pain.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 615-624 (2017).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+initial+validation+of+a+sensory+threshold+examination+protocol+(STEP)+for+phenotyping+canine+pain+syndromes.">Development and initial validation of a sensory threshold examination protocol (STEP) for phenotyping canine pain syndromes.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 600-614 (2017).</li><li>Backonja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+quantitative+sensory+testing+in+neurological+and+pain+disorders:+NeuPSIG+consensus.">Value of quantitative sensory testing in neurological and pain disorders: NeuPSIG consensus.</a> Pain. 154 (9), 1807-1819 (2013).</li><li>Wylde, V., Palmer, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatosensory+abnormalities+in+knee+OA.">Somatosensory abnormalities in knee OA.</a> Rheumatology. 51 (3), 535-543 (2012).</li></ol>

著者は開示する利益相反を持っていません。

犬の感覚閾値を反映した正確なデータを取得するには、犬が落ち着いていて、リラックスしていて、各測定で可能な限り適切に配置されていることが重要です。以前の研究では、テスト環境の内外の要因からの拘束または注意散漫からの興奮がQST刺激に対する犬の反応に影響を与えることが指摘されました16。犬が横臥や拘束から興奮したり、気が散ったりした場合は、測?...

定量的官能検査(QST)は、外部から加えられた刺激によって引き起こされる反応を評価します。ヒトおよび動物における体性感覚系の機能を評価するために使用されます1。点状圧力または深圧の形の機械的刺激が、傾斜刺激として適用される。感覚閾値は、心理物理学的反応を呼び起こす力として決定されます1。高温または低温の熱刺激は、ランプ刺激または固定強度刺激として使用できます。感覚閾値は、応答がある温度または刺激に応答する潜時として決定される。点状圧力感覚閾値は、電子フォンフレイ麻酔計またはフォンフレイヘアフィラメントを使用して測定され、深圧はハンドヘルド圧力アルゴメーターを使用して測定され、熱感覚閾値は、さまざまな接触サーモデシステムを使用して決定されます。
QSTは、末梢および中枢の両方の感覚経路の機能に関する情報を提供し、さまざまな疾患プロセス、特に慢性疼痛を引き起こすプロセスにおけるこれらの感覚経路の変化(藻可塑性)を評価するために使用できます1。マイスナー小体は点状圧を検出し、刺激が有害な強度のときに非侵害レベルのAβ求心性線維とAδ求心性線維によって感覚が伝達されます1,2。深圧はパチニ小体によって検出され、C求心性線維によって伝達され、有害な熱はルフィニ小体によって検出され、AδおよびC求心性線維によって伝達され、有害な寒さはクラウス小体によって検出され、C求心性線維によって伝達される1,2。QSTは、これらの受容体および経路の阻害(感度低下、感覚低下)および促進(感度上昇、知覚過敏)の両方を検出するために使用することができる。犬では、QSTは、急性脊髄損傷3,4,5、キアリ様奇形および脊髄空洞症6、頭蓋十字靭帯断裂5,7、および変形性関節症(OA)8,9,10に続発する感覚閾値の変化を評価するために使用されています。さらに、いくつかの研究では、QSTを使用して、特定の鎮痛薬6、11、12、13および外科的処置14によって提供される痛みの緩和を評価しています。これらの研究は、手術後の末梢および中枢感作の証拠や、頭蓋十字靭帯断裂やOAなどの慢性疼痛状態を引き起こす疾患など、犬の痛みの感覚のメカニズムに関する重要な洞察を提供しました。この情報は、犬の痛みの検出と治療を改善するのに役立ちます。
犬における機械的および高温熱QSTの検証研究では、正常な犬およびOA8,9,15,16による慢性疼痛のある犬において、QST結果の良好な実現可能性、再現性、および信頼性が長期にわたって示されています。しかし、いくつかの研究では、冷熱の再現性と信頼性が低く、時にはフォンフレイQST 1,15,17であることがわかっています。これらの研究では、異なる機器と方法論を使用していましたが、機械的および高温熱QSTが犬の感覚閾値を測定する正確で半定量的な方法であるという証拠を提供しました。ただし、測定値の設定を含む正確な細部への注意は、犬のQSTを最適化するために重要であり、QSTの標準化されたプロトコルが必要です。Sanchis-Moraらは、機械的および高温および低温の熱QSTの官能閾値検査プロトコル(STEP)を詳述しましたが、犬が低温熱QSTまたは研究で使用された最高のグラム力フォンフライフィラメントに反応しないという問題に直面しました17。次のプロトコルは、犬の機械的および高温熱QSTの標準的な方法を提供します。このプロトコルは、正常な犬または体性感覚系に影響を与えるさまざまな疾患プロセスを持つ犬の感覚閾値を評価できます。標準化されたプロトコルの開発により、獣医学におけるQSTの有用性を向上させるために、研究およびデータのメタアナリシス間で結果を比較できる可能性があります。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Electronic von Frey anesthesiometer</td>
			<td>IITC Life Science Inc.</td>
			<td>Item # 23931</td>
			<td>Custom made with a 1000g max force load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medoc Main Station software</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>(supplied with TSA-II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMALGO: SMall Animal ALGOmeter</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>Model VETALGO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA-II NeuroSensory Analyzer</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>DC 00072 TSA-II</td>
			<td>No longer manufactured - new model is TSA-2 with same probes and same function</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of sensory thresholds in dogs using mechanical and hot thermal quantitative sensory testing

