تم دعم هذا العمل من قبل برنامج البحث والتطوير ، ومستشفى غرب الصين لطب الأسنان ، وجامعة سيتشوان (RD-02-202107) ، وبرنامج دعم العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (2022NSFSC0743) ، ومؤسسة سيتشوان لعلوم ما بعد الدكتوراه (TB2022005) منحة إلى H. Huang.

تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية في هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية لكلية غرب الصين لطب الأسنان بجامعة سيتشوان. تم استخدام الفئران البالغة C57BL / 6 (إناث) في هذه الدراسة.
1. التحضير الجراحي
<ol><li>اجمع الأدوات الجراحية اللازمة للإجراء: الإنبات ، الكي العيني ، المقص المجهري ، ملاقط الجراحة المجهرية ، المحاقن ، والإبر (26 جم × 0.63 بوصة) (الشكل 1 أ ، ب) (انظر جدول المواد). ملاحظة: قبل العملية الجراحية ، الأوتوكلاف الأدوات الجراحية ، بما في ذلك الكي العيني ، وملاقط الجراحة المجهرية ، ومقص الجراحة المجهرية ، عند 102.9 كيلو باسكال (1.05 كجم / سم2) و 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.</li>
	<li>اجمع المستلزمات الجراحية المطلوبة: الستائر الجراحية ، وقفازات اللاتكس ، والقطن المعقم ، والصفائح المعقمة ، والرقائق المعدنية المعقمة ، ولوح الرغوة كمنصة جراحية ، والأربطة المطاطية (التي يمكن الحصول عليها عن طريق تمزيق قفاز اللاتكس الطبي) ، والشريط (الشكل 1 ج) (انظر جدول المواد). ملاحظة: استخدم مجموعة منفصلة من المستلزمات لكل ماوس ، بما في ذلك المحاقن والأغطية المعقمة للمجال الجراحي.</li>
	<li>نظف المنطقة الجراحية والجهاز (مصدر الضوء ، لوح الرغوة ، وجهاز صيانة درجة الحرارة ، انظر جدول المواد) باستخدام مناديل الكحول. قم بتغطية مقابض ومقابض الأدوات التي قد تكون مطلوبة أثناء الإجراء بورق معدني معقم.</li>
	<li>افتح الأدوات الفردية بشكل معقم وضعها بعناية في منطقة الجراحة. قم بتنشيط germinator (انظر جدول المواد) والأضواء للاستخدام أثناء الإجراء. ضع كي العيون في الإنبات وقم بتسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.</li>
</ol>2. الإجراء الجراحي
<ol><li>قم بإجراء تثبيت الماوس وافتح تجويف الفم باتباع الخطوات أدناه.<ol><li>حدد أنثى ماوس C57BL / 6J تزن 20-25 جم وتتراوح أعمارها بين 8 و 12 أسبوعا. منزل الماوس لمدة 7 أيام قبل إجراء أي إجراءات.</li>
		<li>تخدير الفأر عن طريق الحقن داخل الصفاق ل Zoletil50 (80 ملغم / كغم) و Xylazine (5 ملغ / كغ) (انظر جدول المواد). تطبيق مرهم العين العينية على عين الماوس. انتظر حتى لا يكون هناك استجابة قرصة إصبع القدم. ملاحظة: الماوس جاهز للإجراء عندما يكون غير قادر على الدوران بشكل مستقل.</li>
		<li>ثبت الماوس على لوح رغوي مبطن بألواح معقمة. استخدم الشريط لربط الماوس بالمنصة الجراحية في وضع ضعيف (الشكل 2 أ).</li>
		<li>افتح تجويف الفم للماوس. ضع إبرتين (26 جم × 0.63 بوصة) أمام مستوى الأذن المدارية واثنتين أخريين خلفها. ضع شريطا مطاطيا حول الإبر واعبر القواطع لإبقاء الفم مفتوحا. استخدم ملاقط الجراحة المجهرية لدعم فتح زوايا الفم (الشكل 2 ب). ملاحظة: تأكد من أن الحنك الصلب مكشوف بوضوح. ثبت اللسان تحت الشريط المطاطي لمنع انسداد مجال الرؤية والحرق أثناء التجارب اللاحقة.</li>
