Os autores gostariam de agradecer a Andrea Thomson, Jon Hash, Hope Woods e Autumn Anthony por lidar com cães para QST, Masataka Enomoto por sua ajuda na triagem de cães e Sam Chiu por suas contribuições para estabelecer o protocolo para QST térmico quente.

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Estadual da Carolina do Norte.
1. Montagem da sala e aclimatação dos sujeitos de estudo
<ol><li>Execute o QST em um espaço dedicado onde há amplo espaço para um operador de QST, adestrador e cão de qualquer tamanho se movimentar confortavelmente. Minimize possíveis distrações auditivas e visuais e use uma máquina de ruído branco para bloquear o som ambiente.</li>
	<li>Coloque um tapete de ioga grande ou acolchoado semelhante no chão para garantir que os cães estejam confortáveis em decúbito lateral durante o teste.</li>
	<li>Permita que o cão pelo menos 10 minutos explore e se aclimate livremente ao quarto e fique confortável com o operador e o manipulador do QST. Ofereça água fresca ad libitum no quarto e dê recompensas alimentares ocasionais.</li>
	<li>Randomize o local de teste (lado esquerdo ou direito) por meio de um flip de moeda. Clipar um corte de aproximadamente 2 x 4 cm de pelo centrado ao redor do espaço entre a superfície dorsal do terceiro e quarto metatarsos a meio caminho entre a articulação tarsometatarsal e a articulação metatarsofalangeana. Clipar um corte de aproximadamente 1 x 2 cm de pelo no antebráquio lateral logo proximal à articulação antebraquiocarpal sobre a ulna.</li>
</ol>2. Anestesiômetro eletrônico de von Frey
<ol><li>Configuração do instrumento<ol><li>Aplique suavemente uma ponta de von Frey rígida de 0,9 mm na célula de carga e certifique-se de que a célula de carga esteja firmemente aparafusada na peça de mão. Conecte o cabo da peça de mão ao dispositivo de gravação através do canal M0 (Figura 1A,B).</li>
		<li>Ligue o dispositivo de gravação e pressione o botão MAX para que o dispositivo registre e exiba a força máxima alcançada quando o cão responde ao estímulo aplicado (Figura 1C).</li>
		<li>Zere o instrumento pressionando o botão CLR .</li>
	</ol></li>
	<li>Recolha de dados<ol><li>Colocar o cão em decúbito lateral para mensuração dos limiares. OBS: Os cães são colocados em decúbito lateral direito para mensuração dos limiares nos membros esquerdos ou em decúbito lateral esquerdo para mensuração dos limiares nos membros direitos. Se o cão não se deitar voluntariamente em decúbito lateral quando receber pistas verbais, o operador e o adestrador do QST podem colocar manualmente o cão em decúbito lateral.</li>
		<li>Aplicar contenção mínima a moderada conforme necessário para manter o cão em decúbito lateral e relativamente imóvel. Observação : O manipulador executa essa etapa.</li>
		<li>Aplicar o estímulo quando o cão estiver calmo e relaxado e o membro a ser testado estiver em pelo menos 70% de extensão. Fornecer apoio manual suave ao membro que está sendo testado para manter o membro fora do chão e fornecer apoio estável para aplicar força contra enquanto não impede que o cão retire o membro. Observação : O operador QST executa esta etapa.</li>
		<li>Aplicar a ponta de von Frey perpendicularmente à pele da área a ser testada. Se o cão apresentar movimentos reflexos (por exemplo, contração da pata ou retirada do membro antes que a força esteja sendo aplicada) a partir da sensação da ponta de von Frey na pele, permita que o cão relaxe o membro novamente antes de reaplicar a ponta de von Frey. Faça uma medição quando a pele não causar movimentos reflexos aplicando a ponta de von Frey.</li>
		<li>Aplicar força crescente com a ponta de von Frey (~20 g/seg) até que o cão retire o membro, vocalize, vire para olhar o estímulo ou exiba outros movimentos ou respostas comportamentais que indiquem a percepção consciente do estímulo. Remova o estímulo quando o cão retirar o membro, ou a força máxima for atingida. NOTA: Não exceda 1.000 g de força.</li>
		<li>Registre a força máxima aplicada que é exibida no dispositivo de gravação. NOTA: Se o corte de segurança de 1.000 g de força for atingido, 1.000 g é registrado como o limiar sensorial, e nota-se que não houve resposta antes do corte de segurança.</li>
		<li>Repetir as medidas por um total de cinco tentativas, permitindo 1 min entre cada medida (intervalo inter-tentativas). Zere o instrumento entre cada passo pressionando o botão CLR .<ol><li>Permitir que o cão permaneça em decúbito lateral durante os intervalos inter-experimentais se ele permanecer relativamente calmo e relaxado com nenhuma ou mínima contenção. Caso contrário, permita que o cão se sente, fique de pé ou se mova pela sala QST para manter seu conforto. Recolocar o cão em decúbito lateral antes da medição subsequente.</li>
		</ol></li>
		<li>Registre um escore de viabilidade de 0 a 5 para indicar a facilidade com que os dados foram coletados. NOTA: Os escores de viabilidade são os seguintes: 0 = nenhum problema, 1 = dificuldade leve, 2 = dificuldade moderada, 3 = dificuldade significativa, 4 = extremamente difícil, 5 = impossível. A rubrica utilizada para a atribuição dos escores de viabilidade é apresentada na Tabela 1.</li>
		<li>Dê ao cão uma pausa de 5 minutos antes de iniciar as medições com o algômetro de pressão sondado rombo.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Algômetro de pressão sondado Blunt