定量的官能検査(QST)は、加えられた機械的および熱的刺激に対する反応を評価することにより、犬の体性感覚系の機能を評価するために使用されます。QSTは、正常な犬の感覚閾値を決定し、変形性関節症、脊髄損傷、頭蓋十字靭帯断裂などのさまざまな病状によって引き起こされる末梢および中枢感覚経路の変化を評価するために使用されます。機械的感覚閾値は、電子フォンフレイ麻酔計と圧力アルゴメーターによって測定されます。それらは、犬が意識的な刺激知覚を示す反応を示す力として決定されます。高温感覚閾値は、接触サーモデによって加えられる固定または傾斜した温度刺激に応答する待ち時間です。
QSTを実行するための一貫したプロトコルに従い、テスト環境、手順、および個々の被験者の詳細に注意を払うことは、犬の正確なQST結果を得るために重要です。イヌにおけるQSTデータの標準化された収集のためのプロトコルは詳細に説明されていない。QSTは、犬、QSTオペレーター、およびハンドラーにとって快適な、静かで気を散らすことのない環境で実行する必要があります。犬が落ち着いていて、リラックスしていて、各測定に適切な位置にあることを確認すると、刺激に対する信頼性の高い一貫した反応が得られ、テストプロセスがより管理しやすくなります。QSTオペレーターとハンドラーは、テストのエンドポイントを決定し、ストレスを軽減し、テストプロセス中の安全を維持するために、犬の取り扱いと潜在的に痛みを伴う刺激に対する犬の行動反応の解釈に精通し、快適である必要があります。

機械的および熱的QSTは、正常で健康な犬、OAなどの慢性的に痛みを伴う状態の犬、急性脊髄損傷の犬など、さまざまな臨床条件下で研究用犬とクライアント所有犬の両方の感覚閾値を検出し、術後の痛みと鎮痛薬の有効性を評価するために実施されています。犬のQSTに関する研究は増え続けていますが、どの検査モダリティについても通常の値の範囲は確立されていません。しかし、いくつ?...

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Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

この作業では、犬の体性感覚系を評価するための機械的および高温熱定量的官能試験の標準プロトコルについて説明しています。感覚閾値は、電子フォンフレイ麻酔計、圧力高度計、およびホットコンタクトサーモデを使用して測定されます。

機械的および高温熱定量的官能試験を用いた犬の感覚閾値の評価

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

2.1K ビュー.  North Carolina State University. この作業では、犬の体性感覚系を評価するための機械的および高温熱定量的官能試験の標準プロトコルについて説明しています。感覚閾値は、電子フォンフレイ麻酔計、圧力高度計、およびホットコンタクトサーモデを使用して測定されます。