	</ol></li>
	<li>قم بإنشاء الناسور الفموي الأنفي (ONF) على الحنك الصلب (الشكل 3A-F).<ol><li>استرجع الكي العيني الذي تم تسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ضع طرف الكي على بعد 1 مم من تقاطع خط الوسط للحنك وخط الضاحك الأول ، مما يؤدي إلى إصابة مخاطية كاملة السماكة للحنك الصلب في خط الوسط. ملاحظة: تجنب حرق لسان الماوس.</li>
		<li>بعد بضع ثوان ، قم بإزالة الكي العيني عندما يتحول الغشاء المخاطي حول طرف الكي إلى اللون الأبيض.</li>
		<li>ضع الكي العيني في المنبت واستمر في تسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. كرر الخطوة السابقة لتكبير الجرح حول الحواف حتى يصل طوله إلى 2.0 مم وعرضه 1.5 مم. ملاحظة: يجب أن يتبع كل امتداد حافة الإصابة الأخيرة. استخدم الفرجار ذو الورنية لقياس طول وعرض الإصابة. يجب أن تغطي الإصابة 10 ٪ من الحنك.</li>
		<li>استخدم مقص الجراحة المجهرية لإزالة أي أنسجة رخوة مشوهة زائدة حول الجرح. استخدم القطن المعقم لوقف النزيف ومنع اختناق الماوس بالاستنشاق. قم بقياس الجرح للتأكد من أنه يشكل إصابة مخاطية حنكية صلبة كاملة السماكة بقياس 2.0 × 1.5 مم في خط الوسط.</li>
	</ol></li>
</ol>3. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>تطبيق ميلوكسيكام للفأر في وقت الاستيقاظ بعد العملية الجراحية، بجرعة 5 ملغ/كغ/يوم لمدة 3 أيام،تحت الجلد 29.</li>
	<li>ضع الماوس على جهاز صيانة درجة الحرارة حتى يستعيد وعيه بالكامل. ملاحظة: تأكد من وضع الماوس بطريقة تسهل التنفس. قم بتدوير الفئران كل 10-15 دقيقة لمنع تجمع الدم أو انهيار فصوص الرئة. بمجرد تسخين الماوس ، أعده إلى قفصه. توفير هلام معقم وتغذية مشعة في الجزء السفلي من القفص للفئران لتستهلك.</li>
</ol>4. التحقق من خلق الناسور الفموي الأنفي
ملاحظة: يتم تقييم نجاح إنشاء الناسور الفموي الأنفي (ONF) في اليوم 7 بعد العملية الجراحية.
<ol><li>تحضير المستلزمات الجراحية اللازمة: الشريط المطاطي ، الشريط ، المحاقن ، الستائر الجراحية ، قفازات اللاتكس ، الألواح المعقمة ، الرقائق المعدنية المعقمة ، ولوح الرغوة.</li>
	<li>ارتداء الستائر الجراحية والقفازات المعقمة للحفاظ على الظروف المعقمة. قم بتطهير لوح الرغوة ومصدر الضوء وجهاز صيانة درجة الحرارة بالكحول.</li>
	<li>تحفيز التخدير العام عن طريق الحقن داخل الصفاق من زوليتيل 50 (80 ملغ/كغ). انتظر حتى لا يكون هناك استجابة قرصة إصبع القدم. استخدم نفس الطريقة الموضحة في الخطوتين 2.1.3 و 2.1.4 لشل حركة الماوس وكشف الحنك الصلب.</li>
	<li>قم بإجراء التحقق الهيكلي التشريحي من خلال التأكد من أن الحاجز لا يزال مرئيا في موقع الجرح ، مما يشير إلى نجاح إنشاء ONF (الشكل 4 أ ، ب).</li>
	<li>إجراء التحقق الوظيفي: أغلق تجويف الفم للماوس وحقن الماء المعقم في تجويف الفم باستخدام حقنة معقمة. يتم تأكيد الإنشاء الناجح ل ONF عندما يتدفق السائل من أنف الماوس.</li>
	<li>ضع الماوس على جهاز صيانة درجة الحرارة (37 درجة مئوية) حتى يستعيد وعيه بالكامل. قم بتدوير الفئران كل 10-15 دقيقة لمنع تجمع الدم أو انهيار فصوص الرئة.</li>
</ol>

