허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

요약

척수 미세 순환은 척수 손상에 중추적 인 역할을합니다. 대부분의 방법은 미세 순환 표적 치료의 발달을 위해 필수적인 척수 미세 순환의 실시간 평가를 허용하지 않습니다. 여기에서, 우리는 허혈 / 재퍼퓨전의 큰 동물 모델에서 레이저 도플러 - 흐름 바늘 프로브를 사용하여 프로토콜을 제안한다.

초록

척수 손상은 대동맥 수리의 치명적인 합병증입니다. 척수 손상의 예방 및 치료를위한 발달에도 불구하고, 그 발생률은 여전히 상당히 높기 때문에 환자 결과에 영향을 미칩니다. 미세 순환은 조직 관류 및 산소 공급에 중요한 역할을하며 종종 거식성 역학에서 해리됩니다. 따라서 척수 미세 순환에 대한 직접적인 평가는 미세 순환 표적 치료법의 개발과 척수 미세 순환과 관련하여 기존 접근 방식의 평가에 필수적입니다. 그러나 대부분의 방법은 척수 미세 순환에 대한 실시간 평가를 제공하지 않습니다. 이 연구의 목적은 척수에 직접 삽입 된 레이저 도플러 바늘 프로브를 사용하여 실시간 척수 미세 순환 평가를위한 표준화 된 프로토콜을 설명하는 것입니다. 우리는 척수 미세 순환의 악화를 유도하기 위해 허혈 /재관류의 돼지 모델을 사용했습니다. 또한 형광 마이크로스피어 주입 기술이 사용되었습니다. 처음에 동물은 마취되고 기계적으로 환기되었습니다. 그 후, 레이저-도플러 바늘 프로브 삽입을 수행 하 여 뇌척수액 배수의 배치에 이어. 대동맥 교차 클램핑을 수행하기 위해 내림차순 대동맥의 노출을 위해 중앙분리증이 수행되었다. 허혈/재퍼퓨전은 총 48분 동안 초라-체강 대동맥 교차 클램핑에 의해 유도되었고, 이어서 재관류와 혈역학적 안정화가 뒤따랐다. 레이저-도플러 플럭스는 거체역학적 평가와 병행하여 수행되었다. 또한, 자동화된 뇌척수액 배수는 안정적인 뇌척수압을 유지하기 위해 사용되었다. 프로토콜이 완료된 후, 동물을 희생하고, 척수는 조직 병리학 및 현미경 분석용으로 수확되었다. 이 프로토콜은 레이저 도플러 프로브를 사용하여 척수 미세 포류 측정의 타당성을 밝히고 허혈 중 현저한 감소뿐만 아니라 재관전 후 회복을 보여줍니다. 결과는 형광 마이크로스피어 평가에 유사한 행동을 보였다. 결론적으로, 이 새로운 프로토콜은 허혈/재관류 조건에서 실시간 척수 미세 인융합 평가를 사용하여 미래 연구를 위한 유용한 큰 동물 모형을 제공할 수 있습니다.

서문

허혈/재관류(SCI)에 의해 유도된 척수 손상은 감소된 결과^1,2,3,4와관련된 대동맥 수리의 가장 치명적인 합병증 중 하나입니다. SCI에 대한 현재 예방 및 치료 옵션은 척수관류 압력^{2,5,5,6,7,8,9를}개선하기 위해 뇌척수액 압력(CSP)의 정상화뿐만 아니라 거형역학적 파라미터의^최적화를포함한다. 이러한 기동의 구현에도 불구하고 SCI의 발생률은 여전히 대동맥수리^{10, 11,12의}복잡성에 따라 2 %와³¹% 사이입니다.

최근에는 미세순환이 주목을 받고^{있으며, 13,14.} 미세 순환은 세포 산소 섭취 및 대사 교환의 영역이므로 장기 기능 및 세포 무결성^13에서중요한 역할을한다. 손상된 미세 순환 혈류는 증가된 사망률^{15,16,17,18,19와}관련된 조직 허혈의 주요 결정자이다. 척수 미세 순환의 손상은 신경 기능 저하및 결과^{20,21,22, 23과}관련이^있다. 따라서 SCI 치료를 위한 미세 관전의 최적화는 가장 유망한 접근법입니다. 거시순환 적 최적화에도 불구하고 미세 순환 장애의 지속성은^{26,27,28,29로}기술되었다. 혈역학 일관성의 이러한 손실은 허혈/재관류를 포함한 다양한 조건에서 자주 발생하며, 직접 미세 순환 평가 및 미세 순환 표적 요법^26,27,30의필요성을 강조한다.

