저자는 QST를 위해 개를 다룬 Andrea Thomson, Jon Hash, Hope Woods 및 Autumn Anthony, 개를 선별하는 데 도움을 준 Masataka Enomoto, 고온 열 QST에 대한 프로토콜을 수립하는 데 기여한 Sam Chiu에게 감사드립니다.

모든 절차는 노스 캐롤라이나 주립 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다.
1. 방 설정 및 연구 과목 적응
<ol><li>QST 운영자, 핸들러 및 모든 크기의 개가 편안하게 이동할 수 있는 충분한 공간이 있는 전용 공간에서 QST를 수행하십시오. 잠재적인 청각 및 시각적 산만함을 최소화하고 백색 소음 기계를 사용하여 주변 소리를 차단합니다.</li>
	<li>큰 요가 매트 또는 이와 유사한 패딩을 바닥에 놓아 개가 테스트하는 동안 옆으로 누운 자세에서 편안하도록 합니다.</li>
	<li>개가 최소 10분 동안 자유롭게 방을 탐색하고 적응할 수 있도록 하고 QST 운영자 및 핸들러와 편안하게 지낼 수 있도록 하십시오. 방에 신선한 물을 제공하고 가끔 음식 보상을 제공하십시오.</li>
	<li>동전 던지기로 테스트 사이트(왼쪽 또는 오른쪽)를 무작위로 지정합니다. 족근중족골 관절과 중족지절관절 사이의 중간에 있는 세 번째와 네 번째 중족골의 등쪽 표면 사이의 공간을 중심으로 약 2 x 4cm 크기의 털 부분을 자릅니다. 척골 위의 상완 전수골 관절 바로 근위부에 있는 외측 전완에 약 1 x 2cm의 털 부분을 자릅니다.</li>
</ol>2. 전자 von Frey 마취계
<ol><li>기기 설정<ol><li>단단한 0.9mm von Frey 팁을 로드셀에 부드럽게 적용하고 로드셀이 핸드피스에 단단히 고정되었는지 확인합니다. M0 채널을 통해 핸드피스의 코드를 녹음 장치에 연결합니다(그림 1A,B).</li>
		<li>녹음 장치를 켜고 MAX 버튼을 눌러 개가 적용된 자극에 반응할 때 달성되는 최대 힘을 장치가 기록하고 표시하도록 합니다(그림 1C).</li>
		<li>CLR 버튼을 눌러 계측기를 영점 조정하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>데이터 수집<ol><li>문턱을 측정하기 위해 개를 옆으로 누운 상태로 놓으십시오. 알림: 개는 왼쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 오른쪽 측면 누운 자세로 배치되거나 오른쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 왼쪽 측면 누운 자세로 배치됩니다. 구두 신호가 주어졌을 때 개가 기꺼이 옆으로 누운 자세로 눕지 않으면 QST 운영자와 핸들러가 수동으로 개를 옆으로 누운 상태로 눕힐 수 있습니다.</li>
		<li>개를 옆으로 누운 상태로 비교적 고요하게 유지하기 위해 필요에 따라 최소한에서 중간 정도의 구속을 가하십시오. 참고: 처리기가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>개가 차분하고 편안해지면 자극을 가하고 테스트 중인 팔다리가 최소 70% 확장됩니다. 테스트 중인 팔다리를 부드럽게 수동으로 지지하여 팔다리가 바닥에서 떨어지지 않도록 하고 개가 팔다리를 빼는 것을 방지하지 않으면서 힘을 가할 수 있도록 안정적인 지지대를 제공합니다. 참고: QST 운영자가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>von Frey 팁을 테스트 부위의 피부에 수직으로 바릅니다. 개가 피부에 대한 폰 프레이 팁의 감각으로 인해 반사 움직임(예: 힘이 가해지기 전에 발이 경련을 일으키거나 팔다리가 빠지는 경우)을 보이는 경우 폰 프레이 팁을 다시 적용하기 전에 개가 사지를 다시 이완하도록 합니다. 피부가 반사 운동을 일으키지 않을 때 von Frey 팁을 적용하여 측정하십시오.</li>
		<li>개가 팔다리를 빼거나, 발성을 내거나, 자극을 보기 위해 몸을 돌리거나, 자극에 대한 의식적 인식을 나타내는 다른 움직임이나 행동 반응을 보일 때까지 von Frey 팁(~20g/sec)으로 꾸준히 증가하는 힘을 가합니다. 개가 팔다리를 빼거나 최대 힘에 도달하면 자극을 제거하십시오. 알림: 1,000g을 초과하지 마십시오.</li>
		<li>기록 장치에 표시되는 최대 힘을 기록합니다. 참고: 1,000g의 힘의 안전 컷오프에 도달하면 1,000g이 감각 역치로 기록되며 안전 컷오프 전에 반응이 없었음을 알 수 있습니다.</li>
		<li>총 5번의 시도에 대해 측정을 반복하고 각 측정 사이에 1분의 여유를 둡니다(시행 간 간격). CLR 버튼을 눌러 각 단계 사이에 계측기를 영점 조정합니다.<ol><li>개가 구속 없이 또는 최소한의 구속 없이 비교적 침착하고 이완된 상태를 유지하는 경우 시험 간 간격 동안 개가 옆으로 누운 상태를 유지하도록 허용하십시오. 그렇지 않으면 개가 편안함을 유지하기 위해 QST 룸에 앉거나 서거나 움직일 수 있도록 하십시오. 후속 측정 전에 개를 옆으로 누운 상태로 다시 놓습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>데이터 수집의 용이성을 나타내기 위해 0-5의 타당성 점수를 기록합니다. 참고: 타당성 점수는 다음과 같습니다: 0 = 문제 없음, 1 = 경미한 난이도, 2 = 보통 난이도, 3 = 상당한 난이도, 4 = 매우 어려움, 5 = 불가능. 타당성 점수를 할당하는 데 사용되는 루브릭은 표 1에 나와 있습니다.</li>
		<li>뭉툭한 프로브 압력 알고리즘으로 측정을 시작하기 전에 개에게 5분 휴식을 주십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 무딘 프로브 압력 알고리즘
<ol><li>기기 설정<ol><li>작고 뭉툭한 프로브가 장치에 단단히 고정되어 있는지 확인합니다(그림 2A).</li>
		<li>녹음 장치를 켜고 화면에 메시지가 표시되면 MAX 버튼을 눌러 계속합니다. 단위가 화면 상단에 그램(g)으로 표시될 때까지 UNIT 버튼을 누릅니다(그림 2B).</li>
		<li>ZERO 버튼을 눌러 기기를 영점 조정하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>데이터 수집<ol><li>문턱을 측정하기 위해 개를 옆으로 누운 상태로 놓으십시오. 알림: 개는 왼쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 오른쪽 측면 누운 자세로 배치되거나 오른쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 왼쪽 측면 누운 자세로 배치됩니다. 구두 신호가 주어졌을 때 개가 기꺼이 옆으로 누운 자세로 눕지 않으면 QST 운영자와 핸들러가 수동으로 개를 옆으로 누운 상태로 눕힐 수 있습니다.</li>