تطوير نموذج فعال للفئران لدراسة الناسور الفموي الأنفي

<ol>
	<li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children.">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679 (2019).</li><li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+incidence,+etiology,+and+management+of+palatal+fistula.">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li><li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula.">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li><li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument.">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions.">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique:+postoperative+complications+and+implicating+factors.">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li><li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair:+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques.">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251 (2022).</li><li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting:+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial.">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208 (2021).</li><li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing:+a+systematic+review.">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li><li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies.">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li><li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice.">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028 (2021).</li><li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing.">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient.">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li><li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes:+an+experimental+study+in+dogs.">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li><li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-(L-lactic)+acid+membranes+in+beagle+dogs.">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li><li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing:+A+study+on+Wistar+rats.">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li><li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model.">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60 (2015).</li><li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices.">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li><li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft.">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li><li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs.">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li><li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs.">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease.">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li><li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+(VEGF)+in+palatal+mucosal+wound+healing.">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li><li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model.">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li><li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research:+a+systematic+review+(2000+-+2020).">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

استكشف الباحثون العديد من المواد والأدوية والتقنيات الجديدة لعلاج ONF10،11،12،13،14،15،16،17. مع التقدم في العمليات الجراحية ، تم تقليل حدوث وتكرار O...

الناسور الفموي الأنفي (ONF) ، وهو فتحة غير طبيعية بين تجاويف الفم والأنف ، يظهر سريريا كعيب في منطقة هيكلية من العملية السنخية إلى اللهاة ، والتي تحدث عادة كمضاعفات بعد إصلاح الحنك المشقوق1. يعاني المرضى الذين يعانون من ONF من ارتجاع الطعام واضطرابات النطق وضعف وظيفة البلعوم ، مما يؤثر بشكل كبير على نوعية حياتهم2،3،4. يتراوح معدل ONF بعد الجراحة من 2.4٪ إلى 55٪ بسبب عوامل مثل عرض الشق ونوع Veau والطريقة الجراحية5،6،7،8. بالإضافة إلى ذلك ، فإن معدل التكرار بعد إصلاح ONF مرتفع ، يتراوح من 0٪ إلى 43٪ 9.
أظهرت العديد من العلاجات الجديدة مؤخرا واعدة في مجال ONF ، بما في ذلك المواد المختلفة والأدوية والتقنيات الجديدة 10،11،12،13،14،15،16،17. يعد التقييم الدقيق للآثار العلاجية أمرا ضروريا لأنه يوفر الأساس لاختيار علاجات ONF وتطويرها. ومع ذلك ، فإن الحصول على تقييم صالح على المدى القصير للآثار العلاجية بخلاف الجراحة يمثل تحديا ، حيث تختلف خصائص ONFs بين المرضى المختلفين. لذلك ، يعد إنشاء نموذج مرض ONF ضروريا للتحقق من فعالية طرق العلاج هذه.
لعدة عقود ، ابتكر الباحثون نموذج الناسور الفموي الأنفي (ONF) في أنواع حيوانية مختلفة ، بما في ذلك الفئران18،19 ، والخنازيرالصغيرة 20،21 ، والخنازيرالصغيرة 22 ، 23 ، حيث تمتلك هذه الأنواع حنكا صلبا كبيرا مناسبا للتلاعب الجراحي. ومع ذلك ، فإن الفئران لديها تسلسل جيني وجينوم كامل مشابه لجينوم البشر ، مما يجعلها نموذجا مهما للبحث وتطوير أدوية جديدة24،25،26. علاوة على ذلك ، تقدم الفئران اختلافا طفيفا من دفعة إلى أخرى ، مما يجعلها خيارا مناسبا لإنشاء نموذج ONF12،13،27.
ومع ذلك ، لم يتم وصف الخطوات التفصيلية لإنشاء ONF ، ولم يتم أخذ استقرار حجم ONF في الاعتبار. بالإضافة إلى ذلك ، اعتمد التحقق من تكوين ONF فقط على الملاحظة28 ، دون ضمان الاتصال المباشر بين تجاويف الفم والأنف. لم يتم إثبات ذلك من خلال وسائل أخرى ، مثل فقدان الفأر لوزن الجسم بسبب صعوبات في الأكل بسبب ONF. علاوة على ذلك ، لم يتم النظر في الاختلاف الطبيعي في حجم الجرح ، وهو أمر بالغ الأهمية للدراسات حول الأدوية أو المواد التي تعزز أو تمنع التئام الجروح. لذلك ، هناك حاجة ماسة لإنشاء نموذج ONF مستقر ومصدق عليه.
كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير نموذج عملي ل ONF يعالج القضايا المذكورة أعلاه ، على أمل أن يكون هذا البروتوكول بمثابة أساس للبحث المستقبلي حول آليات التئام الجروح الحنكية والعلاجات الجديدة ل ONF.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Germinator</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>66118-20</td>
			<td>Heating and disinfection equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>Allmed</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lights</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>A1813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-B0261</td>
			<td>crushed; 5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical instruments (scissors and tweezers)</td>
			<td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td>
			<td>M-Y-0087</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmologic cautery</td>
			<td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td>
			<td>1.00234E+13</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton,</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile metal foil</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile sheets</td>
			<td>3M</td>
			<td>XH003801129</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td>S-015301</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Bkmamlab</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature maintenance device</td>
			<td>Harvard Apparatus&#160;</td>
			<td>LE-13-2104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>80 mg/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of an oronasal fistula mice model