<ol><li>Configuração do instrumento<ol><li>Certifique-se de que a pequena sonda romba esteja firmemente aparafusada no dispositivo (Figura 2A).</li>
		<li>Ligue o dispositivo de gravação e pressione o botão MAX para continuar quando solicitado na tela. Pressione o botão UNIT até que a unidade seja exibida como gramas (g) na parte superior da tela (Figura 2B).</li>
		<li>Zere o instrumento pressionando o botão ZERO .</li>
	</ol></li>
	<li>Recolha de dados<ol><li>Colocar o cão em decúbito lateral para mensuração dos limiares. OBS: Os cães são colocados em decúbito lateral direito para mensuração dos limiares nos membros esquerdos ou em decúbito lateral esquerdo para mensuração dos limiares nos membros direitos. Se o cão não se deitar voluntariamente em decúbito lateral quando receber pistas verbais, o operador e o adestrador do QST podem colocar manualmente o cão em decúbito lateral.</li>
		<li>Aplicar contenção mínima a moderada conforme necessário para manter o cão em decúbito lateral e relativamente imóvel. Observação : O manipulador executa essa etapa.</li>
		<li>Aplicar o estímulo quando o cão estiver calmo e relaxado e o membro a ser testado estiver com aproximadamente 70% de extensão. Fornecer apoio manual suave ao membro que está sendo testado para manter o membro fora do chão e fornecer apoio estável para aplicar força contra, sem impedir que o cão retire o membro. Observação : O operador QST executa esta etapa.</li>
		<li>Aplicar a sonda romba perpendicularmente à pele da área a ser ensaiada (Figura 2C). Se o cão apresentar movimentos reflexos (por exemplo, contração da pata ou retirada do membro antes que a força esteja sendo aplicada) a partir da sensação da sonda romba na pele, permita que o cão relaxe o membro novamente antes de reaplicar a sonda romba. Faça uma medição quando a aplicação da sonda romba na pele não causar movimentos reflexos.</li>
		<li>Aplicar força crescente com a sonda (~20 g/s) até que o cão retire o membro, vocalize, vire para olhar o estímulo ou exiba outros movimentos ou respostas comportamentais que indiquem a percepção consciente do estímulo. Remova o estímulo quando o cão retirar o membro ou a força máxima for atingida. NOTA: Não exceda 2.500 g de força.</li>
		<li>Registre a força máxima aplicada que é exibida no dispositivo de gravação. NOTA: Se o limite de segurança de 2.500 g de força for atingido, 2.500 g é registrado como o limiar sensorial, e nota-se que não houve resposta antes do corte de segurança.</li>
		<li>Repetir as medidas por um total de cinco tentativas, permitindo 1 min entre cada medida (intervalo inter-tentativas). Zere o instrumento entre cada passo pressionando o botão ZERO .<ol><li>Permitir que o cão permaneça em decúbito lateral durante o intervalo inter-experimento se ele permanecer relativamente calmo e relaxado com nenhuma ou mínima contenção. Caso contrário, permita que o cão se sente, fique de pé ou se mova pela sala QST para manter seu conforto. Recolocar o cão em decúbito lateral antes da medição subsequente.</li>
		</ol></li>
		<li>Registre um escore de viabilidade de 0 a 5 para indicar a facilidade com que os dados foram coletados. NOTA: Os escores de viabilidade são os seguintes: 0 = nenhum problema, 1 = dificuldade leve, 2 = dificuldade moderada, 3 = dificuldade significativa, 4 = extremamente difícil, 5 = impossível.</li>
		<li>Dê ao cão uma pausa de 5 minutos antes de iniciar as medições com a sonda térmica quente.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Sonda térmica quente
<ol><li>Configuração do instrumento<ol><li>Conecte o analisador termossensorial ao computador através do cabo USB e certifique-se de que o termômetro de 16 x 16 mm esteja conectado ao analisador. Ligue o analisador.</li>
		<li>Abra o software do analisador termossensorial no computador e selecione o analisador TSA II no menu de inicialização. Clique em OK no aviso pop-up para o autoteste do analisador. Certifique-se de que o termômetro não esteja conectado ao sujeito do estudo durante o autoteste.</li>
		<li>Na guia TESTE (canto superior direito), no prompt Selecionar paciente (lado esquerdo da tela), selecione o paciente apropriado clicando duas vezes no nome na lista.<ol><li>Para criar um novo paciente, clique na guia PACIENTES à direita da guia TESTE . Clique no ícone Novo Paciente no canto inferior esquerdo e preencha os dados do paciente (departamento, nome e sobrenome do paciente, RG, sexo e data de nascimento).</li>
		</ol></li>
		<li>No prompt Selecionar programa na guia TESTE , selecione o programa apropriado clicando duas vezes no programa na lista.<ol><li>Para criar um novo programa, clique uma vez na guia PROGRAMAS à direita da guia PACIENTES . Clique no ícone Novo Programa no canto inferior esquerdo e preencha os detalhes do programa. Observação : para este protocolo, os detalhes do programa são fornecidos na tabela 2. Um site de corpo não precisa ser selecionado no prompt Selecionar Site de Corpo na guia TESTE .</li>
		</ol></li>
		<li>Uma vez que o paciente e o programa apropriados tenham sido selecionados, clique no prompt Ir para teste na guia TESTE . Clique no botão Pré-teste no canto inferior esquerdo para calibrar o analisador para o programa especificado.</li>
