本研究は、四川大学華西口腔病院研究開発プログラム(RD-02-202107)、四川省科学技術支援プログラム(2022NSFSC0743)、四川省ポスドク科学基金会(TB2022005)のH. Huangへの助成金の支援を受けて行われました。

この研究のすべての動物手順は、四川大学西中国口腔病学学校の倫理委員会によってレビューおよび承認されました。本研究では、成体C57BL/6マウス(雌)を用いた。
1.手術の準備
<ol><li>手術に必要な手術器具を集めます:発芽器、眼科用焼灼、顕微手術用ハサミ、顕微手術用ピンセット、注射器、針(26 g x 0.63インチ)(図1A、B)( 材料表を参照)。 注意: 外科的処置の前に、眼科用焼灼、マイクロサージェリーピンセット、マイクロサージェリーハサミなどの手術器具を102.9 kPa(1.05 kg / cm2)および121°Cで20分間オートクレーブします。</li>
	<li>手術用ドレープ、ラテックス手袋、滅菌綿、滅菌シート、滅菌金属ホイル、手術用プラットフォームとしての発泡スチロールボード、輪ゴム(医療用ラテックス手袋を引き裂くことで入手できる)、テープ(図1C)( 材料表を参照)など、必要な手術用品を集めます。 注意:手術野用の注射器や滅菌シートなど、マウスごとに個別の消耗品セットを使用してください。</li>
	<li>手術部位と器具(光源、発泡スチロールボード、温度維持装置、 材料表を参照)をアルコールワイプを使用して清掃します。手順中に必要になる可能性のある器具のノブとハンドルを滅菌金属ホイルで覆います。</li>
	<li>個々の器具を無菌的に開き、手術領域に慎重に配置します。発芽器( 材料表を参照)と、手順中に使用するライトをアクティブにします。眼科用焼灼を発芽器に入れ、250°Cで20分間加熱します。</li>
</ol>2.外科的処置
<ol><li>マウスの固定を行い、以下の手順で口腔を開きます。<ol><li>体重20〜25g、8〜12週齢のメスのC57BL/6Jマウスを選択します。手順を実行する前に、マウスを7日間保管してください。</li>
		<li>ゾレチル50(80 mg / kg)およびキシラジン(5 mg / kg)の腹腔内注射によりマウスに麻酔をかけます( 材料表を参照)。マウスの目に眼科用軟膏を塗ります。つま先をつまむ反応がなくなるまで待ちます。 メモ: マウスは、単独でひっくり返すことができない場合、手順の準備ができています。</li>
		<li>滅菌シートで裏打ちされた発泡スチロールボードにマウスを固定します。テープを使用して、マウスを仰臥位で手術台に結び付けます(図2A)。</li>
		<li>マウスの口腔を開きます。2本の針(26 g x 0.63インチ)を眼窩耳面の前に置き、さらに2本の針をその後ろに置きます。針の周りに輪ゴムを置き、切歯を交差させて口を開いたままにします。マイクロサージェリーピンセットを使用して、口角を平らげて開きます(図2B)。 注意: 硬口蓋がはっきりと露出していることを確認してください。舌を輪ゴムの下に固定して、視野の遮蔽やその後の実験中の火傷を防ぎます。</li>
	</ol></li>
	<li>硬口蓋に口鼻腔瘻(ONF)を作成します(図3A-F)。<ol><li>250°Cで20分間加熱した眼科用焼灼を取り出します。口蓋の正中線と第一小臼歯の線の交点から1mm離して焼灼の先端を置き、正中線の硬口蓋に全層粘膜損傷を作成します。 注意: マウスの舌をやけどしないでください。</li>
		<li>数秒後、焼灼先端の粘膜が白くなったら眼科焼灼を抜去します。</li>
		<li>眼科用焼灼を発芽器に入れ、250°Cで10分間加熱し続けます。前の手順を繰り返して、長さが2.0mm、幅が1.5mmになるまで、端の周りの傷を拡大します。 注意: 各エクステンションは、最後の怪我の端に従う必要があります。ノギスを使用して、怪我の長さと幅を測定します。怪我は口蓋の10%を覆う必要があります。</li>
		<li>マイクロサージェリーハサミを使用して、創傷の周りの余分な変性軟部組織を取り除きます。滅菌綿を使用して、マウスの出血を止め、吸入窒息を防ぎます。創傷を測定して、正中線で2.0 x 1.5 mmの全層硬口蓋粘膜損傷を形成していることを確認します。</li>
	</ol></li>
</ol>3. 術後のケア
<ol><li>術後覚醒時にメロキシカムをマウスに投与し、5 mg / kg / dの用量で3日間、皮下投与します29。.</li>
	<li>マウスが完全に意識を取り戻すまで、温度維持装置の上にマウスを置きます。 メモ: マウスが呼吸しやすい位置にあることを確認してください。マウスを10〜15分ごとに回転させて、血液が溜まったり、肺葉がつぶれたりするのを防ぎます。マウスが温まったら、ケージに戻します。マウスが消費できるように、ケージの底に滅菌ゼリーと照射された飼料を提供します。</li>
</ol>4.口腔鼻腔瘻の生成の検証
注:口腔鼻腔瘻(ONF)の作成の成功は、外科的処置の7日目に評価されます。
<ol><li>輪ゴム、テープ、注射器、外科用ドレープ、ラテックス手袋、滅菌シート、滅菌金属ホイル、発泡スチロールボードなど、必要な手術用品を準備します。</li>
	<li>無菌状態を維持するために、外科用ドレープと滅菌手袋を着用してください。発泡スチロールボード、光源、温度維持装置をアルコールで消毒します。</li>
	<li>ゾレチル50(80 mg / kg)の腹腔内注射による全身麻酔を誘発します。.つま先をつまむ反応がなくなるまで待ちます。ステップ2.1.3および2.1.4で説明したのと同じ方法を使用して、マウスを固定し、硬口蓋を露出させます。</li>
	<li>解剖学的構造検証は、創傷部位に中隔がまだ見えることを確認し、ONFの作成が成功したことを示します(図4A、B)。</li>
	<li>機能検証を行う:マウスの口腔を閉じ、滅菌シリンジを使用して口腔内に滅菌水を注入します。ONFの生成が成功したのは、マウスの鼻孔から液体が流れたときです。</li>
	<li>マウスが完全に意識を取り戻すまで、温度維持装置(37°C)の上にマウスを置きます。マウスを10〜15分ごとに回転させて、血液が溜まったり、肺葉がつぶれたりするのを防ぎます。</li>
</ol>