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Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and learning and memory. There are four known families of PKC isoforms in vertebrates: classical PKCs (&alpha;, &beta;I, &beta;II and &gamma;), novel type I PKCs (&#949; and &eta;), novel type II PKCs (&delta; and &theta;), and atypical PKCs (&zeta; and &iota;). The classical PKCs are activated by Ca2+ and diacylclycerol (DAG), while the novel PKCs are activated by DAG, but are Ca2+-independent. The atypical PKCs are activated by neither Ca2+ nor DAG. In Aplysia californica, our model system to study memory formation, there are three nervous system specific PKC isoforms one from each major class, namely the conventional PKC Apl I, the novel type I PKC Apl II and the atypical PKC Apl III. PKCs are lipid-activated kinases and thus activation of classical and novel PKCs in response to extracellular signals has been frequently correlated with PKC translocation from the cytoplasm to the plasma membrane. Therefore, visualizing PKC translocation in real time in live cells has become an invaluable tool for elucidating the signal transduction pathways that lead to PKC activation. For instance, this technique has allowed for us to establish that different isoforms of PKC translocate under different conditions to mediate distinct types of synaptic plasticity and that serotonin (5HT) activation of PKC Apl II requires production of both DAG and phosphatidic acid (PA) for translocation 1-2. Importantly, the ability to visualize the same neuron repeatedly has allowed us, for example, to measure desensitization of the PKC response in exquisite detail 3. In this video, we demonstrate each step of preparing Sf9 cell cultures, cultures of Aplysia sensory neurons have been described in another video article 4, expressing fluorescently tagged PKCs in Sf9 cells and in Aplysia sensory neurons and live-imaging of PKC translocation in response to different activators using laser-scanning microscopy.

In this video, we demonstrate visualization of PKC translocation in living cells using fluorescently tagged PKCs.

Sf9細胞でとアメフラシ感覚ニューロンにおけるPKC転座のライブイメージング

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

神経科学

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the olfactory bulb (OB). The molecular mechanisms of OSN axon growth and targeting are not well understood. Manipulating gene expression and subsequent 
visualizing of single OSN axons and their terminal arbor morphology have thus far been challenging. To study gene function at the single cell level within a specified 
time frame, we developed a lentiviral based technique to manipulate gene expression in OSNs in vivo. Lentiviral particles are delivered to OSNs by microinjection 
into the olfactory epithelium (OE). Expression cassettes are then permanently integrated into the genome of transduced OSNs. Green fluorescent protein expression 
identifies infected OSNs and outlines their entire morphology, including the axon terminal arbor. Due to the short turnaround time between microinjection and 
reporter detection, gene function studies can be focused within a very narrow period of development. With this method, we have detected GFP expression within as 
few as three days and as long as three months following injection. We have achieved both over-expression and shRNA mediated knock-down by lentiviral microinjection. 
This method provides detailed morphologies of OSN cell bodies and axons at the single cell level in vivo, and thus allows characterization of candidate gene function 
during olfactory development.

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

We present a lentiviral technique for genetic manipulation and visualization of single olfactory sensory neuron axon and its terminal arborization in vivo.

嗅神経細胞のレンチウイルスを介した遺伝子操作と可視化 in vivoで</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic development and axonal wiring. Recently the dendritic arborization (DA) sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system (PNS) have become powerful genetic models in which to elucidate both general and class-specific mechanisms of neuron differentiation.
There are four main DA neuron classes (I-IV)1. They are named in order of increasing dendrite arbor complexity, and have class-specific differences in the genetic control of their differentiation2-10. The DA sensory system is a practical model to investigate the molecular mechanisms behind the control of dendritic morphology11-13 because: 1) it can take advantage of the powerful genetic tools available in the fruit fly, 2) the DA neuron dendrite arbor spreads out in only 2 dimensions beneath an optically clear larval cuticle making it easy to visualize with high resolution in vivo, 3) the class-specific diversity in dendritic morphology facilitates a comparative analysis to find key elements controlling the formation of simple vs. highly branched dendritic trees, and 4) dendritic arbor stereotypical shapes of different DA neurons facilitate morphometric statistical analyses.
DA neuron activity modifies the output of a larval locomotion central pattern generator14-16. The different DA neuron classes have distinct sensory modalities, and their activation elicits different behavioral responses14,16-20. Furthermore different classes send axonal projections stereotypically into the Drosophila larval central nervous system in the ventral nerve cord (VNC)21. These projections terminate with topographic representations of both DA neuron sensory modality and the position in the body wall of the dendritic field7,22,23. Hence examination of DA axonal projections can be used to elucidate mechanisms underlying topographic mapping7,22,23, as well as the wiring of a simple circuit modulating larval locomotion14-17.
We present here a practical guide to generate and analyze genetic mosaics24 marking DA neurons via MARCM (Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker)1,10,25 and Flp-out22,26,27 techniques (summarized in Fig. 1).

