예 생체내 절연 골격 Microvessel 준비

요약

예 생체내 준비는 혈관 vasoactive 자극에 반응하며 수동 벽 기계를 통해 기본적인 구조적 특성의 평가 모두의 심문에 대한 가장 큰 gracilis 근육 저항 arterioles의 분리에 대해 설명되어 있습니다.

초록

절연 microvessel 준비는, 따라서 관류 저항 ^1-5 여러 요인 공헌 제어하는 혈관 직경의 전형을 허용 전직 생체내 준비이며. 이것은 처음. ¹⁵ 몇 년 전 우치다 외 의해 설명, 대형 측정에서였다 고전 실험 준비입니다. 이것은 초기 설명은 광범위 주로 버지니아 ^6-8의 대학에서 박사 브라이언 Duling의 실험실에서 수정되고 향상되었습니다 기법에 대한 기초를 제공하고, 우리는 다음 페이지에서 현재의 접근 방식을 제시. 이러한 준비는 특히 선택의 microvessel 같은 시궁창에서 gracilis의 arteriole을 참조되지만, 기본적인 준비가 쉽게 종의 ^9-13 전역의 거의 모든 다른 조직이나 기관으로부터 격리 선박에 적용할 수 있습니다. 고립된 microvessels의 기계식 (즉, 차원) 변경 사항을 쉽게 평가할 수생리학 (예 : hypoxia, intravascular 압력, 또는 전단) 또는 pharmacological 도전, 그리고 손상에 통합 반응 구성된 기계론의 요소로 통찰력을 제공할 수 있지만 예전의 생체내, 조직의 광범위한 배열에 대응 인치 이 방법의 중요성 또한 intravascular 압력 (myogenic), 자율 innervation, hemodynamic 포함한 기타 출처로부터 기부금의 많은 컨트롤을 허용하는 동시에 그것이, microvessel 직경의 통합 규제에 영향 손쉬운 조작을 허용하는 것입니다 ( 예를 들어, 전단 응력), 내피 의존하거나 독립적인 자극, 호르몬, 그리고 parenchymal 영향, 부분적인 목록을 제공합니다. 적절한 실험 조건에서하고 적절한 목표, 이것은 생체내 또는 쉽게 광범위한 체계적인 변수의 손쉬운 제어를 허용하지 않는 현장 조직 / 기관의 준비에서 이상의 장점이 될 수 있습니다.

mA이 준비의 조 제한은 본질적으로 그 강점의 결과입니다. 정의함으로써, 이들 선박의 동작이 혈관 저항의 규정에 가장 중요한 참여자의 많은과 같은 신경 체액, 신진 대사 등을 포함하여 제거된 조건에서 연구되고 수사관들은 피하기 위해 오버 경고합니다 통역이 준비를 활용 수집되는 데이터의 추정. 이러한 준비에 관해서는 관심의 또 다른 중요한 영역이 같은 내피 안감이나 혈관 평활근 세포와 같은 구성 요소를 손상하는 것은 매우 쉬울 수있다는 것입니다, 오류 등 그 변수 소스를 소개하실 수 있습니다. 그것은 강력하게 개인 조사는 실험 시작시와 정기적으로 프로토콜의 과정에 걸쳐 모두, 준비의 품질을 보장​​하기위한 적절한 측정을 활용하는 것이 좋습니다.