		<li>Quando o Pré-teste estiver concluído, o botão Pré-teste será substituído pelo botão Iniciar e a janela de teste será exibida: Pressione o botão Iniciar para iniciar o teste (Figura 3A).</li>
		<li>Desenrole o cabo do termódico e certifique-se de que o termômetro seja facilmente acessível.</li>
	</ol></li>
	<li>Recolha de dados<ol><li>Coloque o cão em decúbito lateral para medir a latência térmica. OBS: Os cães são colocados em decúbito lateral direito para mensuração dos limiares nos membros esquerdos ou em decúbito lateral esquerdo para mensuração dos limiares nos membros direitos. Se o cão não se deitar voluntariamente em decúbito lateral quando receber pistas verbais, o operador e o adestrador do QST podem colocar manualmente o cão em decúbito lateral.</li>
		<li>Aplicar contenção mínima a moderada conforme necessário para manter o cão em decúbito lateral e relativamente imóvel. Observação : O manipulador executa essa etapa.</li>
		<li>Aplicar o estímulo assim que o cão estiver calmo e relaxado e o membro a ser testado estiver em aproximadamente 70% de extensão. Fornecer apoio manual suave ao membro que está sendo testado para manter o membro fora do chão, sem impedir que o cão retire o membro. Além disso, segure e opere um cronômetro com a mão apoiando o membro. Observação : O operador QST executa esta etapa.</li>
		<li>Aplicar o termo na pele da área a ser testada (Figura 3B). Se o cão apresentar movimentos reflexos (por exemplo, contração da pata ou retirada do membro antes que o calor esteja sendo aplicado) a partir da sensação do termo, permita que o cão relaxe o membro novamente antes de reaplicar o termo. Faça uma medição quando a aplicação do termode na pele não causar movimentos reflexos.</li>
		<li>Clique no botão Iniciar no canto inferior esquerdo da guia TESTAR para iniciar o teste. NOTA: O operador QST sinaliza ao manipulador para iniciar o teste (por exemplo, acenando com a cabeça) e o operador QST inicia simultaneamente o cronômetro.</li>
		<li>Remova o termômetro quando o cão retira o membro, vocaliza, vira para olhar o estímulo ou exibe outros movimentos ou respostas comportamentais que indicam a percepção consciente do estímulo ou quando a latência máxima é atingida ao parar simultaneamente o cronômetro. Observação : O operador QST executa esta etapa. Não exceda 20 s de aplicação do termódico ou 49 °C da temperatura máxima do termo.</li>
		<li>Registre a latência para retirada. Se o ponto de corte de segurança de 20 s de aplicação do termode for atingido, registre 20 s como a latência sensorial e observe que não houve resposta antes do corte de segurança.</li>
		<li>Repetir as medidas por um total de cinco tentativas, permitindo 1 min entre cada medida (intervalo inter-tentativas). Clique no botão Finalizar Teste e, em seguida, no botão Pré-Teste entre cada medição para parar de aquecer o termo, e recalibre o termo, para se preparar para a próxima aplicação. Observação : O manipulador executa essa etapa.<ol><li>Permitir que o cão permaneça em decúbito lateral durante o intervalo inter-experimento se ele permanecer relativamente calmo e relaxado com nenhuma ou mínima contenção. Caso contrário, permita que o cão se sente, fique de pé ou se mova pela sala QST para manter seu conforto. Recolocar o cão em decúbito lateral antes da medição subsequente.</li>
		</ol></li>
		<li>Registre um escore de viabilidade de 0 a 5 para indicar a facilidade com que os dados foram coletados. NOTA: Os escores de viabilidade são os seguintes: 0 = nenhum problema, 1 = dificuldade leve, 2 = dificuldade moderada, 3 = dificuldade significativa, 4 = extremamente difícil, 5 = impossível.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Hunt, J., Knazovicky, D., Lascelles, B. D. X., Murrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+sensory+testing+in+dogs+with+painful+disease:+A+window+to+pain+mechanisms.">Quantitative sensory testing in dogs with painful disease: A window to pain mechanisms.</a> The Veterinary Journal. 243, 33-41 (2019).</li><li>Purves, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+and+subcutaneous+somatic+sensory+receptors.">Cutaneous and subcutaneous somatic sensory receptors.</a> Neuroscience, 2nd edition. , (2001).</li><li>Gorney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+and+thermal+sensory+testing+in+normal+chondrodystrophic+dogs+and+dogs+with+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+herniations.">Mechanical and thermal sensory testing in normal chondrodystrophic dogs and dogs with spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc herniations.</a> Journal of Veterinary Internal Medicine. 30 (2), 627-635 (2016).</li><li>Song, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Frey+anesthesiometry+to+assess+sensory+impairment+after+acute+spinal+cord+injury+caused+by+thoracolumbar+intervertebral+disc+extrusion+in+dogs.">von Frey anesthesiometry to assess sensory impairment after acute spinal cord injury caused by thoracolumbar intervertebral disc extrusion in dogs.</a> The Veterinary Journal. 209, 144-149 (2016).</li><li>Moore, S. A., Hettlich, B. F., Waln, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+an+electronic+von+Frey+device+for+evaluation+of+sensory+threshold+in+neurologically+normal+dogs+and+those+with+acute+spinal+cord+injury.">The use of an electronic von Frey device for evaluation of sensory threshold in neurologically normal dogs and those with acute spinal cord injury.