口腔鼻瘻研究に有効なマウスモデルの開発

<ol>
	<li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children.">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679 (2019).</li><li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+incidence,+etiology,+and+management+of+palatal+fistula.">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li><li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula.">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li><li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument.">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions.">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique:+postoperative+complications+and+implicating+factors.">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li><li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair:+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques.">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251 (2022).</li><li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting:+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial.">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208 (2021).</li><li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing:+a+systematic+review.">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li><li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies.">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li><li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice.">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028 (2021).</li><li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing.">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient.">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li><li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes:+an+experimental+study+in+dogs.">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li><li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-(L-lactic)+acid+membranes+in+beagle+dogs.">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li><li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing:+A+study+on+Wistar+rats.">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li><li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model.">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60 (2015).</li><li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices.">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li><li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft.">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li><li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs.">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li><li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs.">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease.">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li><li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+(VEGF)+in+palatal+mucosal+wound+healing.">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li><li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model.">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li><li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research:+a+systematic+review+(2000+-+2020).">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li></ol>

著者は何も開示していません。

研究者は、ONF 10、11、12、13、14、15、16、17を治療するためのさまざまな材料、薬物、および新しい技術を探求してきました。外科的処置の進歩により、ONFの発生率と再発は減少しています。し...