تقدم هذه الدراسة طريقة تستخدم الكي العيني الساخن لتطوير نموذج قابل للتطبيق لفحص الناسور الفموي الأنفي. تم استخدام الفئران C57BL / 6 لإنشاء نموذج الناسور الفموي الأنفي (ONF). لإنشاء ONF ، تم تخدير الفئران وشل حركتها وكشف حنكها الصلب. أثناء العملية الجراحية ، تم إحداث إصابة مخاطية كاملة السماكة 2.0 × 1.5 مم في خط الوسط من الحنك الصلب باستخدام الكي العيني. كان من الضروري التحكم في حجم ONF وتقليل النزيف من أجل ضمان نجاح التجربة. تم التحقق من فعالية نموذج ONF في اليوم 7 بعد العملية ، بما في ذلك التقييمات التشريحية والوظيفية. أكد وجود الحاجز الأنفي داخل تجويف الفم وتدفق الماء المعقم من الخياشيم عند الحقن في تجويف الفم الإنشاء الناجح لنموذج ONF. أظهر النموذج ناسور فموي أنفي عملي وناجح ، يتميز بمعدل وفيات منخفض ، وتغيرات كبيرة في الوزن ، واختلاف ضئيل في حجم ONF. قد تنظر الدراسات المستقبلية في اعتماد هذه المنهجية لتوضيح آليات التئام جروح الحنك واستكشاف علاجات جديدة للناسور الفموي الأنفي.

