빠른 스캔 순환 Voltammetry와 Striatal 뇌 조각의 Presynaptic 도파민 역학

요약

striatal 뇌 조각의 전기적 evoked presynaptic 도파민의 역학을 측정하는 빠른 스캔 순환 voltammetry를 사용하여.

초록

광범위한 연구 때문에 남용 약물 (예 : 코카인과 암페타민), 정신과 질환에가하는 역할 (예 : 정신 분열증 및주의 결여 과다 장애) 및 퇴행성 년에 ​​참여 행동의 메커니즘에서 그 중요성의 신경 전달 물질의 도파민에 주력했다 파킨슨병과 헌팅턴의 질환과 같은 질환. 정상적인 생리 조건에서 도파민은 전위의 활동,인지, 학습, 정서적 영향을, 그리고 neuroendocrine 호르몬 분비를 조절하는 것으로 알려져 있습니다. 도파민 뉴런의 가장 큰 밀도 중 하나는 핵의 accumbens와 꼬리가있는 - putamen으로 알려진 두 개의 neuroanatomical 지역 나눌 수 있습니다 striatum 이내입니다. 목표는 마우스 striatum 이내 슬라이스 빠른 스캔 순환 voltammetry (FSCV)에 대한 일반적인 프로토콜을 설명하는 것입니다. FSCV는 D에 실시간으로 도파민 자료 및 이해를 측정할 수있는 기회를 제공하는 잘 정의된 전기 기술이다iscrete 두뇌 영역. 탄소 섬유 microelectrodes는 (~ 7 μm의 직경) 도파민 산화를 감지 FSCV에 사용됩니다. 도파민을 감지 FSCV를 사용하는 분석 장점은 생체내의 microdialysis에로 보완 정보를 제공 미만보다 10 미크론의 100 밀리초와 공간 해상도, 자사의 향상된 시간적 해상도입니다.

프로토콜

1. 실험 필수

전극 제작

• 대부분 사내에서 만들어진 이후 다수의 탄소 섬유 microelectrodes 제조 방법이 있습니다. 일반적으로 무엇 전극 제조 세부 사항을 지시하면 전극 (예 : amperometry 대 FSCV)에 적용되는 전기 기술입니다. FSCV 들어, microelectrodes는 다음과 같은 3 단계 절차를 사용하여 사내에서 만들 수 있습니다. 탄소 섬유 전극 제조의 자세한 설명을 보려면, 최근 목성의 제 ^1을 참조하십시오. 그러나, 아래에서 설명하는 전극은 상기 프로토콜에서 amperometric 탄소 섬유 microelectrodes 대 조작하는 적은 단계를 필요로 원통형 탄소 섬유 microelectrodes,됩니다. 이 단순화된 프로토콜 아세톤에 탄소 섬유를 끓는 필요하지 않습니다, 유리 모세관을 해고 - 연마, 또는 유리 섬유 접합을 봉인하기 위해 에폭시를 사용하여.
• 진공 흡입 aspir를 사용하여microfilament (; AM 시스템, Carlsborg, WA 길이 10cm를 OD 1.2 mm, ID 0.68 ㎜)와 모세관 borosilicate 유리로, 탄소 섬유 (Goodfellow Oakdale, PA 직경 7 μm의)를 먹었어요.
• 모세관이 절반으로 뽑았있는 전극 풀러 (Narishige, 도쿄, 일본)에 스레드 모세를 놓으십시오. 전극 풀러에 대한 출력 설정은 실험실에서 실험실에 따라 다릅니다 않습니다. 참고로, 풀러를위한 출력 설정은 90.7 주요 자석, 23.2 하위 자석, 및 히터에 대해 53.4 있습니다. 출력 설정이 경험적으로 탄소 섬유 주변 시일와 길이 약 4.4 mm이다 유리 테이퍼를 생성하기 위해 정제되어야합니다.
• 현미경 (올림푸스, 도쿄, 일본), 탄소 섬유의 약 50-200 μm의는 단단히 밀봉 인터페이스에서 내다 수 있도록 유리 팁에서 확장 탄소 섬유 (메스 블레이드를 사용하여) 낸다.

솔루션 준비

인공 cere의 세 가지 유형brospinal 유체 (aCSF) 솔루션은 모든 ultrapure (18 MΩ cm) 물속에서, 사전에 준비해야합니다.