</a> The Veterinary Journal. 197 (2), 216-219 (2013).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregabalin+for+the+treatment+of+syringomyelia-associated+neuropathic+pain+in+dogs:+A+randomized,+placebo-controlled,+double-masked+clinical+trial.">Pregabalin for the treatment of syringomyelia-associated neuropathic pain in dogs: A randomized, placebo-controlled, double-masked clinical trial.</a> The Veterinary Journal. 250, 55-62 (2019).</li><li>Brydges, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+assessments+of+increased+sensory+sensitivity+in+dogs+with+cranial+cruciate+ligament+rupture.">Clinical assessments of increased sensory sensitivity in dogs with cranial cruciate ligament rupture.</a> The Veterinary Journal. 193 (2), 546-550 (2012).</li><li>Williams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+thermal+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs+and+dogs+with+hind+limb+osteoarthritis-associated+pain.">Feasibility and repeatability of thermal quantitative sensory testing in normal dogs and dogs with hind limb osteoarthritis-associated pain.</a> The Veterinary Journal. 199, 63-67 (2014).</li><li>Freire, M., Knazovicky, D., Case, B., Thomson, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+thermal+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+client-owned+dogs+with+chronic+naturally+occurring+pain+and+normal+dogs.">Comparison of thermal and mechanical quantitative sensory testing in client-owned dogs with chronic naturally occurring pain and normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 210, 95-97 (2016).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+somatosensory+sensitivity+in+naturally+occurring+canine+model+of+osteoarthritis.">Widespread somatosensory sensitivity in naturally occurring canine model of osteoarthritis.</a> Pain. 157 (6), 1325-1332 (2016).</li><li>Lascelles, B. D. X., Cripps, P. J., Jones, A., Waterman, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+central+hypersensitivity+and+pain:+The+pre-emptive+value+of+pethidine+for+ovariohysterectomy.">Post-operative central hypersensitivity and pain: The pre-emptive value of pethidine for ovariohysterectomy.</a> Pain. 73 (3), 461-471 (1997).</li><li>Slingsby, L. S., Waterman-Pearson, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+post-operative+analgesic+effects+of+ketamine+after+canine+ovariohysterectomy+-+a+comparison+between+pre-+or+post-operative+administration.">The post-operative analgesic effects of ketamine after canine ovariohysterectomy - a comparison between pre- or post-operative administration.</a> Research in Veterinary Medicine. 69 (2), 147-152 (2000).</li><li>Sammarco, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-operative+analgesia+for+stifle+surgery:+A+comparison+of+intra-articular+bupivacaine,+morphine,+or+saline.">Post-operative analgesia for stifle surgery: A comparison of intra-articular bupivacaine, morphine, or saline.</a> Veterinary Surgery. 25 (1), 59-69 (1996).</li><li>Tomas, A., Marcellin-Little, D. J., Roe, S. C., Motsinger-Reif, A., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+mechanical+thresholds+and+limb+use+in+dogs+with+coxofemoral+joint+OA-associated+pain+and+the+modulating+effects+of+pain+alleviation+from+total+hip+replacement+on+mechanical+thresholds.">Relationship between mechanical thresholds and limb use in dogs with coxofemoral joint OA-associated pain and the modulating effects of pain alleviation from total hip replacement on mechanical thresholds.</a> Veterinary Surgery. 43 (5), 542-548 (2014).</li><li>Briley, J. D., Williams, M. D., Freire, M., Griffith, E. H., Lascelles, B. D. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+and+repeatability+of+cold+and+mechanical+quantitative+sensory+testing+in+normal+dogs.">Feasibility and repeatability of cold and mechanical quantitative sensory testing in normal dogs.</a> The Veterinary Journal. 199 (2), 246-250 (2014).</li><li>Knazovicky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicate+effects+and+test-retest+reliability+of+quantitative+sensory+threshold+testing+in+dogs+with+and+without+chronic+pain.">Replicate effects and test-retest reliability of quantitative sensory threshold testing in dogs with and without chronic pain.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 615-624 (2017).</li><li>Sanchis-Mora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+initial+validation+of+a+sensory+threshold+examination+protocol+(STEP)+for+phenotyping+canine+pain+syndromes.">Development and initial validation of a sensory threshold examination protocol (STEP) for phenotyping canine pain syndromes.</a> Veterinary Anesthesia and Analgesia. 44 (3), 600-614 (2017).</li><li>Backonja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+quantitative+sensory+testing+in+neurological+and+pain+disorders:+NeuPSIG+consensus.">Value of quantitative sensory testing in neurological and pain disorders: NeuPSIG consensus.</a> Pain. 154 (9), 1807-1819 (2013).</li><li>Wylde, V., Palmer, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatosensory+abnormalities+in+knee+OA.">Somatosensory abnormalities in knee OA.</a> Rheumatology. 51 (3), 535-543 (2012).</li></ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