		<li>개를 옆으로 누운 상태로 비교적 고요하게 유지하기 위해 필요에 따라 최소한에서 중간 정도의 구속을 가하십시오. 참고: 처리기가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>개가 차분하고 이완되고 테스트 중인 팔다리가 약 70% 확장되면 자극을 가하십시오. 테스트 중인 팔다리를 부드럽게 수동으로 지지하여 팔다리가 바닥에서 떨어지지 않도록 하고 개가 팔다리를 빼는 것을 방지하지 않으면서 힘을 가할 수 있는 안정적인 지지를 제공합니다. 참고: QST 운영자가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>뭉툭한 프로브를 테스트 중인 영역의 피부에 수직으로 적용합니다(그림 2C). 개가 피부에 무딘 탐침의 감각으로 인해 반사 움직임(예: 힘이 가해지기 전에 발이 경련을 일으키거나 팔다리가 빠지는 경우)을 보이는 경우 뭉툭한 탐침을 다시 바르기 전에 개가 사지를 다시 이완하도록 합니다. 뭉툭한 프로브를 피부에 도포해도 반사 운동이 일어나지 않을 때 측정하십시오.</li>
		<li>개가 팔다리를 빼거나, 발성을 내거나, 자극을 보기 위해 몸을 돌리거나, 자극에 대한 의식적 인식을 나타내는 다른 움직임이나 행동 반응을 보일 때까지 프로브로 꾸준히 증가하는 힘(~20g/s)을 적용합니다. 개가 팔다리를 빼거나 최대 힘에 도달하면 자극을 제거하십시오. 알림: 2,500g을 초과하지 마십시오.</li>
		<li>기록 장치에 표시되는 최대 힘을 기록합니다. 참고: 2,500g의 힘의 안전 컷오프에 도달하면 2,500g이 감각 역치로 기록되며 안전 컷오프 전에 반응이 없었음을 알 수 있습니다.</li>
		<li>총 5번의 시도에 대해 측정을 반복하고 각 측정 사이에 1분을 허용합니다(시행 간 간격). ZERO 버튼을 눌러 각 단계 사이에 기기를 영점 조정하십시오.<ol><li>개가 구속 없이 또는 최소한의 구속 없이 비교적 침착하고 편안한 상태를 유지하는 경우 시험 간 간격 동안 개가 옆으로 누운 상태를 유지하도록 허용하십시오. 그렇지 않으면 개가 편안함을 유지하기 위해 QST 룸에 앉거나 서거나 움직일 수 있도록 하십시오. 후속 측정 전에 개를 옆으로 누운 상태로 다시 놓습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>데이터 수집의 용이성을 나타내기 위해 0-5의 타당성 점수를 기록합니다. 참고: 타당성 점수는 다음과 같습니다: 0 = 문제 없음, 1 = 경미한 난이도, 2 = 보통 난이도, 3 = 상당한 난이도, 4 = 매우 어려움, 5 = 불가능.</li>
		<li>뜨거운 열 탐침으로 측정을 시작하기 전에 개에게 5분 휴식을 주십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 뜨거운 열 프로브
<ol><li>기기 설정<ol><li>USB 케이블을 통해 체온 분석기를 컴퓨터에 연결하고 16 x 16mm 열전사가 분석기에 연결되어 있는지 확인합니다. 분석기를 켭니다.</li>
		<li>컴퓨터에서 체온 분석기 소프트웨어를 열고 시작 메뉴에서 TSA II 분석기를 선택합니다. 분석기 자체 테스트에 대한 팝업 경고에서 확인을 클릭합니다. 자체 테스트 중에 열전사가 연구 대상에 연결되어 있지 않은지 확인하십시오.</li>
		<li>TEST( 테스트 ) 탭(오른쪽 상단)의 Select Patient(환자 선택 ) 프롬프트(화면 왼쪽)에서 목록의 이름을 두 번 클릭하여 적절한 환자를 선택합니다.<ol><li>새 환자를 만들려면 테스트 탭 오른쪽에 있는 환자 탭을 클릭합니다. 왼쪽 하단 모서리에 있는 새 환자 아이콘을 클릭하고 환자 세부 정보(부서, 환자 이름과 성, ID, 성별 및 생년월일)를 입력합니다.</li>
		</ol></li>
		<li>테스트 탭의 프로그램 선택 프롬프트 아래 목록에서 프로그램을 두 번 클릭하여 적절한 프로그램을 선택합니다.<ol><li>새 프로그램을 만들려면 환자 탭 오른쪽에 있는 프로그램 탭을 한 번 클릭합니다. 왼쪽 하단 모서리에 있는 새 프로그램 아이콘을 클릭하고 프로그램 세부 정보를 입력합니다. 참고: 이 프로토콜의 경우 프로그램 세부 정보는 표 2에 나와 있습니다. 테스트(TEST) 탭의 바디 사이트 선택(Select Body Site) 프롬프트에서 본체 사이트를 선택할 필요가 없습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>적절한 환자와 프로그램이 선택되면 테스트 탭에서 테스트로 이동 프롬프트를 클릭합니다. 왼쪽 하단 모서리에 있는 Pre-Test 버튼을 한 번 클릭하여 지정된 프로그램에 따라 분석기를 교정합니다.</li>
		<li>사전 테스트가 완료되면 테스트 전 단추가 시작 단추로 바뀌고 테스트 창이 표시됩니다. 시작 단추를 눌러 테스트를 시작합니다(그림 3A).</li>
		<li>열전사 케이블을 풀고 열전사에 쉽게 접근할 수 있는지 확인하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>데이터 수집<ol><li>열 잠복기를 측정하기 위해 개를 옆으로 누운 상태로 두십시오. 알림: 개는 왼쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 오른쪽 측면 누운 자세로 배치되거나 오른쪽 팔다리의 역치를 측정하기 위해 왼쪽 측면 누운 자세로 배치됩니다. 구두 신호가 주어졌을 때 개가 기꺼이 옆으로 누운 자세로 눕지 않으면 QST 운영자와 핸들러가 수동으로 개를 옆으로 누운 상태로 눕힐 수 있습니다.</li>
		<li>개를 옆으로 누운 상태로 비교적 고요하게 유지하기 위해 필요에 따라 최소한에서 중간 정도의 구속을 가하십시오. 참고: 처리기가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>개가 차분하고 편안해지면 자극을 가하고 테스트 중인 팔다리가 약 70% 확장됩니다. 개가 사지를 빼는 것을 방지하지 않으면서 사지가 바닥에서 떨어지지 않도록 테스트 중인 사지를 부드럽게 수동으로 지지하십시오. 또한 팔다리를 지지하는 손으로 스톱워치를 잡고 조작하십시오. 참고: QST 운영자가 이 단계를 수행합니다.</li>
		<li>테스트 중인 부위의 피부에 보온병을 바릅니다(그림 3B). 개가 피부에 보온병의 감각으로 인해 반사 움직임(예: 열이 가해지기 전에 발이 경련을 일으키거나 팔다리가 빠지는 경우)을 보이는 경우 보온병을 다시 바르기 전에 개가 사지를 다시 이완하도록 합니다. 피부에 thermode를 적용해도 반사 운동이 발생하지 않을 때 측정하십시오.</li>
		<li>테스트 탭의 왼쪽 하단 모서리에 있는 시작 버튼을 클릭하여 테스트를 시작합니다. 참고: QST 오퍼레이터는 핸들러에게 테스트를 시작하라는 신호를 보내고(예: 고개를 끄덕임) QST 오퍼레이터는 동시에 스톱워치를 시작합니다.</li>
		<li>개가 팔다리를 빼거나, 발성을 내거나, 자극을 보기 위해 몸을 돌리거나, 자극에 대한 의식적 인식을 나타내는 다른 움직임이나 행동 반응을 나타내거나 스톱워치를 중지하는 동시에 최대 대기 시간에 도달할 때 열병을 제거하십시오. 참고: QST 운영자가 이 단계를 수행합니다. 20초의 열화상 도포 또는 49°C의 최대 열전 온도를 초과하지 마십시오.</li>
		<li>인출 대기 시간을 기록합니다. 열화상 도포 20초의 안전 컷오프에 도달하면 20초를 감각 대기 시간으로 기록하고 안전 차단 전에 응답이 없음을 확인합니다.</li>