• 자당 - aCSF은 깔끔히 전에 최소한 1 일 이상 준비하실 수 있습니다. 자당 - aCSF 버퍼는 (MM)를 이루어져 : 180 자당, 30 NaCl, 4.5 KCl, 1.0 MgCl _2, 26 NaHCO _3, 1.2 아니 ₂ PO _4, 10 D - 글루코오스 (산도 7.4)와 95를 사용하여 산소해야 십오분 ² % O _{5분의 2} %의 CO _2. 미리 준비하면, 솔루션 4 냉장 보관 수 있습니다 ° C는 최대 1 주일.
• voltammetric 레코딩을위한 ACSF 솔루션은 실험의 하루를 준비한다. 126 NaCl, 2.5 KCl, 2.4 CaCl _2, MgCl ₂ 1.2, 25 NaHCO _3, 1.2 아니 ₂ PO _4, 11 D - 글루코오스, 0.4 아스코르비 산 (산도 7.4) : aCSF 솔루션 (MM)을 구성되어 있습니다. 95% 상온에서 O2 / 5퍼센트 CO _2와 버블링하여 산소 실험의 과정.
• 수정된 -전극 교정이 포함되어 대한 aCSF 솔루션 (MM)을 : 2.5 KCl, 126 NaCl, 1.2 아니 ₂ PO _4, 2.4 CaCl _2, 1.2 MgCl _2, 25 NaHCO ₃ (산도 7.4) 및 최대 일주일위한없이 계속 수 있습니다 냉장 또는 산소.

전극 보정

• 전극 생존과 감도는 봉인 참조 전극 (자세 / AgCl) 3 포트를 포함하는 흐름 "T 세포"를 사용하여 사전 및 사후 교정, 각각에 의해 결정됩니다. 가공 microelectrode은 흐름 'T 세포'로 인하됩니다. 유입 포트는 2 ML / 분의 유량에서 수정된 - aCSF의 지속적인 흐름에 대한 허용, 주사기 펌프에 연결되어 있습니다. "T 세포"의 세 번째 포트 수정 - aCSF에서 만들어진 3 μm의의 도파민, 가득한 주사기에 연결되어 있습니다.
• 미리 보정, 수정 aCSF 솔루션은 약 3에 대한 흐름에 허용 - 7 초 후 수동으로 3 μm의의 도파민 기준 1-2 ML을 주입. 각각의 전극에 대한미리 보정하는, 적어도 3 번 평균 각각에서 얻은 최대한의 전류를 보정을 반복합니다.
• 즉시 슬라이스 voltammetry 실험 후 (제 3 항 참조), 전극 위에 설명한대로 동일한 방식으로 포스트 교정입니다.
• 보정 계수는 (나중에 데이터 분석시 사용) 도파민 표준의 농도에 의해 현재의 평균 도파민 산화 (NA)을 나눔으로써 결정됩니다. 3 μm의 도파민의 표준을 사용하는 경우 예를 들어, 현재의 반응 3로 나눈 값입니다.