É crucial para a obtenção de dados precisos - que reflitam os limiares sensoriais do cão - que o cão esteja o mais calmo, relaxado e posicionado adequadamente possível para cada medição. Um estudo anterior observou que a agitação por contenção ou distração de fatores dentro ou fora do ambiente de teste afetou as respostas dos cães aos estímulos QST16. Se o cão ficar agitado por decúbito ou contenção ou estiver distraído, o cão deve ter tempo para se acomodar antes de uma medi...

O teste sensorial quantitativo (QST) avalia as respostas eliciadas por estímulos aplicados externamente; É utilizado para avaliar a função do sistema somatossensorial em humanos eanimais1. Estímulos mecânicos na forma de pressão puntiforme ou pressão profunda são aplicados como um estímulo rampa. O limiar sensorial é determinado como a força que evoca uma resposta psicofísica1. Estímulos térmicos quentes ou frios podem ser usados como estímulo em rampa ou como estímulo de intensidade fixa. O limiar sensorial é determinado como a temperatura na qual há uma resposta ou a latência para responder ao estímulo. Os limiares sensoriais de pressão puntiforme são medidos usando anestesiômetros eletrônicos de von Frey ou filamentos de cabelo de von Frey, a pressão profunda é medida usando algômetros de pressão portáteis e os limiares sensoriais térmicos são determinados usando uma variedade de sistemas de termóis de contato.
O QST fornece informações sobre o funcionamento das vias sensoriais periféricas e centrais e pode ser usado para avaliar alterações nessas vias sensoriais (algoplasticidade) em vários processos patológicos, particularmente naqueles que causam dor crônica1. Os corpúsculos de Meissner detectam pressão puntiforme, e a sensação é transmitida por fibras aferentes Aβ em níveis não nocivos e fibras aferentes Aδ quando o estímulo é de intensidade nociva 1,2. A pressão profunda é detectada pelos corpúsculos pacinianos e transmitida pelas fibras aferentes C, o calor nocivo é detectado pelos corpúsculos de Ruffini e transmitido pelas fibras aferentes Aδ e C, e o frio nocivo é detectado pelos corpúsculos de Krause e transmitido pelas fibras aferentes C 1,2. O QST pode ser usado para detectar tanto a inibição (diminuição da sensibilidade, hipoestesia) quanto a facilitação (aumento da sensibilidade, hiperestesia) desses receptores e vias. Em cães, o QST tem sido utilizado para avaliar alterações nos limiares sensoriais secundárias à lesão medular aguda 3,4,5, malformação Chiari-símile e siringomielia6, ruptura do ligamento cruzado cranial5,7 e osteoartrite (OA)8,9,10. Além disso, alguns estudos utilizaram o QST para avaliar o alívio da dor proporcionado por determinados analgésicos 6,11,12,13 e procedimentos cirúrgicos 14. Esses estudos forneceram informações importantes sobre os mecanismos de sensação de dor em cães, como evidências de sensibilização periférica e central após cirurgia e doenças que causam estados de dor crônica, como ruptura do ligamento cruzado cranial e OA. Essas informações podem ajudar a melhorar a detecção e o tratamento da dor em cães.
Estudos de validação do QST mecânico e térmico quente em cães mostraram boa viabilidade, repetibilidade e confiabilidade dos resultados do QST ao longo do tempo em cães normais e cães com dor crônica decorrente de OA 8,9,15,16. Entretanto, vários estudos têm encontrado baixa repetibilidade e confiabilidade do QST térmico a frio e, ocasionalmente, do de von Frey1,15,17. Esses estudos utilizaram diferentes equipamentos e metodologias, mas forneceram evidências de que o QST mecânico e térmico quente é um método semiquantitativo e acurado de medição de limiares sensoriais em cães. No entanto, a atenção a detalhes precisos, incluindo o ajuste das medidas, é fundamental para otimizar o QST em cães, necessitando de um protocolo padronizado para o QST. Sanchis-Mora e col. detalharam um protocolo de exame de limiar sensorial (STEP) para QST térmico mecânico e quente e frio, mas encontraram dificuldade com cães que não respondem ao QST térmico frio ou ao filamento de von Frey de maior força de grama usado no estudo17. O protocolo a seguir fornece um método padrão para QST mecânico e térmico quente em cães; Este protocolo pode avaliar os limiares sensoriais em cães normais ou com vários processos patológicos que afetam o sistema somatossensorial. O desenvolvimento de protocolos padronizados pode permitir a comparação de resultados entre estudos e meta-análises de dados para melhorar a utilidade do QST em medicina veterinária.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Electronic von Frey anesthesiometer</td>
			<td>IITC Life Science Inc.</td>
			<td>Item # 23931</td>
			<td>Custom made with a 1000g max force load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medoc Main Station software</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>(supplied with TSA-II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMALGO: SMall Animal ALGOmeter</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>Model VETALGO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA-II NeuroSensory Analyzer</td>
			<td>Medoc</td>
			<td>DC 00072 TSA-II</td>
			<td>No longer manufactured - new model is TSA-2 with same probes and same function</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of sensory thresholds in dogs using mechanical and hot thermal quantitative sensory testing