프로토콜

1. 실험에 앞서

1. 실험 하루 전에 기차역에 적합한 크기의 유리 모세관 튜브는 micropipettes (중 수평 또는 수직으로 끌어당기는 사용할 수있다)에 연루된다. 우리가 일반적으로 50-150 μm의 사이에 직경 범위를 사용하더라도 팁 직경은 쉽게, 고립되는 혈관에 따라 조정할 수 있습니다. 이러한 그러면 부탄 화염 이상 microvessel 역 아래의 가열을위한 적절한 구성에 부러 졌지 만요. Micropipette 팁은 물리적으로 문제의 microvessel 위해 (미세 집게 포함) 대략 직경에 고장 수 접지 또는 특정 응용 프로그램에 필요한 적절한 conformations에 광택.있다 이러한 절차에 대한 광범위하고 우수한 검토를 위해, 독자는 데이비스 외로 이동합니다. ^16. 두 micropipettes 그때 microvessel 챔버 용 피펫 홀더에 야당에 배치됩니다. 이들은 지향되어야 그러한 그 팁선박 챔버 내에서 동일한 수직 및 수평면에 있습니다.
   이 원고 (그림 1 및 2)에 사용 microvessel 챔버 (위스콘신 의과 대학에서 생리학의학과 씨를 데이비드 Eick 의해 세워진 정의는 하나입니다 http://www.phys.mcw.edu/ 와 WWW . eicktech.com ). 그러나 microvessel 챔버의 여러 가지 다른 구성은 생활 시스템 계장 (개발한 사람으로 쉽게 상업적으로 사용할 수 있습니다 http://www.livingsys.com/ ) 및 IonOptix ( http://www.ionoptix.com/ 아주 흔한되는). 이러한 다른 시스템 사용하면, 그것이 구체적인 실험 및 장비 요구 사항에 대한 의존하지만, 거꾸로 현미경보다는 종래의 직립 하나를 사용하여 필수적 수 있습니다. 거꾸로 현미경의 사용은 실험 protoc 위해 바람직 될형광등이나 공촛점 이미징이 필요한 ols.
2. 생리 식염수 (PSS, 아래에 설명된)를 준비하고 산도가 특정 실험 조건 (7.38-7.42는 전형이며 생리적 범위에 속하는)를 위해 적절한 수준으로 설정되었는지 확인하십시오. PSS 솔루션은 사전 및 냉장 준비할 수 있지만 사용하기 전에 산도에 적절한 온도에서 확인되어야합니다. 이것이 보편적으로 필수 수는 없지만 실험자 또는 특정 프로토콜이 그것을 요​​구하는 경우 PSS는 알부민 포함할 수 있습니다.
3. 혈관 직경을 측정하는 데 사용되는 디지털 비디오 캘리퍼스는 hemocytometer이나 현미경 스테이지 마이크로 미터를 사용하여 보정해야합니다. 정확한 교정 들어, 마이크로 미터는 선박 챔버에 유입 / 유출 micropipettes와 같은 비행기에 배치하는 것이 중요합니다.
4. pipettes에 microvessel를 부착할 타이 루프를 대비해야하고 이후에 사용하기 위해 쉽게 액세스할 수 있어야합니다. 이들은 쉽게 8-0 이하 안과의로부터 준비할 수uture. 단일 타이 루프는 미리 준비하고 (이것은 유실되지 않도록 그들을 유지합니다) 필요한까지 현미경 슬라이드를 둘러싼 반전 테이프의 작은 스트립에 적용 배양 접시에 저장할 수 있습니다. (그림 3).

2. 실험의 날

1. 모든 지원 장비가 켜져 적절한 기능을 확인한다. 모든 압력 트랜스 듀서 및 선박 챔버 드레인 펌프 (그림 1A와 1B) - 이것은 anti-vibration/floating 테이블과 순환 온수 물 목욕을 (일반적으로 37 ° C 선박 목욕에 적당한 온도를 제공하기 위해 설정)이 포함되어 있습니다. 선박 챔버와 perfusate 및 superfusate 저수지의 평균 가스를 켭니다.
2. 저수지, 튜브 및 PSS 솔루션과 챔버를 모두 채웁니다. 유입 피펫으로 이어지는 perfusate 라인은 완전히 VA를 이동시키다 및 손상될 수이 라인에 공기 거품의 존재를 피하기 위해 기입하여주십시오scular 내피 (그림 1C). 필요한 경우 부드럽게 완전히 가득 것을 확보 피펫 통해 perfusate 흐름을 방해 수있는 막힘없이 PSS 끝까지 밀어 주사기를 사용합니다. 유입 압력은 압력 트랜스 듀서의 손상을 방지하기 위해 합리적인 범위 내에 보관해야합니다.