		<li>총 5번의 시도에 대해 측정을 반복하고 각 측정 사이에 1분을 허용합니다(시행 간 간격). End Test 버튼을 클릭한 다음 각 측정 사이의 Pre-Test 버튼을 클릭하여 열화상 가열을 중지하고 열군을 재교정하여 다음 응용 분야를 준비합니다. 참고: 처리기가 이 단계를 수행합니다.<ol><li>개가 구속 없이 또는 최소한의 구속 없이 비교적 침착하고 편안한 상태를 유지하는 경우 시험 간 간격 동안 개가 옆으로 누운 상태를 유지하도록 허용하십시오. 그렇지 않으면 개가 편안함을 유지하기 위해 QST 룸에 앉거나 서거나 움직일 수 있도록 하십시오. 후속 측정 전에 개를 옆으로 누운 상태로 다시 놓습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>데이터 수집의 용이성을 나타내기 위해 0-5의 타당성 점수를 기록합니다. 참고: 타당성 점수는 다음과 같습니다: 0 = 문제 없음, 1 = 경미한 난이도, 2 = 보통 난이도, 3 = 상당한 난이도, 4 = 매우 어려움, 5 = 불가능.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Hunt, J., Knazovicky, D., Lascelles, B. D. X., Murrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+sensory+testing+in+dogs+with+painful+disease:+A+window+to+pain+mechanisms.">Quantitative sensory testing in dogs with painful disease: A window to pain mechanisms.</a> The Veterinary Journal. 243, 33-41 (2019).</li><li>Purves, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+and+subcutaneous+somatic+sensory+receptors.">Cutaneous and subcutaneous somatic sensory receptors.</a> Neuroscience, 2nd edition. , (2001).</li><li>Gorney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+and+thermal+sensory+testing+in+normal+chondrodystrophic+dogs+and+dogs+with+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+herniations.">Mechanical and thermal sensory testing in normal chondrodystrophic dogs and dogs with spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc herniations.</a> Journal of Veterinary Internal Medicine. 30 (2), 627-635 (2016).</li><li>Song, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Frey+anesthesiometry+to+assess+sensory+impairment+after+acute+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+extrusion+in+dogs.">von Frey anesthesiometry to assess sensory impairment after acute spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc extrusion in dogs.</a> The Veterinary Journal. 209, 144-149 (2016).</li><li>Moore, S. A., Hettlich, B. F., Waln, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+an+electronic+von+Frey+device+for+evaluation+of+sensory+threshold+in+neurologically+normal+dogs+and+those+with+acute+spinal+cord+injury.">The use of an electronic von Frey device for evaluation of sensory threshold in neurologically normal dogs and those with acute spinal cord injury.</a> The Veterinary Journal. 197 (2), 216-219 (2013).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregabalin+for+the+treatment+of+syringomyelia-associated+neuropathic+pain+in+dogs:+A+randomized,+placebo-controlled,+double-masked+clinical+trial.">Pregabalin for the treatment of syringomyelia-associated neuropathic pain in dogs: A randomized, placebo-controlled, double-masked clinical trial.</a> The Veterinary Journal. 250, 55-62 (2019).</li><li>Brydges, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+assessments+of+increased+sensory+sensitivity+in+dogs+with+cranial+cruciate+ligament+rupture.">Clinical assessments of increased sensory sensitivity in dogs with cranial cruciate ligament rupture.</a> The Veterinary Journal. 193 (2), 546-550 (2012).</li><li>Williams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+thermal+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs+and+dogs+with+hind+limb+osteoarthritis-associated+pain.">Feasibility and repeatability of thermal quantitative sensory testing in normal dogs and dogs with hind limb osteoarthritis-associated pain.</a> The Veterinary Journal. 199, 63-67 (2014).</li><li>Freire, M., Knazovicky, D., Case, B., Thomson, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+client-owned+dogs+with+chronic+naturally+occurring+pain+and+normal+dogs.">Comparison of thermal and mechanical quantitative sensory testing in client-owned dogs with chronic naturally occurring pain and normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 210, 95-97 (2016).