2. 슬라이스 준비

1. 얼음 양동이에 작은 비커와 장소로 자당의 aCSF 10 ML 하거라. 또한, 도달 이내에 얼음 양동이에서 개최 인스턴트 접착제 (Loctite 404).
2. 그들이 알코올 패드로 닦아 깨끗이하여, 면도날 등 포셉, 주걱, 그리고 가위로 해부에 필요한 필요한 도구를 준비합니다.
3. 작은 가스 차의 CO ₂ 질식하여 마우스를 희생날카로운 가위를 사용하여 즉각적인 잘린 다음 mber. 신속하게 전체 두뇌를 제거합니다. 약 10 분 동안 얼음처럼 차가운 자당의 aCSF의 비커에 머리를 놓습니다.
4. 그동안 부러 뜨리 Vibratome을 준비합니다. 첫째, 표본 욕조의 일부 얼음 조각을 놓으십시오. 표본 챔버 위치와 장소에 단단히 잡아 조입니다. 아무 얼음은 챔버에 도착하지 못하게하고, 모자란 부분을 채울 표본 챔버 주위에 더 많은 얼음을 추가합니다. Vibratome에 블레이드 홀더에 청소 면도날을 놓고 얼음처럼 차가운 자당의 aCSF와 표본 챔버를 입력하십시오.
5. 뇌를 준비 작업 표면을 설정하려면, upturned 페트리 접시에 배치되었습니다 종이 타월의 한 조각의 일부 차가운 자당의 aCSF을 따라줘. 사용 포셉은 준비된 페트리 접시에 머리를 전송합니다. 코로나 슬라이스 들어, 면도날 및 삭제와 중간 - 측면 축을 따라 소뇌를 잘라. 이것은 Vibratome 무대에 부착된 수있는 평면베이스를 만듭니다.
6. 장소표본 무대에 Loctite 접착제 한 방울 (1 단계 동안 얼음 양동이에 배치). 즉시, 부착 무대에 준비 두뇌의 평면 끝은 가능한 한 똑바로 그것을 유지. 표본 챔버에 무대를 배치하고 두뇌가 완전히 챔버에서 자당의 aCSF에 잠겨 있도록, 나사를 조입니다.
7. Vibratome의 전면에있는 컨트롤을 사용하면 단계를 조정할 수 있도록 두뇌의 상단과 면도날 라인까지. Vibratome에 대한 최적의 매개 변수는 낮은 주파수와 속도를 설정하여 얻을 수 있습니다. 낮은 속도는 빠른 속도로 관찰되는 뇌, 부수에서 블레이드의 힘을 최소화하기 위해 선호하고 있습니다. 슬라이스 두께 400 μm의로 설정되어 있습니다.
8. 처음 몇 조각은 striatum 포함되지 않습니다. striatum을 포함한 조각을 얻을 때까지 깔끔히를 반복합니다. striatal 지역은 (해부 랜드마크로 확인)에 도달하면 함께 비커에 슬라이스와 장소를 리프트하는 페인트 브러시를 사용하여산소, 룸 온도 aCSF. 일반적으로, 하나는 꼬리가있는 - putamen 및 핵의 accumbens이 포함되도록 striatal 복잡한을 포함한 3-4 조각을 얻을 수 있습니다.
9. 조각이 실험에 사용하기 전에 최소 1 시간 동안 실온에서 산소 aCSF에 적응하도록 허용합니다.

3. 조각에서 Voltammetric 녹음

조각이 잠복기 있지만, 슬라이스 녹화 실이 준비하실 수 있습니다.

1. 잠수 기록 챔버 (맞춤 과학, 덴버, CO) 및, 실내 온도 aCSF을 oxygenating에서 개최에 연결된 튜브를 가져가라. 1 ML / 분의 유량에 재관류 펌프 (왓슨 Marlow 제한, Falmouth, 영국)로 설정합니다. 32 ° C.에 온도 컨트롤러를 설정 aCSF 사용자 정의 - 기본 슬라이스 홀더 (메쉬 디스크 단계를 수정) 채우고 후, 바늘 주사기 (BD 척추 바늘)을 사용하는 모든 공기 방울을 제거하여 슬라이스를 위해 준비합니다.
2. 에 진공을 그림으로써 프라임 슬라이스 목욕흐름을 시작하는 주사기를 사용하여 유출 튜브 (유리 액체 폐기물 용기로 이어지는). 버퍼 오버플로를 제어하기 위해 슬라이스 홀더의 가장자리에 심지 역할을 kimwipe를 놓습니다.
3. 1 시간 부화 후, 지속적으로 95% O _{5분의 2} %의 CO ₂ 실내 온도 aCSF와 perfused있는 기록 챔버에있는 슬라이스 홀더에 조각 전송합니다.
4. 자세 / AgCl 참조 슬라이스 홀더에 전극 (슬라이스 챔버의 뚜껑에 매달)와 헤드 단계에 악어 클립을 사용하여 전극을 연결 잠수함.
   • 자세 / AgCl 참조 전극의 표면에 AgCl의 얇은 레이어를 입금 5 분 1 M HCL에 (+1 V) 250 μm의 실버 와이어를 (AM 시스템, Carlsborg, WA) 아노다이징에 의해 집안에 만들 수 있습니다 실버 와이어.
5. striatal 뇌 슬라이스의 표면에 텅스텐 자극 전극 (플라스틱, 하나, 로어 노크, VA) 낮춥니다. 그것이 상단에 달려으로 자극 전극은 슬라이스와 접촉하게그것의,하지만 소중히 슬라이스를해서는 안됩니다. 우리의 설정 실험, 자극은 Neurolog의 자극기에 의해 생성됩니다.
6. 탄소 섬유 작업 microelectrode는 BD 척추 바늘을 사용하여 150 밀리미터 KCl 솔루션으로 백업 가득합니다. 리드선은 다음 ChemClamp potentiostat (Dagan 기업, 미네 아 폴리스, 미네소타)가 악어 클립을 사용하여 낮은 노이즈의 머리 단계에 연결되어있다 (종복인 전자, 고넬료, OR), 삽입됩니다. 작업 전극은 약 100 위치 - 200 μm의 거리 바이폴라 자극 전극에서 슬라이스로 깊이 75 μm의 약.
7. 중 하나 (monophasic, 350 μA, 60 Hz에서, 4 MS 펄스 폭) 또는 다중 (예 : 5 펄스, 350 μA, 20 Hz에서, 4 MS 폭) 펄스를 사용하여 전기 stimulations은, 신경 전달 물질을 연상하는 자극 전극에 의해 전달됩니다 릴리스 ^3.
8. FSCV를 사용하여 전기 evoked 도파민을 측정하기 위해서는 삼각형 파형은 전극에 적용됩니다. dop에 대한 일반 매개 변수아민 검출 : 탄소 섬유 microelectrode의 잠재적인 그 다음 400 스캔 속도 -0.4 V로 돌아온 1.2 V의 긍정적인 제한 ramped 자세 / AgCl 참조 전극, 대 -0.4 V에서 개최되는 V / s의 .
9. 슬라이스는 전기 나타나는 도파민의 유출의 모든 5 분 voltammetric 측정은 15 초 동안 만들어진 자극이다.
10. 적어도 세 안정적인 전기 자극 도파민 자료 기록 (최고 높이 사이의 차이는 <10 %) 후 관심 약리 에이전트를 포함 aCSF는 최대한의 효과를 얻기 위해 30 분 슬라이스를 통해 한 ML / 분의 유량에 perfused입니다. 전기 자극 도파민 녹음은 약리 재관류 동안 5 분마다 만들어집니다.