O teste sensorial quantitativo (QST) é utilizado para avaliar a função do sistema somatossensorial em cães, avaliando a resposta a estímulos mecânicos e térmicos aplicados. O QST é usado para determinar os limiares sensoriais normais de cães e avaliar alterações nas vias sensoriais periféricas e centrais causadas por vários estados patológicos, incluindo osteoartrite, lesão medular e ruptura do ligamento cruzado cranial. Os limiares sensoriais mecânicos são medidos por anestesiômetros eletrônicos de von Frey e algômetros de pressão. Eles são determinados como a força na qual o cão exibe uma resposta indicando a percepção consciente do estímulo. Os limiares sensoriais térmicos quentes são a latência para responder a um estímulo de temperatura fixa ou rampa aplicada por um termodo de contato.
Seguir um protocolo consistente para a realização do QST e prestar atenção aos detalhes do ambiente de teste, procedimento e sujeitos individuais do estudo são fundamentais para obter resultados precisos de QST para cães. Protocolos para a coleta padronizada de dados de QST em cães não foram descritos em detalhes. O QST deve ser realizado em um ambiente silencioso, livre de distrações e confortável para o cão, o operador do QST e o adestrador. Garantir que o cão esteja calmo, relaxado e posicionado corretamente para cada medição ajuda a produzir respostas confiáveis e consistentes aos estímulos e torna o processo de teste mais gerenciável. O operador e o adestrador de QST devem estar familiarizados e confortáveis com o manuseio de cães e a interpretação das respostas comportamentais dos cães a estímulos potencialmente dolorosos para determinar o desfecho do teste, reduzir o estresse e manter a segurança durante o processo de teste.