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+somatosensory+sensitivity+in+naturally+occurring+canine+model+of+osteoarthritis.">Widespread somatosensory sensitivity in naturally occurring canine model of osteoarthritis.</a> Pain. 157 (6), 1325-1332 (2016).</li><li>Lascelles, B. D. X., Cripps, P. J., Jones, A., Waterman, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+central+hypersensitivity+and+pain:+The+pre-emptive+value+of+pethidine+for+ovariohysterectomy.">Post-operative central hypersensitivity and pain: The pre-emptive value of pethidine for ovariohysterectomy.</a> Pain. 73 (3), 461-471 (1997).</li><li>Slingsby, L. S., Waterman-Pearson, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+post-operative+analgesic+effects+of+ketamine+after+canine+ovariohysterectomy+-+a+comparison+between+pre-+or+post-operative+administration.">The post-operative analgesic effects of ketamine after canine ovariohysterectomy - a comparison between pre- or post-operative administration.</a> Research in Veterinary Medicine. 69 (2), 147-152 (2000).</li><li>Sammarco, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+analgesia+for+stifle+surgery:+A+comparison+of+intra-articular+bupivacaine,+morphine,+or+saline.">Post-operative analgesia for stifle surgery: A comparison of intra-articular bupivacaine, morphine, or saline.</a> Veterinary Surgery. 25 (1), 59-69 (1996).</li><li>Tomas, A., Marcellin-Little, D. J., Roe, S. C., Motsinger-Reif, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+mechanical+thresholds+and+limb+use+in+dogs+with+coxofemoral+joint+OA-associated+pain+and+the+modulating+effects+of+pain+alleviation+from+total+hip+replacement+on+mechanical+thresholds.">Relationship between mechanical thresholds and limb use in dogs with coxofemoral joint OA-associated pain and the modulating effects of pain alleviation from total hip replacement on mechanical thresholds.</a> Veterinary Surgery. 43 (5), 542-548 (2014).</li><li>Briley, J. D., Williams, M. D., Freire, M., Griffith, E. H., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+cold+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs.">Feasibility and repeatability of cold and mechanical quantitative sensory testing in normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 199 (2), 246-250 (2014).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicate+effects+and+test-retest+reliability+of+quantitative+sensory+threshold+testing+in+dogs+with+and+without+chronic+pain.">Replicate effects and test-retest reliability of quantitative sensory threshold testing in dogs with and without chronic pain.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 615-624 (2017).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+initial+validation+of+a+sensory+threshold+examination+protocol+(STEP)+for+phenotyping+canine+pain+syndromes.">Development and initial validation of a sensory threshold examination protocol (STEP) for phenotyping canine pain syndromes.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 600-614 (2017).</li><li>Backonja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+quantitative+sensory+testing+in+neurological+and+pain+disorders:+NeuPSIG+consensus.">Value of quantitative sensory testing in neurological and pain disorders: NeuPSIG consensus.</a> Pain. 154 (9), 1807-1819 (2013).</li><li>Wylde, V., Palmer, S., Learmonth, I. 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저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