Oronasal fistula (ONF), an abnormal opening between the oral and nasal cavities, clinically manifests as a defect in a structural area from the alveolar process to the uvula, which commonly occurs as a complication following cleft palate repair1. Patients with ONF experience food reflux, articulation disorders, and impaired velopharyngeal function, significantly impacting their quality of life2,3,4. The rate of post-operative ONF ranges from 2.4% to 55% due to factors such as cleft width, Veau type, and surgical method5,6,7,8. Additionally, the recurrence rate after ONF repair is high, ranging from 0% to 43%9.
Several novel treatments have recently shown promise in the field of ONF, including different materials, drugs, and novel techniques10,11,12,13,14,15,16,17. Accurate evaluation of therapeutic effects is essential as it provides the basis for selecting and further developing ONF treatments. However, obtaining a valid assessment in the short term for therapeutic effects other than surgery is challenging, as the characteristics of ONFs vary among different patients. Therefore, establishing an ONF disease model is necessary to verify the effectiveness of these treatment methods.
For several decades, researchers have generated the oronasal fistula (ONF) model in various animal species, including rats18,19, piglets20,21, minipigs22, and dogs23, as these species possess a substantial hard palate suitable for surgical manipulation. However, mice have a genetic sequence and whole genome similar to that of humans, making them an important model for researching and developing new drugs24,25,26. Furthermore, mice offer little variation from batch to batch, making them a favorable choice for establishing the ONF model12,13,27.
However, the detailed steps for creating ONF were not described, and the stability of the ONF size was not taken into consideration. Additionally, the verification of ONF formation relied solely on observation28, without ensuring direct communication between the oral and nasal cavities. It was not demonstrated through other means, such as the mouse&#39;s loss of body weight due to difficulties in eating caused by the ONF. Furthermore, normal variation in wound size was not considered, which is crucial for studies on drugs or materials that promote or inhibit wound healing. Therefore, there is a strong need to establish a stable and validated ONF model.
The objective of this study was to develop a practical ONF model that addresses the aforementioned issues, with the hope that this protocol will serve as the foundation for future research on the mechanisms of palatal wound healing and novel treatments for ONF.

تسليط الضوء على المؤلف: التحقيق في التئام الجروح في نماذج الفئران من الناسور الفموي الأنفي 

إنشاء نموذج للفئران الناسور الفموي الأنفي

Our research has focused on how to establish the stable and standardized mouse model of oronasal fistula. This protocol has also demonstrated the body weight changes, wound size changes, and the histologic features of the oral nasal fistula formation. The current experimental challenges of establishing oronasal fistula models are the mice mortality by suffocation or blood loss as well as the standardization of the wound size.Our protocol significantly reduces the amount of bleeding in mice during surgery relative to the traditional use of a biopsy punch. This reduces the risk of suffocation due to severe bleeding. Additionally, our experimental method is also simpler and less technically sensitive.Our future research aims to focus on observing the inflammatory response during oronasal fistula formation. We also plan on developing novel strategies to reduce the inflammatory response while promoting palatal wound healing to reduce the incidence of oronasal fistula.

لتقييم جدوى واستقرار هذه الطريقة التجريبية ، تم تنفيذ نفس الإجراء على عشرة فئران ، وتم إجراء ملاحظات بشأن الوفيات ، والتغيرات في حجم الجرح ، ووزن الجسم ، والتحليل النسيجي. تم القتل الرحيم للفئران في اليوم 7.
أظهر الإجراء معدل وفيات منخفض. كان الكي العيني والإنبات ، الموضح في ...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating Wound Healing in Mice Models of Oronasal Fistulas at JoVE.com

توضح هذه المقالة إجراء خطوة بخطوة لإنشاء نموذج الفئران مع الناسور الفموي. تم إنشاء الناسور الفموي الأنفي عن طريق استخدام الكي العيني الساخن لإتلاف جزء خط الوسط من الحنك الصلب ، مما أدى إلى تكوين فتحة بين تجاويف الفم والأنف.