O QST mecânico e térmico tem sido realizado para detectar limiares sensoriais em cães de pesquisa e de propriedade do cliente sob várias condições clínicas, incluindo cães normais e saudáveis, cães com condições cronicamente dolorosas como OA, cães com lesão medular aguda e para avaliar a dor pós-operatória e a eficácia dos analgésicos. Embora haja um crescente corpo de trabalho sobre QST em cães, nenhuma faixa normal de valores foi estabelecida para quaisquer modalidades de teste. No entanto, vários ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing at JoVE.com

Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

Este trabalho descreve um protocolo padrão para testes sensoriais quantitativos mecânicos e térmicos a quente para avaliar o sistema somatossensorial em cães. Os limiares sensoriais são medidos usando anestesiômetro eletrônico de von Frey, algômetro de pressão e termo de contato quente.

Avaliação dos Limiares Sensoriais em Cães Utilizando Testes Sensoriais Quantitativos Mecânicos e Térmicos a Quente

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical ...

assessment-sensory-thresholds-dogs-using-mechanical-hot-thermal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

2.1K visualizações.  North Carolina State University. Este trabalho descreve um protocolo padrão para testes sensoriais quantitativos mecânicos e térmicos a quente para avaliar o sistema somatossensorial em cães. Os limiares sensoriais são medidos usando anestesiômetro eletrônico de von Frey, algômetro de pressão e termo de contato quente.

Vídeo: Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and learning and memory. There are four known families of PKC isoforms in vertebrates: classical PKCs (&alpha;, &beta;I, &beta;II and &gamma;), novel type I PKCs (&#949; and &eta;), novel type II PKCs (&delta; and &theta;), and atypical PKCs (&zeta; and &iota;). The classical PKCs are activated by Ca2+ and diacylclycerol (DAG), while the novel PKCs are activated by DAG, but are Ca2+-independent. The atypical PKCs are activated by neither Ca2+ nor DAG. In Aplysia californica, our model system to study memory formation, there are three nervous system specific PKC isoforms one from each major class, namely the conventional PKC Apl I, the novel type I PKC Apl II and the atypical PKC Apl III. PKCs are lipid-activated kinases and thus activation of classical and novel PKCs in response to extracellular signals has been frequently correlated with PKC translocation from the cytoplasm to the plasma membrane. Therefore, visualizing PKC translocation in real time in live cells has become an invaluable tool for elucidating the signal transduction pathways that lead to PKC activation. For instance, this technique has allowed for us to establish that different isoforms of PKC translocate under different conditions to mediate distinct types of synaptic plasticity and that serotonin (5HT) activation of PKC Apl II requires production of both DAG and phosphatidic acid (PA) for translocation 1-2. Importantly, the ability to visualize the same neuron repeatedly has allowed us, for example, to measure desensitization of the PKC response in exquisite detail 3. In this video, we demonstrate each step of preparing Sf9 cell cultures, cultures of Aplysia sensory neurons have been described in another video article 4, expressing fluorescently tagged PKCs in Sf9 cells and in Aplysia sensory neurons and live-imaging of PKC translocation in response to different activators using laser-scanning microscopy.

In this video, we demonstrate visualization of PKC translocation in living cells using fluorescently tagged PKCs.

Live-imagem de translocação da PKC em células Sf9 e em neurônios sensoriais Aplysia

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Neurociência

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

Em células vivas, imagens de células precursoras de órgãos sensoriais na Intact Drosophila As pupas

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the olfactory bulb (OB). The molecular mechanisms of OSN axon growth and targeting are not well understood. Manipulating gene expression and subsequent 
visualizing of single OSN axons and their terminal arbor morphology have thus far been challenging. To study gene function at the single cell level within a specified 
time frame, we developed a lentiviral based technique to manipulate gene expression in OSNs in vivo. Lentiviral particles are delivered to OSNs by microinjection 
into the olfactory epithelium (OE). Expression cassettes are then permanently integrated into the genome of transduced OSNs. Green fluorescent protein expression 
identifies infected OSNs and outlines their entire morphology, including the axon terminal arbor. Due to the short turnaround time between microinjection and 
reporter detection, gene function studies can be focused within a very narrow period of development. With this method, we have detected GFP expression within as 
few as three days and as long as three months following injection. We have achieved both over-expression and shRNA mediated knock-down by lentiviral microinjection. 
This method provides detailed morphologies of OSN cell bodies and axons at the single cell level in vivo, and thus allows characterization of candidate gene function 
during olfactory development.

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

We present a lentiviral technique for genetic manipulation and visualization of single olfactory sensory neuron axon and its terminal arborization in vivo.

Lentivírus mediada Manipulação Genética e Visualização de Olfactory neurônios sensoriais In vivo</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic development and axonal wiring. Recently the dendritic arborization (DA) sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system (PNS) have become powerful genetic models in which to elucidate both general and class-specific mechanisms of neuron differentiation.
There are four main DA neuron classes (I-IV)1. They are named in order of increasing dendrite arbor complexity, and have class-specific differences in the genetic control of their differentiation2-10. The DA sensory system is a practical model to investigate the molecular mechanisms behind the control of dendritic morphology11-13 because: 1) it can take advantage of the powerful genetic tools available in the fruit fly, 2) the DA neuron dendrite arbor spreads out in only 2 dimensions beneath an optically clear larval cuticle making it easy to visualize with high resolution in vivo, 3) the class-specific diversity in dendritic morphology facilitates a comparative analysis to find key elements controlling the formation of simple vs. highly branched dendritic trees, and 4) dendritic arbor stereotypical shapes of different DA neurons facilitate morphometric statistical analyses.
DA neuron activity modifies the output of a larval locomotion central pattern generator14-16. The different DA neuron classes have distinct sensory modalities, and their activation elicits different behavioral responses14,16-20. Furthermore different classes send axonal projections stereotypically into the Drosophila larval central nervous system in the ventral nerve cord (VNC)21. These projections terminate with topographic representations of both DA neuron sensory modality and the position in the body wall of the dendritic field7,22,23. Hence examination of DA axonal projections can be used to elucidate mechanisms underlying topographic mapping7,22,23, as well as the wiring of a simple circuit modulating larval locomotion14-17.
We present here a practical guide to generate and analyze genetic mosaics24 marking DA neurons via MARCM (Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker)1,10,25 and Flp-out22,26,27 techniques (summarized in Fig. 1).