지금까지 척수 미세 순환 행동^20,31의실시간 평가를 위해 레이저 도플러 프로브를 사용한 연구는 거의 없습니다. 기존 연구는 종종 간헐적 인 사용 및 사후 분석^(32,33)에의해 제한되는 마이크로 스피어 주입 기술을 사용했다. 마이크로스피어 사출 기법을 이용한 상이한 측정 횟수는 파장이 다른 마이크로스피어의 가용성에 의해 제한됩니다. 더욱이, 레이저 도플러 기술과는 대조적으로, 이 방법에 대한 사후 조직 처리 및 분석이 필요하기 때문에, 마이크로 퍼퓨전의 실시간 평가는 불가능하다. 여기서, 우리는 허혈/재퍼퓨전의 돼지 큰 동물 모형에서 척수 미세 순환의 실시간 평가를 위한 실험 프로토콜을 제시합니다.

이 연구는 허혈/레퍼퓨전의 미세 순환에 대한 결정적 대 콜로이드의 영향과 척수 미세 포류에 대한 유체 대 혈관 압박자의 영향에 대한 탐구무작위 연구를 결합한 무작위 연구를 결합한 대규모 동물 프로젝트의 일부였습니다. 유량 프로브 2점 보정뿐만 아니라 압력 팁 카테터 교정은 이전에^34로설명되었다. 보고된 프로토콜 이외에, 형광 마이크로스피어는 척수 미세인혈의 측정을 위해 사용되었으며, 이전에 설명한 바와 같이, 각 동물에 대한 척수 조직의 12개의 샘플을 사용했으며, 상부 척수를 나타내는 샘플 1-6및 7-12는 하부^{척수(35,36)를}나타내고 있었다. 레이저-도플러 레코딩 및 거체역학적 평가가 완료된 후 각 측정 단계에 대해 마이크로스피어 주입이 수행되었다. 조직 병리학 적 평가는 이전에 설명 된 바와 같이 클라인만 -점수를 사용하여 수행되었다^37.

프로토콜

이 연구는 함부르크 시의 동물 관리 및 사용에 대한 정부 위원회의 승인을 받았습니다 (참조 번호 60/17). 동물들은 '실험실 동물의 관리 및 사용 안내서'(NIH 간행물 제86-23호, 개정2011)와 FELASA 권고 및 실험을 준수하여 치료를 받았으며,^24일,25일도착지침에 따라 펠라사 권고및 실험이 수행되었다. 이 연구는 급성 예심이었고, 모든 동물은 프로토콜의 끝에 안락사되었다.

참고: 이 연구는 약 40kg의 무게의 3개월 된 6마리의 남성과 암컷 돼지(독일 랜드레이스)에서 수행되었습니다. 동물은 실험 7일 전에 동물 보호 시설로 옮겨졌으며 동물 복지 권고에 따라 보관되었습니다. 동물은 음식과 물 광고 사부심을 제공받았고, 그들의 건강 상태는 책임있는 수의사에 의해 정기적으로 평가되었습니다. 12h의 금식 시간은 실험 전에 유지되었다. 동물의 전체 실험 절차와 취급은 책임있는 수의사에 의해 감독되었다.