개의 감각 역치를 반영하는 정확한 데이터를 수집하려면 개가 각 측정에 대해 가능한 한 침착하고 편안하며 적절한 위치에 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 이전 연구에서는 검사 환경 안팎의 요인으로 인한 억제 또는 주의산만으로 인한 동요가 QST 자극에 대한 개의 반응에 영향을 미친다고 지적했다 16. 개가 누운 자세나 구속으로 인해 동요하거나 주의가 산만해지면 측정을 ...

정량적 감각 검사(QST)는 외부에서 적용된 자극에 의해 유도된 반응을 평가합니다. 인간과 동물의 체성감각계의 기능을 평가하는 데 사용된다1. 점상 압력 또는 깊은 압력의 형태로 기계적 자극이 램프 자극으로 적용됩니다. 감각 역치는 정신물리학적 반응을 유발하는 힘으로 결정된다1. 뜨겁거나 차가운 열 자극은 램프 자극 또는 고정 강도 자극으로 사용할 수 있습니다. 감각 역치는 자극에 반응하는 반응 또는 대기 시간이 있는 온도로 결정됩니다. 점상 압력 감각 역치는 전자 von Frey 마취계 또는 von Frey 모발 필라멘트를 사용하여 측정하고, 심압은 휴대용 압력 알고리즘계를 사용하여 측정하고, 열 감각 역치는 다양한 접촉 열화상 시스템을 사용하여 측정합니다.
QST는 말초 및 중추 감각 경로의 기능에 대한 정보를 제공하며, 다양한 질병 과정, 특히 만성 통증을 유발하는 과정에서 이러한 감각 경로의 변화(가소성)를 평가하는 데 사용할 수 있다1. Meissner의 소체는 점상 압력을 감지하고, 감각은 자극이 유해한 강도 1,2 일 때 무독성 수준의 Aβ 구 심성 섬유와 Aδ 구 심성 섬유에 의해 전달됩니다. 깊은 압력은 파시니안 소체에 의해 감지되고 C 구심성 섬유에 의해 전달되고, 유해한 열은 루피니 소체에 의해 감지되고 Aδ 및 C 구심성 섬유에 의해 전달되며, 유해한 추위는 크라우스 소체에 의해 감지되고 C 구심성 섬유에 의해 전달됩니다 1,2. QST는 이러한 수용체 및 경로의 억제(민감도 감소, 감각 저하) 및 촉진(민감도 증가, 감각 과민)을 모두 감지하는 데 사용할 수 있습니다. 개에서 QST는 급성 척수 손상 3,4,5, 키아리 유사 기형 및 척수공동증6, 두개골 십자인대 파열5,7 및 골관절염(OA)8,9,10에 이차적인 감각 역치의 변화를 평가하는 데 사용되었습니다. 또한, 일부 연구에서는 QST를 사용하여 특정 진통제6,11,12,13 및 수술14에 의해 제공되는 통증 완화를 평가했다. 이러한 연구는 수술 후 말초 및 중추 감작에 대한 증거와 두개골 십자 인대 파열 및 OA와 같은 만성 통증 상태를 유발하는 질병과 같은 개의 통증 감각 메커니즘에 대한 중요한 통찰력을 제공했습니다. 이 정보는 개의 통증 감지 및 치료를 개선하는 데 도움이 될 수 있습니다.
개의 기계적 및 고온 열 QST에 대한 검증 연구는 OA 8,9,15,16의 만성 통증이 있는 개에서 시간이 지남에 따라 QST 결과의 우수한 타당성, 반복성 및 신뢰성을 보여주었습니다. 그러나 여러 연구에서 저온 열 및 때때로 von Frey QST 1,15,17의 반복성과 신뢰성이 좋지 않은 것으로 나타났습니다. 이 연구에서는 서로 다른 장비와 방법론을 사용했지만 기계적 및 고온 열 QST가 개의 감각 역치를 측정하는 정확하고 반정량적인 방법이라는 증거를 제공했습니다. 그러나 측정 설정을 포함한 정확한 세부 사항에 주의를 기울이는 것은 개의 QST를 최적화하는 데 중요하므로 QST에 대한 표준화된 프로토콜이 필요합니다. Sanchis-Mora et al. 기계적 및 고온 및 저온 열 QST에 대한 감각 역치 검사 프로토콜(STEP)을 자세히 설명했지만 개가 저온 열 QST 또는 연구에 사용된 가장 높은 그램 힘 폰 프레이 필라멘트에 반응하지 않는 데 어려움을 겪었습니다17. 다음 프로토콜은 개의 기계적 및 고온 열 QST에 대한 표준 방법을 제공합니다. 이 프로토콜은 체성 감각 시스템에 영향을 미치는 다양한 질병 과정이 있는 정상 개 또는 개의 감각 역치를 평가할 수 있습니다. 표준화된 프로토콜의 개발은 수의학에서 QST의 유용성을 개선하기 위해 연구 및 데이터 메타 분석 전반에 걸쳐 결과를 비교할 수 있도록 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Electronic von Frey anesthesiometer</td>
			<td>IITC Life Science Inc.</td>
			<td>Item # 23931</td>
			<td>Custom made with a 1000g max force load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medoc Main Station software</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>(supplied with TSA-II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMALGO: SMall Animal ALGOmeter</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>Model VETALGO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA-II NeuroSensory Analyzer</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>DC 00072 TSA-II</td>
			<td>No longer manufactured - new model is TSA-2 with same probes and same function</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of sensory thresholds in dogs using mechanical and hot thermal quantitative sensory testing