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

ركز بحثنا على كيفية إنشاء نموذج فأر مستقر وموحد للناسور الفموي الأنفي. أظهر هذا البروتوكول أيضا تغيرات وزن الجسم ، وتغيرات حجم الجرح ، والسمات النسيجية لتشكيل الناسور الأنفي الفموي. تتمثل التحديات التجريبية الحالية لإنشاء نماذج الناسور الفموي الأنفي في وفيات الفئران عن طريق الاختناق أو فقدان الدم بالإضافة إلى توحيد حجم الجرح.يقلل بروتوكولنا بشكل كبير من كمية النزيف في الفئران أثناء الجراحة مقارنة بالاستخدام التقليدي لكمة الخزعة. هذا يقلل من خطر الاختناق بسبب النزيف الحاد. بالإضافة إلى ذلك ، فإن طريقتنا التجريبية هي أيضا أبسط وأقل حساسية من الناحية الفنية.يهدف بحثنا المستقبلي إلى التركيز على مراقبة الاستجابة الالتهابية أثناء تكوين الناسور الفموي الأنفي. نخطط أيضا لتطوير استراتيجيات جديدة للحد من الاستجابة الالتهابية مع تعزيز التئام الجروح الحنكية للحد من حدوث الناسور الفموي الأنفي.

establishment-of-an-oronasal-fistula-mice-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

817 Views.  Sichuan University. ركز بحثنا على كيفية إنشاء نموذج فأر مستقر وموحد للناسور الفموي الأنفي. أظهر هذا البروتوكول أيضا تغيرات وزن الجسم ، وتغيرات حجم الجرح ، والسمات النسيجية لتشكيل الناسور الأنفي الفموي. تتمثل التحديات التجريبية الحالية لإنشاء نماذج الناسور الفموي الأنفي في وفيات الفئران عن ط...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: التحقيق في التئام الجروح في نماذج الفئران من الناسور الفموي الأنفي 

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used to establish the oronasal fistula (ONF) model. To create the ONF, the mice were anesthetized, immobilized, and their hard palates were exposed. During the surgical procedure, a 2.0 x 1.5 mm full-thickness mucosal injury was induced in the midline of the hard palate using ophthalmologic cautery. It was crucial to control the size of the ONF and minimize bleeding in order to ensure the success of the experiment. Verification of the ONF model's effectiveness was conducted on the 7th-day post-operation, encompassing both anatomical and functional assessments. The presence of the nasal septum within the oral cavity and the outflow of sterile water from the nostrils upon injection into the oral cavity confirmed the successful establishment of the ONF model. The model demonstrated a practical and successful oronasal fistula, characterized by a low mortality rate, significant weight changes, and minimal variation in ONF size. Future studies may consider adopting this methodology to elucidate the mechanisms of palate wound healing and explore novel treatments for oronasal fistulas.

This article outlines a step-by-step procedure for establishing a mice model with an oronasal fistula. The oronasal fistula was created by employing heated ophthalmologic cautery to damage the midline portion of the hard palate, resulting in the formation of an opening between the oral and nasal cavities.

Development of a Mouse Model for Studying Oronasal Fistula Using Opthalmologic Cautery

Begin by securing an anesthetized female mouse to a foam board covered with sterile sheets. Then, carefully tape the mouse in a supine position to a surgical platform. Position two needles in front of the orbital airplane.Place two more needles behind it. Next, place a rubber band around the needles and cross the incisors to hold the mouth open. Use microsurgical tweezers to prop open the corners of the mouth.Proceed to retrieve the heated ophthalmologic cautery. Now position the cautery tip one millimeter from the midline intersection of the palate and first premolar to create a full thickness mucosal injury to the hard palate. Remove the cautery when the mucosa around the tip turns white.Heat the ophthalmologic cautery to 250 degrees Celsius in the germinator for 10 minutes. Then, place it on the hard palate and enlarge the wound around the edges. Finally, use microsurgical scissors to excise any excess denatured soft tissue surrounding the wound.Afterward, apply sterile cotton to stop bleeding and prevent inhalation asphyxiation in the mouse. Notable variability was observed in the size of the generated oral nasal fistula. The wound size showed a significant variation on the seventh day post-surgery.A significant reduction in the body weights of the mice was also observed on day seven, which is approximately 25%Histological analysis of the oral nasal fistula revealed a loss of hard palate mucosa, denuded bone, and oronasal fistula formation.