4. 데이터 분석

Wightman에 의해 설명된대로 슬라이스에서 얻은 결과 현재 대 시간이 흔적은 Michaelis - Menten 기반 방정식의 집합으로 비선형 회귀로 들어갈 수 있습니다및 LabVIEW (내쇼날 인 스트 루먼트, 오스틴, TX) ^4-6로 작성된 소프트웨어의 동료. 및 펄스 당 도파민 농도 (NM,이 소프트웨어에서, 현재 비해 시간이 흔적은 두 개의 매개 변수, V _최대 (추적의 내림차순 단계에 의해 입증로 도파민 수송에 의한 이해의 속도에 해당하는 NM / s의)를 변화하여 장착할 수 있습니다 ; 최고 높이 최대에 해당). 도파민 수송에 대한 도파민의 친화력의 반사 K _{m 값은,} 160 nm의 설정과 변경되지 않습니다. 실험 후에 결정됩니다 전극의 게시물 - 교정 계수는 피팅하기 전에 필요합니다. LabView 소프트웨어는 결정 계수 (R ²⁾ 적합의 선하심을 (R ² 값> 0.8을 사용하는)를 결정하는 매개 변수가 포함되어 있습니다.

5. 대표 결과

FSCV은 단일 펄스의 꼬리가있는 쓰세요에 전기 자극 도파민 릴리스와 이해를 검토하는 데 사용된아멘 (CPU), 핵 accumbens (NAC) 핵심, 그리고 생쥐의 NAC 껍질. 그림 1A에 표시된 대표 결과 현재 (또는 농도) 대 시간 플롯을 보여줍니다. 빨간색 화살표는 전기 자극은 탄소 섬유 microelectrode에서 도파민 농도의 변화에​​ 기인 현재의 금액에 해당 상승 다음 슬라이스에 적용할 때 나타냅니다. 전기 자극을하는 동안 주된 과정은 도파민 릴리스이지만, 그러한 이해 및 확산과 같은 다른 프로세스뿐만 아니라 전반적인 관찰 피크 높이에 기여. 최고의 하강 단계는 주로 자극의 연결이 ⁷ 중지되었습니다 이후로 전송하여 신경 전달 물질의 reuptake에 따라 결정됩니다. 보급과 신진 대사도 현재의 감소에 기여 그러나 정상 붕괴는 reuptake에 국한되지 않습니다. 이것은 전기 측정의 시간 규모는 초의 문제이기 때문에, FSCV이 contributio를 측정하는 너무 빠른 것을 postulated되었습니다신진 대사 ⁷ NS. 이러한 전류 대 시간을 추적에서 Y - 축이 후 실험 교정 계수를 사용하여 농도 (μm의)로 변환됩니다. 그림 1A에 대한 삽입은 현재 비해 시간 추적을 위해 주기적 voltammograms을 빼는 각각의 배경이다. 전극 (X 축)에 적용 가능성에 대해 (Y 축) 측정된 전류를하려하고, 도파민은 화학적으로 0.6 V에서 관찰 산화 피크 및 도파민 - ortho - 퀴논의 해당 감소 피크에서 관찰과 식별 - 자세 / AgCl 참조 전극 대 0.2 V. 데이터의 세 번째 표현은 하나의 음모를 형성하기 위해 현재의 비교 시간을 추적하고 주기적 voltammogram 모두의 정보를 결합 3 차원 의사 컬러 플롯 (그림 1B)를 사용합니다. 대표 의사 색상 음모에, 시간이 X - 축을 따라 초 단위로 꾸몄다이며, 탄소 섬유 작업 microelectrode에 적용된 전압이 Y - 축을 따라 그래프이며, 전류는 fal로 표현된다Z - 축을 따라 SE 색상. 탄소 섬유 microelectrodes (지름 ~ 7 μm의)의 작은 크기로 인해, 전기 자극 도파민 역학은 striatum (; 그림 2 CPU 비교 NAC 핵심 비해 NAC 쉘)의 이산 해부학 지역에서 발견하실 수 있습니다.