정량적 감각 검사(QST)는 적용된 기계적 및 열적 자극에 대한 반응을 평가하여 개의 체성 감각 시스템의 기능을 평가하는 데 사용됩니다. QST는 정상적인 개의 감각 역치를 결정하고 골관절염, 척수 손상 및 두개골 십자 인대 파열을 포함한 다양한 질병 상태로 인한 말초 및 중추 감각 경로의 변화를 평가하는 데 사용됩니다. 기계적 감각 역치는 전자 von Frey 마취계와 압력 알고리즘으로 측정됩니다. 그들은 개가 의식적인 자극 지각을 나타내는 반응을 나타내는 힘으로 결정됩니다. 고온 열 감각 임계값은 접촉 열도에 의해 적용되는 고정 또는 램프 온도 자극에 반응하는 대기 시간입니다.
QST를 수행하기 위한 일관된 프로토콜을 따르고 테스트 환경, 절차 및 개별 연구 대상에 대한 세부 사항에 주의를 기울이는 것은 개에 대한 정확한 QST 결과를 얻는 데 중요합니다. 개의 QST 데이터의 표준화된 수집을 위한 프로토콜은 자세히 설명되지 않았습니다. QST는 반려견, QST 운영자 및 핸들러에게 편안한 조용하고 산만하지 않은 환경에서 수행해야 합니다. 개가 각 측정에 대해 침착하고 편안하며 적절한 위치에 있는지 확인하면 자극에 대한 신뢰할 수 있고 일관된 반응을 생성하고 테스트 프로세스를 보다 쉽게 관리할 수 있습니다. QST 운영자와 핸들러는 개를 다루고 잠재적으로 고통스러울 수 있는 자극에 대한 개의 행동 반응을 해석하여 테스트의 종점을 결정하고 스트레스를 줄이며 테스트 과정에서 안전을 유지하는 데 익숙하고 편안해야 합니다.