1. 마취 유도 및 마취 의 유지 보수

1. 마취 유도 및 마취의 유지 보수를 위해 동물을 미리 치료하고 근육 내 주사를 사용하여 심혈 주사를 사용하여 심내 주사를 사용하여 정맥 내 주입을 수행하여 내시경 삽관을 수행하십시오. 그 후, 휘발성 마취제의 조합을 이용하여 마취를 유도하고 유지하며, 지속적인 오피오이드 적용을 통해 추가 오피오이드 볼루스 주입을 보완한다.
2. 케타민 20^mg·kg-1,아자페론 4 mg·kg-1, 미다졸람 0.1 mg·kg-1의 근육 주사를 사전 약물과 식감으로 수행한다.
3. 정맥 카테터를 귀 정맥에 놓고 적절한 고정을 보장하며 식염수 10mL를 빠르게 적용하여 기능을 평가합니다.
4. 열 손실을 방지하기 위해 온난화 담요에 동물을 척추 위치에 놓습니다.
5. 전자장약(ECG) 및 맥박 산소측정으로 기본 모니터링을 구축하여 동물의 심장 폐 상태를 모니터링하고 기본 모니터링 하드웨어에 연결합니다.
6. 전산화를 위한 돼지^모양의 마스크를 통해 15 L·1산소를 투여한다.
7. 필요한 경우 정맥 내 볼리 0.1^mg·kg-1 1%의 프로포폴을 주입하고, 필요한 경우 내트라큐어를 수행한다.
8. 최종 조수 카노그래피 및 어컬쳐로 올바른 배치를 확보하고, 0.1^mg•kg-1의 판큐로늄을 투여하고, 내트라큐리 튜브의 적절한 고정을 보장합니다.
9. 10mL/kg-1 체급^-1의 조수부피를 사용하여부피 제어 환기를 설정하고, 10cmH_2O의양수 종전 압력, 그리고 마취기를 사용하여 0.3의 영감 받은 산소(FiO_2)의분수로 설정한다. 35-45 mmHg의 최종 만기 이산화탄소 장력 (etCO_2)을유지하기 위해 인공호흡기 주파수를 조정합니다.
10. 위관을 소개하고, 위액의 흡입을 수행하고, 튜브를 적절하게 수정하고, 수집 가방에 연결합니다. 마취 중 눈의 건조를 방지하기 위해 동물의 눈을 조심스럽게 닫습니다.
11. 펜타닐(10μg·kg -1^·h-1)과세보플루란(3.0% 유효 농도,증기에 의해 전달됨)의 연속 주입에 의해 마취를 유지한다. 생명 징후와 환기 매개 변수의 주의 깊게 관찰뿐만 아니라 전체 프로토콜 동안 움직임이 없는 상태에서 수술 자극의 단계에 특별한주의를 기울여 충분한 수준의 마취를 보장하십시오. 통증이나 고통의 징후가있는 경우 펜타닐 (50 μg)의 추가 볼러스 복용량을 제공합니다.
    참고: 전체 시술 동안 동물 마취경험이 풍부한 연구원의 존재를 확인하고 숙련된 수의사의 감독을 사용하여 적절한 마취를 확보하십시오.
12. 실험 프로토콜의 마취, 수술 준비 및실행 중 유체 손실을 보상하기 위해 10mL/kg-1^·h-1 균형 결정의 기준주 주입 속도를 관리한다. 유체 워머를 사용하여 열 손실을 방지하십시오.
13. 비누물을 사용하여 돼지의 피부를 부드럽게 청소하십시오. 포비도요오드를 함유한 피부 소독 용액을 사용하여 피부 오염을 감소시십시오. 수술 준비를 위해 멸균 장갑을 사용하십시오. 적용 300 항균 예방으로 clindamycin의 mg, 후 복용량을 반복 6 시간.

2. 프로브 배치

1. 동물을 오른쪽 측면 위치에 놓고 동물의 뒤쪽을 구부려 척추 사이의 공간을 넓히게 합니다.
2. 외과적으로 가루 과정 및 척추 아치의 준비를 위한 보역 영역을노출(도 1A).
3. 흉부 척추(Th) 13/14 또는 요추 척추(L) 1/2 사이의 두 척추아치(그림 1B)사이에서 혈관 14 G 말초 정맥 카테터 파라메디아를 척수에 넣습니다.
4. 바늘을 제거하고, 정맥 카테터(도1C)에레이저/도플러 바늘 프로브를 삽입하고 지정된 하드 및 소프트웨어와 연결하여 신호 품질을 테스트한다. 적당한 맥동을 가진 안정적인 신호가 있는지 확인하십시오.
5. 봉합사(도1D)로프로브를 조심스럽게 수정하고 패딩을 사용하여 프로브의 탈구 나 꼬임을 방지합니다.
6. 뇌척수압측정 및 제어를 위한 뇌척수액 배수의 경피 배치를 위해 L 4/5 또는 L 5/6의 수준을 확인하고, 피부와 피하 공간을 도입자 바늘로 구멍을 뚫고, 인레이 바늘을 제거합니다.
7. 식염수가 채워진 주사기를 바늘에 놓고 유체가 채워진 주사기에 일정한 압력으로 바늘을 조심스럽게 소개합니다.
8. 저항의 손실이 경막외 위치에 대한 증거로 느껴지면, 인레이 바늘을 다시 소개하고, 두라 마터에 구멍을 뚫고 인레이 바늘을 제거하기 위해 2-3 mm 더 바늘을 소개합니다.
9. 맑은 주류의 빠른 물방울로 인트라테칼 위치를 확인하십시오. 최대 20cm 깊이의 배수를 도입하고, 루어 락 어댑터를 부착하고, 주류의 세심한 포부로 위치를 확인합니다.
10. 봉합사로 배수를 조심스럽게 수정하고 뇌척수액 배수 시스템에 연결하십시오.
11. 왼쪽 귀 뒤에 두개골을 노출하고 6mm 드릴 부착을 사용하여 피부의 드릴 구멍 트레파네이션을 신중하게 수행합니다.
12. 뇌에 직접 두 번째 레이저 도플러 프로브를 소개합니다. 봉합사로 프로브를 신중하게 수정하고 지정된 하드 및 소프트웨어와 연결하여 신호 품질을 테스트합니다. 다시 말하지만, 적당한 맥동을 가진 안정신호가 있는지 확인하십시오.
13. 모든 프로브를 분리하고 동물을 조심스럽게 척추 위치에 배치하여 영향을 받지 않는 프로브 위치를 보장합니다. 적어도 4-5 명의 연구원이이 기동을 수행하도록하십시오.
14. 프로브를 다시 연결하고 신호 품질을 다시 확인합니다.
15. 레이저-도플러 하드웨어의 출력 채널을 증폭기 및 합성 수집 하드웨어 및 소프트웨어에 연결하여 레이저/도플러 플럭스를 거시역학적 신호와 동시에 기록합니다.
16. 2점 보정을 통해 장치(PU)당 플럭스를 교정합니다.
    1. Enter를 눌러 메뉴를 열고 아날로그 출력 설정을 선택합니다.
    2. 표시된 변환계수(5.0V = 1000 PU)를사용하여 합성 획득 소프트웨어와 함께 사용하기 위해 플럭스를 2점 보정으로 보정합니다.
    3. 이전 메뉴로 돌아가기 위해 반환을 선택하고 측정을 계속하도록 측정을 선택합니다.
    4. 신디만 획득 소프트웨어를 엽니다. 설정 메뉴에서 모든 입력0을 선택합니다. 모든 입력을 사용된 장치 및 프로브와 연결합니다.
    5. Flux 채널의드롭다운 메뉴를 클릭하여 플럭스의 2점 보정을 수행합니다. 2점 보정을 선택합니다. 단위 변환을 켜고 BPU를 단위로 선택합니다. 포인트 1의경우 0 V를 0 BPU로 설정합니다. 포인트 2의경우 5.0 V에서 1000 BPU로 설정합니다. 모든 및 새 데이터에 대해 세트 단위를 선택합니다. 확인을 눌러 메뉴를 닫습니다.
17. 목표 압력 10mmHg및 배수 부피 20m·h-1로 연속 뇌척수액^배수를시작한다.