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

The dendritic arborization sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system are useful models to elucidate both general and neuron class-specific mechanisms of neuron differentiation. We present a practical guide to generate and analyze dendritic arborization neuron genetic mosaics.

の形態素解析ショウジョウバエ</em遺伝モザイクを使用>幼虫末梢感覚ニューロンの樹状突起と軸索

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

における嗅覚受容ニューロンのホールマウント免疫標識<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;アンテナ

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

熱的·機械的侵害受容性モダリティを用いて、マウスにおけるモルヒネ誘発痛覚過敏および鎮痛耐性の評価

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is required to shape functional neuronal circuits. The protocol described here explains how to use cell culture inserts bearing a porous membrane (filter) to obtain large amounts of pure axonal preparations suitable for examination by conventional biochemical or immunocytochemical techniques. The functionality of these filter inserts will be demonstrated with models of developmental pruning and Wallerian degeneration, using explants of embryonic dorsal root ganglion. Axonal integrity and function is compromised in a wide variety of neurodegenerative pathologies. Indeed, it is now clear that axonal dysfunction appears much earlier in the course of the disease than neuronal soma loss in several neurodegenerative diseases, indicating that axonal-specific processes are primarily targeted in these disorders. By obtaining pure axonal samples for analysis by molecular and biochemical techniques, this technique has the potential to shed new light into mechanisms regulating the physiology and pathophysiology of axons. This in turn will have an impact in our understanding of the processes that drive degenerative diseases of the nervous system.

This article describes a neuronal culture system that can be used to obtain large quantities of pure axonal samples for biochemical and immunocytochemical analyses. This technique will allow an improved understanding of normal axonal physiology and signaling pathways leading to neurodegeneration.

多孔質フィルタを使用した生化学分析のための感覚ニューロンからの軸索の産生および単離

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

のコンピュータ追跡することによってアッセイ嗅覚行動<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt; 4象限オルファクトメーターで

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Dynamic Quantitative Sensory Testing to Characterize Central Pain Processing

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain processing is present in many chronic pain conditions and can influence responses to specific therapies. Thus, the ability to precisely describe the state of central pain processing has profound clinical significance in both prognosis and prediction. Because it is not practical to record neuronal firings directly in the human spinal cord, surrogate behavior tests become an important tool to assess the state of central pain processing. Dynamic QST is one such test, and can probe both the ascending facilitation and descending modulation of incoming nociceptive signals via TS and CPM, respectively. Due to the large between-individual variability in the sensitivity to noxious signals, standardized TS and CPM tests may not yield any meaningful data in up to 50% of the population due to floor or ceiling effects. We present methodologies to individualize TS and CPM so we can capture these measures in a broader range of individuals than previously possible. We have used these methods successfully in several studies at the lab, and data from one ongoing study will be presented to demonstrate feasibility and potential applications of the methods.

By assessing pain in response to repetitive or different types of standardized stimuli, dynamic quantitative sensory testing (QST) can reveal changes in the central processing of pain. We present methods to optimize and individualize two dynamic QST measures: temporal summation (TS) and conditioned pain modulation (CPM).

ダイナミック定量的感覚検査は、中枢性疼痛処理を特徴づけるために、

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American bullfrog, has become a mainstay of auditory and vestibular research. Studies of this organ have revealed how sensory cells hair can actively detect signals from the environment. Because of these studies, we now better understand the mechanical gating and localization of a hair cell&#39;s transduction channels, calcium&#39;s role in mechanical adaptation, and the identity of hair cell currents. This highly accessible organ continues to provide insight into the workings of hair cells. Here we describe the preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies on its hair cells. We include the complete dissection procedure and provide specific protocols for the preparation of the sacculus in specific contexts. We additionally include representative results using this preparation, including the calculation of a hair bundle&#39;s instantaneous force-displacement relation and measurement of a bundle&#39;s spontaneous oscillation.

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

The American bullfrog&#39;s (Rana catesbeiana) sacculus permits direct examination of hair-cell physiology. Here the dissection and preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies is described. We show representative experiments from these hair cells, including the calculation of a bundle&#39;s force-displacement relation and measurement of its unforced motion.