striatal 코로나 조각을 사용하는 장점은 도파민 세포 단체에서 기부를 제거하고, presynaptic 도파민 역학 조사를 허용한다는 것입니다. 다른 사람들이 ^{16, 17} 표시된대로 도파민 릴리스와 이해의 Presynaptic 통제는 엄격하게 도파민 autoreceptor 또는 전송 기능에 국한되지 않습니다. 다른 신경 전달 물질 시스템의 Heteroreceptors 또한 도파민 역학 ^{18, 19} 조절. 그림 3A에 표시된 대표 현재 비해 시간이 흔적은 조각이 30 분 1 μm의 quinpirole (D2/D3 수용체 작용제), 전기 - evoked 도파민 출시에 감소로 치료하는 경우 관찰된 것을 보여줍니다. 반면에, 때 기판같은 암페타민과 같이 도파민 전송은, 30 분 슬라이스 이상 perfused입니다 들어, 도파민 릴리스에 차이는 (그림 3B) 관찰되지 않습니다. 피크 부패는 일반적으로 도파민 전송 속도론의 변경 (K _m) ^3과 관련된 오른쪽으로 이동합니다. 슬라이스가 도파민 릴리스에게 역학 ^{20, 21에} 영향을 가상되었습니다 100 NG / ML 두뇌 파생 neurotrophic 인자 (BDNF) 솔루션, 목욕을하고 나면 마지막으로, 그림 3C는 현재 대 시간 추적의 대표 성분이다. 이 대표 추적에서, 그것은 BDNF는 전기 - evoked 도파민 버전을 향상시킬 수있는 능력을 가지고 볼 수 있습니다. 합쳐 놓으면, 이러한 약리 치료 striatum 내에서 도파민 역학을 조사하기 위해 FSCV의 유틸리티를 강조.

FSCV에 의해 presynaptic 도파민의 역학을 조사하기 위해 뇌 조각을 사용하여의 주요 제한은 그대로 머리에서 neurocircuitry이 손실된다는 점입니다.슬라이스 FSCV으로 그것이 어려운 조사되는 영역의 기능에 이러한 시스템의 기여를 이해하기 위해 (striatum 예를 들어) 또는 비 자극 도파민 수준을 평가하는 다른 뇌 영역에서 신경 전달 물질의 효과를 연구하는 것은 불가능합니다. ^{24 -} 그러나, FSCV 최근 기술 발전 자유롭게 약리 조작, 자기 관리, 또는 참신 ^22에 대응 쥐가 이동에 도파민 과도 측정 (과 전기 자극없이)를 사용할 수 있습니다. 전반적으로, 슬라이스 FSCV은 presynaptic 도파민 역학에 대한 유용한 정보를 제공하고, 같은 microdialysis, 전기 생리학, 및 / 또는 자유롭게 FSCV 이동으로 보완 neurochemical 기술로 슬라이스 FSCV 결과를 결합하는 것은 두뇌 신경 전달 물질의 기능을보다 포괄적인 전망을 제공합니다.