3. Microvessel의 수확

1. microvessel가 찍어야 할 것입니다있는 동물의 anesthetizing 따라 해당 선박, 연구하고있는 vasculature에 가장 적절한 절차에 따라 격리해야합니다. 다른 사람에 혈관이 (예, 근육) anesthetized 동물에서 직접 제거할 수있는 반면 어떤 경우에는, 이것이 장기 자체 (예 : 뇌성 또는 관상 microvessels)의 삭제를 요구할 수 있습니다. gracilis 근육 내에서 선박의 방향의 예제는 그림 4에 표시됩니다. 대한들과 사전 제거로 생체내의 선박의 길이를 계산ceps 또는 작은 캘리퍼스. 동물 / 기관에서 선박을 제거하기 전에, 그것은 혈관 챔버를 준비하고 (자리에있는 모든 타이 루프 포함)가 제대로 작동하는지 확인 한 최종 점검을 수행하는 매우 도움이 될 수 있습니다.
2. 미세 집게로 한쪽 끝에 선박의 외관 측면 쥐고하고 무료 때까지 선박의 길이를 따라 절단, 모든 잡아 당 겼거나 혈관에 당기는을 피하기 위해 극단적인 돌보는하여 동물 / 기관에서 혈관을 제거합니다. 일단, 해방된 바로 PSS 가득 1.7 ML의 원심 관에 넣고 있지만 선박을 보내줄하지 않습니다. 이것은 방향을 기억하고, 목욕탕에서와 같은 그런 perfusate 방향은 동물의 혈액 흐름 방향과 동일합니다.

4. 선박을 Cannulating

1. 채워진 욕탕에 혈관을 놓고 유입 피펫의 근위 끝을 cannulate. 이것은 최고의 겸손한 관류의 정맥을 통해 속도 (~ 50 mmHg 압력)과 함께 수행할 수 있습니다좋은 포셉 한 켤레는 근위 혈관 루멘 벽 (즉, 각 손에 포셉 중 하나 쌍)의 각 측면을 잡고 사용됩니다. 저희 연구실에서는 파인 과학 도구 (에서 미세 집게를 사용 http://www.finescience.com/Home.aspx 어떤 적절하게 구축 포셉 효과적으로 작동하지만,). 정맥 도움말에 대한 혈관을 풀 두 넥타이 루프 혈관을 확보할 수 지점의 끝 선박을 향상.
2. 추가로 혈관을 팽창하고 말초 피펫 팁에 cannulation을 촉진하기 위해 ~ 75 mmHg로 유입 압력을 올립니다. 혈관을 통해 흐름이 혈관의 말초 유출 (현미경)에 superfusate 저수지의 왜곡으로 간주되어야한다. 유출의 피펫에 대한 선박의 말초 끝을 Cannulate 두 타이 루프 (이 최종 루프 전에 cannulation에 장소에 있어야합니다; 그림 5)로 고정하십시오.
3. neede 같은 XYZ 좌표 때까지 정맥을 조정D까지가 혈관에 최소한의 왜곡이 있으며, 선박은 생체내 길이에 대략. 그것이 일반적으로 그 선박 세그먼트 (저희 연구실은 gracilis 근육 ⁸ 대규모 저항 arterioles 위해 평균 동맥 압력의 80 %를 활용)에 의해 발생 평균 동맥 압력의 비율을 대략 때까지 유입 압력을 올립니다.
4. 욕조와 현미경 렌즈를 splashing 피하기 위해 챔버여 곳에 플라스틱 랩 또는 유리 커버로 적절한 가스 혼합물을 제공하는 작은 기포의 돌을 놓습니다. 더 작은 크기를 효과적으로뿐만 아니라 작동지만 우리는 모두 애완 동물 / 수족관 상점에서 일반적으로 사용할 수 있고 직경 약 1cm입니다 기포의 돌을 사용합니다. 기포의 석조의 존재는 항상 그릇에 적절한 가스의 가용성을 insures 및 선박 생존을 연장할 수 있습니다. 이 석조는의 왜곡을 방지하기 위해 모든 측정 기간 (또는 일시 중단 돌 통한 공기 흐름) 동안 제거됩니다이미지. 유출의 피펫에 클램프를 풀어 30 분간 혈관을 통해 흐름을 허용합니다. 주기적 흐름은 혈관이 휴식 음색을 개발되었는지 확인합니다 유출 관에 채워해야합니다. 모든 혈관이이 시점에서 압력 누출을 점검해야합니다. 누출은 혈관으로 알려진 압력을 (우리가 일반적으로 100-120 mmHg 사용) 도입과 유입, 선 다음, 유출을 클램핑하여 분명하게 될 것입니다. intraluminal 압력이 안정 경우에는보고 알 수있는 누출은 없습니다. 압력이 떨어질 시작하는 경우에는 상당한 누수가 존재하고 폐쇄해야합니다. 유입이나 유출의 pipettes 중의 누수가 정상적으로 피펫의 혈관​​ 주위에 묶어 추가로 루프를 추가하여 정류 수 있습니다. 혈관이 누출을 허용하는 작은 사이드 지점이있는 경우 또는이 효과적으로 압력을 포함하고 오류에 대한 추가적인 소스를 소개할 수있는 혈관의 능력을 손상됩니다. 이 누수가 확인되면, 그것은 일반적으로 w 해제 묶어하실 수 있습니다10-0 opthalmic의 봉합의 ith 단일 루프. 양자 택일로, 타이 루프를 만들기 위해 6-0 봉합사로 조롱 한 가닥도 매우 효과적입니다. 누출이 확인된 수 없거나 효과적으로 (예를 들어, 사이드 지점과 단순히 선박 벽에 구멍에 대한 어떤 트렁크가없는) 오프 묶어 수없는 경우,이 실험의 조기 종료와이 될 다른 배의 사용하실 수 있습니다 필요한 경우 (이것은 일반적으로 다른 다리에 동일한 그릇이다 - 동물 - 또는 contralateral 사이드 필요한 경우).
   