口腔と鼻腔の間の異常な開口部である口腔瘻(ONF)は、臨床的には歯槽突起から口蓋垂までの構造領域の欠損として現れ、口蓋裂修復後の合併症として一般的に発生します1。ONFの患者は、食物逆流、構音障害、および咽頭機能障害を経験し、生活の質に大きな影響を与えます2,3,4。術後ONFの割合は、裂け目の幅、Veauタイプ、および手術方法5,6,7,8などの要因により、2.4%から55%の範囲です。さらに、ONF修復後の再発率は0%から43%の範囲で高くなっています9。
最近、さまざまな材料、薬物、および新しい技術を含む、いくつかの新しい治療法がONFの分野で有望であることが示されています10,11,12,13,14,15,16,17。治療効果の正確な評価は、ONF治療の選択とさらなる開発の基礎となるため、不可欠です。しかし、ONFの特性は患者によって異なるため、手術以外の治療効果について短期的に有効な評価を得ることは困難です。したがって、これらの治療法の有効性を検証するためには、ONF疾患モデルの確立が必要である。
数十年にわたり、研究者は、ラット18,19、子豚20,21、ミニブタ22、イヌ23など、さまざまな動物種で口鼻瘻(ONF)モデルを作成してきました。しかし、マウスはヒトと類似した遺伝子配列と全ゲノムを持っているため、新薬の研究開発のための重要なモデルとなっています24,25,26。さらに、マウスはバッチ間のばらつきがほとんどないため、ONFモデル12,13,27を確立するのに有利な選択肢となります。
ただし、ONFを作成するための詳細な手順は記載されておらず、ONFサイズの安定性は考慮されていませんでした。さらに、ONF形成の検証は観察のみに依存しており、口腔と鼻腔の間の直接的なコミュニケーションは保証されていませんでした28。ONFによる摂食困難によるマウスの体重減少など、他の手段では実証されなかった。さらに、創傷治癒を促進または阻害する薬物または材料の研究に不可欠な創傷サイズの正常な変動は考慮されていませんでした。したがって、安定した検証済みのONFモデルを確立することが強く求められています。
本研究の目的は、上記の課題に対応する実用的なONFモデルの開発であり、このプロトコルが口蓋創傷治癒のメカニズムとONFの新しい治療法に関する将来の研究の基礎となることを期待しています。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Germinator</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>66118-20</td>
			<td>Heating and disinfection equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>Allmed</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lights</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>A1813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-B0261</td>
			<td>crushed; 5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical instruments (scissors and tweezers)</td>
			<td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td>
			<td>M-Y-0087</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmologic cautery</td>
			<td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td>
			<td>1.00234E+13</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton,</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile metal foil</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile sheets</td>
			<td>3M</td>
			<td>XH003801129</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td>S-015301</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Bkmamlab</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature maintenance device</td>
			<td>Harvard Apparatus&#160;</td>
			<td>LE-13-2104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>80 mg/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of an oronasal fistula mice model

この研究は、口腔瘻を調査するための実行可能なモデルを開発するために加熱された眼科焼灼を利用する方法を提示します。C57BL/6マウスを用いて、口腔鼻腔瘻(ONF)モデルを確立した。ONFを作製するために、マウスに麻酔をかけ、固定し、硬口蓋を露出させた。外科的処置中、眼科焼灼を使用して硬口蓋の正中線に2.0 x 1.5mmの全層粘膜損傷が誘発されました。実験を成功させるためには、ONFのサイズを制御し、出血を最小限に抑えることが重要でした。ONFモデルの有効性の検証は、解剖学的評価と機能的評価の両方を含む、術後7日目に実施されました。口腔内に鼻中隔が存在し、口腔内に注射した際の鼻孔からの滅菌水の流出により、ONFモデルの確立に成功しました。このモデルは、死亡率が低く、体重が有意に変化し、ONFサイズの変動が最小限であることを特徴とする、実用的で成功した口腔鼻腔瘻を実証しました。今後の研究では、口蓋創傷治癒のメカニズムを解明し、口腔鼻腔瘻の新しい治療法を探求するために、この方法論の採用を検討する可能性があります。