기계적 및 열적 QST는 정상적이고 건강한 개, OA와 같은 만성 통증 상태를 가진 개, 급성 척수 손상이 있는 개를 포함하여 다양한 임상 조건에서 연구 및 고객 소유 개 모두의 감각 역치를 감지하고 수술 후 통증 및 진통제의 효과를 평가하기 위해 수행되었습니다. 개의 QST에 대한 연구가 증가하고 있지만 테스트 양식에 대한 정상적인 값 범위는 확립되지 않았습니다. 그러나 여러 연구에서 개의 기?...

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Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

이 작업은 개의 체성 감각 시스템을 평가하기 위한 기계적 및 고온 열 정량적 감각 테스트를 위한 표준 프로토콜을 설명합니다. 감각 역치는 전자 von Frey 마취계, 압력 알고리즘계 및 고온 접촉 열도를 사용하여 측정됩니다.

기계적 및 고온 열 정량적 감각 테스트를 사용한 개의 감각 역치 평가

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical ...

assessment-sensory-thresholds-dogs-using-mechanical-hot-thermal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

2.1K 조회수.  North Carolina State University. 이 작업은 개의 체성 감각 시스템을 평가하기 위한 기계적 및 고온 열 정량적 감각 테스트를 위한 표준 프로토콜을 설명합니다. 감각 역치는 전자 von Frey 마취계, 압력 알고리즘계 및 고온 접촉 열도를 사용하여 측정됩니다.

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Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and learning and memory. There are four known families of PKC isoforms in vertebrates: classical PKCs (&alpha;, &beta;I, &beta;II and &gamma;), novel type I PKCs (&#949; and &eta;), novel type II PKCs (&delta; and &theta;), and atypical PKCs (&zeta; and &iota;). The classical PKCs are activated by Ca2+ and diacylclycerol (DAG), while the novel PKCs are activated by DAG, but are Ca2+-independent. The atypical PKCs are activated by neither Ca2+ nor DAG. In Aplysia californica, our model system to study memory formation, there are three nervous system specific PKC isoforms one from each major class, namely the conventional PKC Apl I, the novel type I PKC Apl II and the atypical PKC Apl III. PKCs are lipid-activated kinases and thus activation of classical and novel PKCs in response to extracellular signals has been frequently correlated with PKC translocation from the cytoplasm to the plasma membrane. Therefore, visualizing PKC translocation in real time in live cells has become an invaluable tool for elucidating the signal transduction pathways that lead to PKC activation. For instance, this technique has allowed for us to establish that different isoforms of PKC translocate under different conditions to mediate distinct types of synaptic plasticity and that serotonin (5HT) activation of PKC Apl II requires production of both DAG and phosphatidic acid (PA) for translocation 1-2. Importantly, the ability to visualize the same neuron repeatedly has allowed us, for example, to measure desensitization of the PKC response in exquisite detail 3. In this video, we demonstrate each step of preparing Sf9 cell cultures, cultures of Aplysia sensory neurons have been described in another video article 4, expressing fluorescently tagged PKCs in Sf9 cells and in Aplysia sensory neurons and live-imaging of PKC translocation in response to different activators using laser-scanning microscopy.

In this video, we demonstrate visualization of PKC translocation in living cells using fluorescently tagged PKCs.

Sf9 세포에서 Aplysia 감각 뉴런에서 PKC Translocation의 라이브 영상

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

연구

신경과학

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

손상의 감각 오르간 전구체 세포 라이브 셀 이미징 Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the olfactory bulb (OB). The molecular mechanisms of OSN axon growth and targeting are not well understood. Manipulating gene expression and subsequent 
visualizing of single OSN axons and their terminal arbor morphology have thus far been challenging. To study gene function at the single cell level within a specified 
time frame, we developed a lentiviral based technique to manipulate gene expression in OSNs in vivo. Lentiviral particles are delivered to OSNs by microinjection 
into the olfactory epithelium (OE). Expression cassettes are then permanently integrated into the genome of transduced OSNs. Green fluorescent protein expression 
identifies infected OSNs and outlines their entire morphology, including the axon terminal arbor. Due to the short turnaround time between microinjection and 
reporter detection, gene function studies can be focused within a very narrow period of development. With this method, we have detected GFP expression within as 
few as three days and as long as three months following injection. We have achieved both over-expression and shRNA mediated knock-down by lentiviral microinjection. 
This method provides detailed morphologies of OSN cell bodies and axons at the single cell level in vivo, and thus allows characterization of candidate gene function 
during olfactory development.

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

We present a lentiviral technique for genetic manipulation and visualization of single olfactory sensory neuron axon and its terminal arborization in vivo.