   배는 30 분 최소없이 유동 조건 하에서 평형 수 있어야합니다. 모든 실험은 노 유동 조건 하에서 실시하고 있습니다. 선박 만족 음색을 개발하고 해당 실험의 포함 기준에 대한 반응은 일단, 용기는 후속 연구를위한 준비가되었습니다.
   
   이러한 포함 기준은 구체적인 실험 프로토콜과 수사관에 따라 달라질 수 있습니다. 저희 연구실에서는, 우리는 정기적으로 UT다음을 ilize :
   1. > 30 % (ΔD는 칼슘 ^{2 +} 무료 PSS와 D _최대에 대한 노출에 대한 응답의 평균 압력 아래에있는 값부터 arteriolar 내벽 직경의 증가이다 ΔD / D _최대 X 100로 계산 최대값의 활성 톤 직경 칼슘 ^{2 +} 프리 PSS의 평균 압력)에서 측정.
   2. 가능한 혈관 평활근 층의 인덱스로서 Myogenic 활성화 (의 유지, 또는 선호 증가 intraluminal 압력 arteriolar 직경의 감소).
   3. 같은 아세틸콜린에 활발 확장시키는 반응 (목욕 10 ^-6 M)에 의해 입증 가능한 내피 안감.
   4. 추가 포함 기준은 같은 phenylephrine과 같은 아드레날린 agonists (10 ^-7 M) 같은 아데노신과 같은 추가적인 자극 (10 ^-5으로 확장시키는 반응으로 압축시키는 것 응답을 포함하여 필요에 따라 구체적인 실험 프로토콜을 맞게 추가할 수 있습니다 M) 또는 hypoxia를 (평균 가스에 0 %가 감소 O _2)를 한모금.
5. 다음 절에서는 '모의 실험'의 예입니다. 모든 필요한 솔루션은 선박 챔버의 PSS의 희석 요인을 계좌 납부 관심을 가지고 적절하게 준비가되어 있습니다. 예를 들어, 우리의 도구 중 일부에 대해 선박 챔버의 부피는 20 ML이다. 선박 챔버 욕조에서 10 ^-5 M의 효과적인 농도에서 10 ^-2 M 주식 솔루션 결과의 예, 20 μl 있습니다. 위에서 설명한대로 선박 제거, cannulation, 평균 및 검증에 이어 실험 개시 준비가되어 있습니다. 이러한 치료 임의화과 효과 등 구체적인 내용은 실험 구체적이며, 이러한 노력에 대한 과도한 공간을 소모합니다. 따라서 이들은 세부 사항에 포함되지 않습니다.
   