그림 1. dopamin를 전기 - evoked전자 릴리스 C57Bl/6J 마우스의 지느러미 CPU의 슬라이스에 FSCV 다음과 같은 단일 펄스 자극을 사용하여 측정. 도파민 자료가 단일 펄스 (빨간색 화살표)에 의해 evoked어진 (A) 농도 대 시간 추적. 단일 별표 주로 도파민 릴리스 농도에 증가에 기여하는 요소를 나타냅니다 있지만, 이해 및 확산에도 기여하고 있습니다. 이중 별표는 주로 인해 이해뿐만 아니라 확산이 기여, 기준선으로 돌아가는 피크 신호​​를 나타냅니다. 삽입은 해당 주기적 voltammograms를 표시합니다. (B) 지느러미의 CPU 표시 시간 (X 축)의 대표 색상 플롯은 가상 색의 자세 / AgCl 참조 전극 (Y 축) 대 탄소 섬유 microelectrode 잠재하고, 현재 적용.

NAC 코어에 하나의 전기 자극 펄스 (빨간색 화살표로 표시)에 의해 evoked 그림 2. 도파민 방출C57Bl/6J 마우스에서와 쉘. (A와 C) NAC 코어 및 쉘에서 시간을 추적하고 해당 주기적 voltammograms (삽입) 대 농도. (B와 D)로 이전 NAC 핵심과 쉘에서 대표 색상 플롯을 설명했다.

그림 3 슬라이스 후 대표 흔적이 30 분 약리 요원 대우었다. 모든 경우에 하나의 펄스가 CPU에서 도파민 릴리스를 연상하는 데 사용되었다. (A) 도파민 D2 수용체 작용제의 응용은 quinpirole은 (적색 성분) 전처리 (검정 추적)에 비해. (B) 필로폰 재관류 (보라색 추적)는 전처리 (검정 추적)에 비해. (C) 두뇌 파생 neurotrophic 인자의 능력은 전처리 (검정 추적)에 비해 (파란색 추적) 도파민 역학에 영향을 미칠 수 있습니다.

토론

여기에 제시 프로토콜 FSCV 실험을위한 마우스 코로나 뇌 조각을 준비하고 사용하는 방법을 보여줍니다. ^{11 -이} 방법은 도파민 역학을 취득하고 측정하기 위해 특정이지만, 같은 다른 신경 전달 물질은 아데노신, 과산화수소, norepinephrine, 그리고 세로토닌은 FSCV ^{3 8} 생체내 또는 체외에서 모니터링하고 있습니다. FSCV은 작업 전극 ^{세, 11에} 적용된 파형의 간단한 변경을 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
이름	회사	CAS 번호
시약
염화칼륨	어부	7,447,407
나트륨 염화물	EMD 화학	7,647,145
마그네슘 염화물	어부	7,791,186
염화칼슘	어부	10035048
나트륨 중탄산염	EMD 화학	144,558
인산 나트륨, 이염	EMD 화학의	7,558,794
D - 글루코오스	어부	50,997
아스코르비 산	어부	50,817
자당	어부	57,501
자료	공급 업체	카탈로그 번호
탄소 섬유	Goodfellow Oakdale, PA
유리 모세관	AM 시스템 Carlsborg WA.	602,000
실버 와이어	A -M 시스템 Carlsborg WA.	787,000
텅스텐 전극 자극	플라스틱 하나, 로어 노크, VA
백금 와이어
와이어 리드	종복인 전자, 고넬료, 또는
Loctite 404 인스턴트 접착제	Hankal 주식 회사 록키 힐 중부 표준시.
면도날	세계 정밀 계측기 주식 회사 FL.
BD 척수 바늘	BD 의료 시스템, Franlin 호수, NJ	REF 405,234
외과 블레이드	깃털 안전 면도기 (주) LTD. 일본
소프트웨어	공급 업체	카탈로그 번호
TH 소프트웨어	ESA 주식 회사, Chelmsford, MA
기계	공급 업체	카탈로그 번호
잠수 기록 챔버	맞춤 과학, 덴버, CO
Neorolog의 자극 아이 솔 레이터	Digitmeter, 하트 퍼 드셔, 영국
자동 온도 컨트롤러	워너 악기 주식 회사
현미경 (SZX7)	올림포스 산
현미경	어부
Vibratome 3000 sectioning 시스템	세인트 루, MO입니다.
재관류 펌프	왓슨 Marlow 제한, Falmouth 콘월 - 영국	H110708
Micropipette 풀러	Narishige, 도쿄, 일본
ChemClamp potentiostat	Dagan 기업, 미네 아 폴리스, 미네소타.