Oronasal fistula (ONF), an abnormal opening between the oral and nasal cavities, clinically manifests as a defect in a structural area from the alveolar process to the uvula, which commonly occurs as a complication following cleft palate repair1. Patients with ONF experience food reflux, articulation disorders, and impaired velopharyngeal function, significantly impacting their quality of life2,3,4. The rate of post-operative ONF ranges from 2.4% to 55% due to factors such as cleft width, Veau type, and surgical method5,6,7,8. Additionally, the recurrence rate after ONF repair is high, ranging from 0% to 43%9.
Several novel treatments have recently shown promise in the field of ONF, including different materials, drugs, and novel techniques10,11,12,13,14,15,16,17. Accurate evaluation of therapeutic effects is essential as it provides the basis for selecting and further developing ONF treatments. However, obtaining a valid assessment in the short term for therapeutic effects other than surgery is challenging, as the characteristics of ONFs vary among different patients. Therefore, establishing an ONF disease model is necessary to verify the effectiveness of these treatment methods.
For several decades, researchers have generated the oronasal fistula (ONF) model in various animal species, including rats18,19, piglets20,21, minipigs22, and dogs23, as these species possess a substantial hard palate suitable for surgical manipulation. However, mice have a genetic sequence and whole genome similar to that of humans, making them an important model for researching and developing new drugs24,25,26. Furthermore, mice offer little variation from batch to batch, making them a favorable choice for establishing the ONF model12,13,27.
However, the detailed steps for creating ONF were not described, and the stability of the ONF size was not taken into consideration. Additionally, the verification of ONF formation relied solely on observation28, without ensuring direct communication between the oral and nasal cavities. It was not demonstrated through other means, such as the mouse&#39;s loss of body weight due to difficulties in eating caused by the ONF. Furthermore, normal variation in wound size was not considered, which is crucial for studies on drugs or materials that promote or inhibit wound healing. Therefore, there is a strong need to establish a stable and validated ONF model.
The objective of this study was to develop a practical ONF model that addresses the aforementioned issues, with the hope that this protocol will serve as the foundation for future research on the mechanisms of palatal wound healing and novel treatments for ONF.

著者スポットライト:口腔鼻瘻のマウスモデルにおける創傷治癒の調査 

口腔鼻腔瘻マウスモデルの確立

Our research has focused on how to establish the stable and standardized mouse model of oronasal fistula. This protocol has also demonstrated the body weight changes, wound size changes, and the histologic features of the oral nasal fistula formation. The current experimental challenges of establishing oronasal fistula models are the mice mortality by suffocation or blood loss as well as the standardization of the wound size.Our protocol significantly reduces the amount of bleeding in mice during surgery relative to the traditional use of a biopsy punch. This reduces the risk of suffocation due to severe bleeding. Additionally, our experimental method is also simpler and less technically sensitive.Our future research aims to focus on observing the inflammatory response during oronasal fistula formation. We also plan on developing novel strategies to reduce the inflammatory response while promoting palatal wound healing to reduce the incidence of oronasal fistula.

この実験法の実現可能性と安定性を評価するために、10匹のマウスで同様の手順を実行し、死亡率、創傷サイズの変化、体重、および組織学的分析に関する観察を行いました。マウスは7日目に安楽死させた。
この手順は低い死亡率を示しました。図1A-Cに示されている眼科焼灼と発芽器は、この実験で使用された主要な器具...

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この記事では、口腔鼻腔瘻のあるマウスモデルを確立するための段階的な手順を概説します。口腔鼻瘻は、加熱された眼科焼灼を使用して硬口蓋の正中線部分を損傷し、口腔と鼻腔の間に開口部を形成することによって作成されました。

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

私たちの研究は、口鼻腔瘻の安定で標準化されたマウスモデルを確立する方法に焦点を当てています。このプロトコルはまた口頭鼻瘻の形成の体重の変化、傷のサイズの変更および組織学の特徴を示しました。口腔瘻モデルを確立するための現在の実験上の課題は、窒息または失血によるマウスの死亡率と、創傷サイズの標準化です。私たちのプロトコルは、従来の生検パンチの使用と比較して、手術中のマウスの出血量を大幅に減らします。これにより、重度の出血による窒息のリスクが軽減されます。さらに、私たちの実験方法もより単純で、技術的にそれほど敏感ではありません。今後の研究では、口腔鼻腔瘻形成時の炎症反応の観察に着目する予定です。また、口蓋創傷治癒を促進しながら炎症反応を軽減するための新しい戦略を開発して、口腔鼻瘻の発生率を減らすことを計画しています。

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Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

805 ビュー.  Sichuan University. 私たちの研究は、口鼻腔瘻の安定で標準化されたマウスモデルを確立する方法に焦点を当てています。このプロトコルはまた口頭鼻瘻の形成の体重の変化、傷のサイズの変更および組織学の特徴を示しました。口腔瘻モデルを確立するための現在の実験上の課題は、窒息または失血によるマウスの死亡率と、創傷サイズの標準化です。私たちのプロトコルは、従来?...