   초기 제어 응답 결정됩니다. 이러한 myogenic 활성화 (압력 - 유도 수축), intralumenal 홍보 등의 예를 생리적 자극에 대한(이 경우, 우리 5-7분 기간을 허용) essure는 무작위로 원하는 범위 변경되고, 배는 응답 시간의 적절한 기간을 허용하고 있습니다. 이러한 아세틸콜린과 도전과 같은 예를 pharmacological 자극 들어, 약물은 임의의 순서로 스톡 솔루션에서 뒤쪽에 추가됩니다. 이 경우, 우리는 일반적으로 평균 직경의 복원으로 정의되고 막가는 인생으로 10 ^-9에서 목욕 10 ^-5 M으로 범위를 사용할 수 있습니다. 아세틸콜린이 빠르게 확산 요원으로서 최대한 확장시키는 반응이 쉽게 단 몇 초 만에 얻을 수 있습니다. 다른 요원들은 (예 : 펩티드 등) 최대한의 반응이이 정도 계정뿐만 아니라, 효과적인 막가는 인생을 위해 촬영한 기간으로 연결됩니다.을 유도하는 데 훨씬 더 많은 시간이 걸릴 수 있습니다 제어 응답이 수집되고 나면 구체적인 개입이 수용체 agonists / antagonists, 특정 이온 채널에서 행동하는 대리인의 선동과 선박의 부화를 포함한 시스템에 부과 될 수 있습니다변경된 intraluminal 압력, 가장 일반적인 중재 몇 이름을 지정하기 위해 평균 가스 또는 특정 효소 시스템을 대상으로 pharmacological 대리인의 차이.
   
   개입을위한 적절한 시간 후 (적절하게 테스트해야하는) 효과, 데이터 수집의 후속 원형으로 초기화 할 수 있습니다. 구체적인 실험 프로토콜에 따라 후속 개입은 선박에 부과 될 수도 있고 아니면 처음 (중 실패야 작성 - 가능한 - 생리학 도전이나 간단한 제거) 제거할 수 있습니다. 선박는 평형 상태 (검증해야하는)에 반환되면 추가적인 데이터 수집과 함께 필요에 따라, 후속 개입이 적용될 수 있습니다. 선박 준비의 품질은 아래와 이전에 결정된 임계값 기준 떨어지면 때까지이 일반적인 절차는 실험 종료 때까지 계속하거나 것입니다 (예 : 작용제 또는 충분한 적극적인 음색을 개발할 수있는 능력에 대응). 이 시점에서 실험 중 체결되거나 탐정이 고립된 선박 (예 : myogenic 활성화 동일한 절차를 사용하여 수행할 수 선박 벽 역학, 마찬가지의 반응을 독립적 데이터를 수집하실 수 있습니다 모든 활성 톤 ¹⁴⁾ 부족한 용기가있는.
6. 장비의 모든 정기적인 청소는 소금 상승의 제거 및 기타 원치 않는 생물 학적 개체의 성장 방지를 위해 필수적입니다. 모든 실험 하루가 끝날 때 최소한 모든 라인과 챔버 스는 완전히 증류수 또는 드 이온화된 물이 풍부한 양의으로 PSS으로 플러시하고 완전히 건조 수있게됩니다. 사용의 모든 2-3일 후, 에틸 알코올로 세척은 잘 수행되고 장비가 완전히 건조 허용됩니다. 지속적인 사용의 각 주말에 모든 라인과 여왕님 이상으로 물로 완전히 씻어 다음 30 분간 '알을 품다'허용, 0.1 M 염산의 산성으로 가득차하고있다. 마지막으로,시연속 사용 2-3 주의 끝에, 튜브의 모든 부분을 새롭게 교체하고 챔버와 저수지가 1.0 M HCL로 세척하고는 드 이온화 / 증류수로 rinsing 광범으로 따라갔다. 만약 튜브 또는 챔버 / 저수지, 이건 중 교체하거나 깨끗이 적절하게 청소하고 모든 요소에 성장의 튜브 또는 Visual 설립의 변색이 없다. 정기적인 청소 및 일반적인 유지 관리를 통해 장비는 시간이 오래 지속될 수 있습니다. 집필 당시의 선박 회의소는 8 ^일 또는 루틴 사용의 9 ^{번째 연도에} 모두이고 우리는 그들과 더 큰 어려움을 경험하지 않았습니다.