강한 감각 뉴런의 Lentivirus - 중재 유전자 조작 및 시각화 생체내에</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic development and axonal wiring. Recently the dendritic arborization (DA) sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system (PNS) have become powerful genetic models in which to elucidate both general and class-specific mechanisms of neuron differentiation.
There are four main DA neuron classes (I-IV)1. They are named in order of increasing dendrite arbor complexity, and have class-specific differences in the genetic control of their differentiation2-10. The DA sensory system is a practical model to investigate the molecular mechanisms behind the control of dendritic morphology11-13 because: 1) it can take advantage of the powerful genetic tools available in the fruit fly, 2) the DA neuron dendrite arbor spreads out in only 2 dimensions beneath an optically clear larval cuticle making it easy to visualize with high resolution in vivo, 3) the class-specific diversity in dendritic morphology facilitates a comparative analysis to find key elements controlling the formation of simple vs. highly branched dendritic trees, and 4) dendritic arbor stereotypical shapes of different DA neurons facilitate morphometric statistical analyses.
DA neuron activity modifies the output of a larval locomotion central pattern generator14-16. The different DA neuron classes have distinct sensory modalities, and their activation elicits different behavioral responses14,16-20. Furthermore different classes send axonal projections stereotypically into the Drosophila larval central nervous system in the ventral nerve cord (VNC)21. These projections terminate with topographic representations of both DA neuron sensory modality and the position in the body wall of the dendritic field7,22,23. Hence examination of DA axonal projections can be used to elucidate mechanisms underlying topographic mapping7,22,23, as well as the wiring of a simple circuit modulating larval locomotion14-17.
We present here a practical guide to generate and analyze genetic mosaics24 marking DA neurons via MARCM (Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker)1,10,25 and Flp-out22,26,27 techniques (summarized in Fig. 1).

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

The dendritic arborization sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system are useful models to elucidate both general and neuron class-specific mechanisms of neuron differentiation. We present a practical guide to generate and analyze dendritic arborization neuron genetic mosaics.

의 형태학의 분석 Drosophila</em유전 모자이크 사용하기> 애벌레 주변 감각 신경 세포의 Dendrites 및 Axons

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em&gt; 초파리</em&gt; 안테나

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is required to shape functional neuronal circuits. The protocol described here explains how to use cell culture inserts bearing a porous membrane (filter) to obtain large amounts of pure axonal preparations suitable for examination by conventional biochemical or immunocytochemical techniques. The functionality of these filter inserts will be demonstrated with models of developmental pruning and Wallerian degeneration, using explants of embryonic dorsal root ganglion. Axonal integrity and function is compromised in a wide variety of neurodegenerative pathologies. Indeed, it is now clear that axonal dysfunction appears much earlier in the course of the disease than neuronal soma loss in several neurodegenerative diseases, indicating that axonal-specific processes are primarily targeted in these disorders. By obtaining pure axonal samples for analysis by molecular and biochemical techniques, this technique has the potential to shed new light into mechanisms regulating the physiology and pathophysiology of axons. This in turn will have an impact in our understanding of the processes that drive degenerative diseases of the nervous system.

This article describes a neuronal culture system that can be used to obtain large quantities of pure axonal samples for biochemical and immunocytochemical analyses. This technique will allow an improved understanding of normal axonal physiology and signaling pathways leading to neurodegeneration.

생화학 적 분석에 대한 감각 뉴런에서 생산 및 축삭의 분리는 다공성 필터를 사용하여

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

의 컴퓨터 추적하여있는 분석 후각 행동<em&gt; 초파리</em&gt; 네 사분면의 후각에

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Dynamic Quantitative Sensory Testing to Characterize Central Pain Processing

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain processing is present in many chronic pain conditions and can influence responses to specific therapies. Thus, the ability to precisely describe the state of central pain processing has profound clinical significance in both prognosis and prediction. Because it is not practical to record neuronal firings directly in the human spinal cord, surrogate behavior tests become an important tool to assess the state of central pain processing. Dynamic QST is one such test, and can probe both the ascending facilitation and descending modulation of incoming nociceptive signals via TS and CPM, respectively. Due to the large between-individual variability in the sensitivity to noxious signals, standardized TS and CPM tests may not yield any meaningful data in up to 50% of the population due to floor or ceiling effects. We present methodologies to individualize TS and CPM so we can capture these measures in a broader range of individuals than previously possible. We have used these methods successfully in several studies at the lab, and data from one ongoing study will be presented to demonstrate feasibility and potential applications of the methods.

By assessing pain in response to repetitive or different types of standardized stimuli, dynamic quantitative sensory testing (QST) can reveal changes in the central processing of pain. We present methods to optimize and individualize two dynamic QST measures: temporal summation (TS) and conditioned pain modulation (CPM).

동적 정량적 감각 테스트는 중앙 통증 처리의 특성을

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American bullfrog, has become a mainstay of auditory and vestibular research. Studies of this organ have revealed how sensory cells hair can actively detect signals from the environment. Because of these studies, we now better understand the mechanical gating and localization of a hair cell&#39;s transduction channels, calcium&#39;s role in mechanical adaptation, and the identity of hair cell currents. This highly accessible organ continues to provide insight into the workings of hair cells. Here we describe the preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies on its hair cells. We include the complete dissection procedure and provide specific protocols for the preparation of the sacculus in specific contexts. We additionally include representative results using this preparation, including the calculation of a hair bundle&#39;s instantaneous force-displacement relation and measurement of a bundle&#39;s spontaneous oscillation.

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

The American bullfrog&#39;s (Rana catesbeiana) sacculus permits direct examination of hair-cell physiology. Here the dissection and preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies is described. We show representative experiments from these hair cells, including the calculation of a bundle&#39;s force-displacement relation and measurement of its unforced motion.