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

The dendritic arborization sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system are useful models to elucidate both general and neuron class-specific mechanisms of neuron differentiation. We present a practical guide to generate and analyze dendritic arborization neuron genetic mosaics.

Análise morfológica de Drosophila Larval sensorial periférica Dendrites Neuron e axônios Usando Mosaicos Genéticos

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

Monte todo imunomarcação de Neurônios Receptores Olfatórios no<em&gt; Drosophila</em&gt; Antena

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

Avaliação da hiperalgesia induzida por morfina e analgésicos Tolerância em ratos usando térmicas e mecânicas nociceptivos Modalidades

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is required to shape functional neuronal circuits. The protocol described here explains how to use cell culture inserts bearing a porous membrane (filter) to obtain large amounts of pure axonal preparations suitable for examination by conventional biochemical or immunocytochemical techniques. The functionality of these filter inserts will be demonstrated with models of developmental pruning and Wallerian degeneration, using explants of embryonic dorsal root ganglion. Axonal integrity and function is compromised in a wide variety of neurodegenerative pathologies. Indeed, it is now clear that axonal dysfunction appears much earlier in the course of the disease than neuronal soma loss in several neurodegenerative diseases, indicating that axonal-specific processes are primarily targeted in these disorders. By obtaining pure axonal samples for analysis by molecular and biochemical techniques, this technique has the potential to shed new light into mechanisms regulating the physiology and pathophysiology of axons. This in turn will have an impact in our understanding of the processes that drive degenerative diseases of the nervous system.

This article describes a neuronal culture system that can be used to obtain large quantities of pure axonal samples for biochemical and immunocytochemical analyses. This technique will allow an improved understanding of normal axonal physiology and signaling pathways leading to neurodegeneration.

Produção e Isolamento de axônios de neurônios sensoriais para análise bioquímica Usando filtros porosos

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Comportamentos olfativos ensaiadas pelo monitoramento do computador de<em&gt; Drosophila</em&gt; Em um olfatômetro de quatro quadrantes

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Dynamic Quantitative Sensory Testing to Characterize Central Pain Processing

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain processing is present in many chronic pain conditions and can influence responses to specific therapies. Thus, the ability to precisely describe the state of central pain processing has profound clinical significance in both prognosis and prediction. Because it is not practical to record neuronal firings directly in the human spinal cord, surrogate behavior tests become an important tool to assess the state of central pain processing. Dynamic QST is one such test, and can probe both the ascending facilitation and descending modulation of incoming nociceptive signals via TS and CPM, respectively. Due to the large between-individual variability in the sensitivity to noxious signals, standardized TS and CPM tests may not yield any meaningful data in up to 50% of the population due to floor or ceiling effects. We present methodologies to individualize TS and CPM so we can capture these measures in a broader range of individuals than previously possible. We have used these methods successfully in several studies at the lab, and data from one ongoing study will be presented to demonstrate feasibility and potential applications of the methods.

By assessing pain in response to repetitive or different types of standardized stimuli, dynamic quantitative sensory testing (QST) can reveal changes in the central processing of pain. We present methods to optimize and individualize two dynamic QST measures: temporal summation (TS) and conditioned pain modulation (CPM).

Dinâmica Quantitative Sensory Testing Caracterizar Central Dor Processing

Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American bullfrog, has become a mainstay of auditory and vestibular research. Studies of this organ have revealed how sensory cells hair can actively detect signals from the environment. Because of these studies, we now better understand the mechanical gating and localization of a hair cell&#39;s transduction channels, calcium&#39;s role in mechanical adaptation, and the identity of hair cell currents. This highly accessible organ continues to provide insight into the workings of hair cells. Here we describe the preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies on its hair cells. We include the complete dissection procedure and provide specific protocols for the preparation of the sacculus in specific contexts. We additionally include representative results using this preparation, including the calculation of a hair bundle&#39;s instantaneous force-displacement relation and measurement of a bundle&#39;s spontaneous oscillation.

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

The American bullfrog&#39;s (Rana catesbeiana) sacculus permits direct examination of hair-cell physiology. Here the dissection and preparation of the bullfrog&#39;s sacculus for biophysical studies is described. We show representative experiments from these hair cells, including the calculation of a bundle&#39;s force-displacement relation and measurement of its unforced motion.