5. 대표 결과

그림 1A.이 그림은 기본적인 microvessel 스테이션 설정을 보여줍니다. 볼 용기 용 = 텔레비전, B = 디지털 캘리퍼스; superfusate thr을 푹신한 C = 주사기ough의 유입 피펫이 필요한 경우, D perfusate 유입 압력을 변경 = 정압 칼럼; E = 현미경; F = microvessel 챔버; G = superfusate 저수지, H = 압력 모니터 (복수는 필요에 따라 추가될 수 있습니다)에 대한 전 = microvessel 챔버 드레인 펌프 superfusate, J = 평균 가스 혼합물 탱크, K = 폐기물은 (superfusate)을 포함, L = 순환의 온수기, 잔글 = anti-vibration/floating 테이블.

그림 1B.이 그림은 microvessel 챔버 설정의 더 가까운 전망을 선물한다. 이 그림에서 E = 현미경; F = microvessel 챔버; H는 = 압력 모니터 (우리가 단순에 대해서만 광고를 게재하면서 여러가 필요한만큼 다른 사이트에 추가할 수), 나는 = microvessel 챔버 드레인 펌프, N = 튜브가 붙어 매우 perfusate 유입 피펫 (그림 1A에서 'D'에서 연속)으로 시작, O = 튜브는 perfusate 유출의 피펫에 첨부.

그림 1C.이 그림은 microvessel 챔버의 가장 가까운보기를 제공합니다. 이 그림에서는 N = perfusate 라인 (즉, perfusate 유입 피펫에 직접 연결된 튜브), O perfusate 유출의 피펫에 직접 부착 = 튜브, P = 유입 피펫을위한 수평 및 수직 위치 컨트롤, Q를 = superfusate 저수지에서 나오는 물 목욕을위한 R은 = 유입 (그림 1A에서 'G'에 연결된), 물 목욕 (그림 1A와 1B에 '나'에 연결된)에 배수.

그림 2.이 그림은 시스템의 유체 및 가스의 흐름의 도식 표현을 보여줍니다. 이 그림에서 = PSS superfusate 라인 유입, B 유입 피펫으로 = PSS perfusate 라인, 컨테이너를 낭비하는 욕조에서 C = PSS superfusate 드레인, D = 유출의 피펫에서 PSS perfusate 정보 유출, 전자 챔버 재킷에 = 온수 물 입력, F 챔버 재킷에서 = 온수 물을 출력.

. 8-0에서 우리의 준비에 사용되는 여러 타이 루프의 저장, 그림 3은이 수치 안과 봉합 (패널 10X eyepieces 및 4.5x 조절 줌 배율과 해부 현미경을 통해 볼)로 만든 개별 넥타이 루프를 제공합니다 그리고 덮혀있는 페트리 접시에 저장됩니다 현미경 슬라이드 주위 반대로 테이프에 10-0 봉합사 (그들을 잃지 않도록, 패널 B).

그림 4.이 그림은 이전의 수술 격리 및 제거 적절한 공간적 방향을 허용하기까지 gracilis 근육 저항 arteriole의 이미지를 (표준 해부 현미경을 통해 볼)을 제공합니다.

ve_content ">
그림 5.이 그림은 cannulated microvessel의 대표 이미지를 제공합니다. 패널은 모두 유입 ()과 유출 (B) pipettes뿐만 아니라 타이 루프 (C)가 표시가있는 선박의 전체 길이를 보여줍니다. 패널 B는 분명 디지털 캘리퍼스 (이 경우에는 직경이 112 μm의 임) arteriolar 내경의 결정을 보여주는, 높은 배율로 이미지를 보여줍니다.

그림 6.이 그림은 cannulated microvessel의 다음의 평형을 대표하는 이미지를 보여줍니다. 상단 이미지, 통제 그릇이다 평형 압력에서 조건을 unstimulated, 중간 이미지는 아세틸콜린 (목욕 10 ^-6 M)에 도전하는 팽창에 따라 동일한 그릇이다, 그리고 하단 이미지에 따라 그 그릇이다 constrictiophenylephrine (목욕 10 ^-7 M)에 도전하는 그렇죠.

. 그림 7은이 수치와 도전에 대한 응답으로 격리된 microvessel의 답변을 요약한 : hypoxia (패널, ~ 40 mmHg로 ~ 135 mmHg에서 Google 시스템에서 찾을 perfusate 및 superfusate PO ₂ 감소), 아세틸콜린의 증가 농도 (패널 B), 제어 조건 및 칼슘 무료 PSS (패널 C)와 선박의 다음 부화 이하 intravascular 압력의 변화.

토론

이러한 일반적인 기술은 쉽게 대부분의 조직에 적용할 수 있지만 제시 프로토콜, 골격 근육 microvessel의 분리, 제거 및 이중 cannulation을 설명합니다. 현재 원고 내용은 용어 "arteriole"도 주요 장기에 재관류 저항의 규정에 기여 아니면 휴식 활성 톤 미만의 직경 70-120 μm의 사이에 이르기까지 저항 혈관을 설명하기 위해 저자가 사용되었습니다 조직.

일부 수정이 시스템은...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
시약 및 장비	회사	덧글 / 카탈로그 #
선박 상공 회의소	사용자 정의	데이브 Eick (MCW)
온수 순환 물 목욕	PolyScience 및 Haake	Haake DC 10
Pipets	프레데릭 Haer & (주)	모세관 튜브 2.0 mm OD X 1.0 mm ID (27-33-1)
압력 모니터	세계 정밀 계측기
물의 외피 저수지	사용자 정의
외부 광원	세계 정밀 계측기	Novaflex
Pipet의 풀러	MicroData 인 스트 루먼트	PMP102 Micropipet 풀러
전체 결점수술 도구, 표준	파인 과학 도구	뒤몽
울트라 파인 집게	파인 과학 도구	Inox # 5
실크 봉합사 스레드	Ethilon	# 10-0 또는 9-0
스테레오 현미경	올림포스 산	올림푸스 SZ-11
아날로그 비디오 캘리퍼스	Boeckeler	비아 컨트롤러 (비아-100)
고해상도 아날로그 카메라	파나소닉	GP-MF 602
산소 탱크	지역	21 % 밸런스 질소와 5 %는이 밸런스 질소를 공동
관류	Tygon
펌프 배수	콜 Parmer 악기 (주)
수정된 생쥐 PSS	아래의 제조법을 참조하십시오
반 Breemen의 이완 PSS	아래의 제조법을 참조하십시오

수정된 생쥐 PSS 제조법	PSS 2 리터를 만들려면	20X 소금 증권 (2L)	20X 버퍼 증권 (2L)
NaCl		278.0 g
KCl		14.0 g
MgSO 4 7H 2 O		11.5 g
CaCl 2-H 2 O		9.4 g
NaHCO 3			80.8 g
EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)			0.4 g
아뇨 2 PO 4	0.28 g
포도당	1.98 g
20x 소금 증권	100 ML
20x 버퍼 증권	100 ML
증류수	1800 ML

반 Breemen의 이완 PSS	PSS 2 리터를 만들려면	20X 소금 증권 (1L)	20X 버퍼 증권 (1L)
NaCl		107.4 g
KCl		7.0 g
MgSO 4 7H 2 O		5.76 g
MgCl 2 6H 2 O		81.32 g
NaHCO 3			40.4 g
동부 서머 타임			0.2 g
EGTA			15.22
아뇨 2 PO 4	0.28 g
포도당	1.98 g
20x 소금 증권	100 ML
20x 버퍼 증권	100 ML
증류수	1800 ML