3. 카테터 배치

1. 두 대퇴 동맥을 노출.
2. 오른쪽 대퇴 동맥의 단면 부분을 리게이트하고, 혈관 루프를 사용하여 동맥의 근위 루멘을 일시적으로 폐색하고, 포츠가가 가위를 사용하여 선박의 2mm 절단을 수행하고 가이드 와이어를 소개합니다.
3. 가이드 와이어를 추가로 도입하여 저항이 없는 삽입을 보장하고 와이어의 꼬임을 피합니다. 와이어 위에 카테터를 소개합니다.
4. 봉합사로 카테터를 수정합니다.
5. 혈압및 항심폐 모니터링 하드 및 소프트웨어에 대한 적절한 연결 후 혈액 가스 분석 및 동맥 신호 측정으로 확인된 동맥 혈액의 포부로 올바른 위치를 보장하십시오.
6. 왼쪽 대퇴 동맥에 5mm 유동 프로브를 배치하고 유량계에 연결하여 신호 품질을 테스트합니다.
7. 봉합사로 두 사타구니를 닫습니다.
8. 오른쪽 경동맥뿐만 아니라 8 Fr. 소개자 칼집의 배치에 대한 오른쪽 내부 경정맥을 노출.
9. 카테터 배치의 경우 3.2-3.4에 설명된 것과 동일한 방식으로 진행하십시오.
10. 경동맥 의 측면 루멘을 동맥 압력 측정을 위한 기본 압력 모니터링 및 폐 열량 교정 하드웨어에 접해 보냅니다.
11. 오름차순 대어에 압력 팁 카테터를 도입하고 증폭기 및 동시 인수 하드 및 소프트웨어와 연결하여 위치를 확인합니다.
12. 20cm 깊이의 공기로 풍선을 팽창시키고 혈역학적 곡선에서 쐐기 압력이 보일 때까지 부드럽게 삽입하여 폐 동맥의 정맥 칼집을 통해 백조 간즈 폐 동맥 카테터를 놓습니다. 풍선을 수축하고 카테터를 다시 2cm로 당깁니다. 폐 동맥 압력의 만족스러운 신호 품질을 보장합니다. 테미저서를 기본 압력 모니터링 및 폐 열량 성 하드웨어에 연결합니다.
13. 약물 투여를 위한 12 Fr. 5-Lumen 중앙 정맥 카테터및 외부 오른쪽 경정맥에 중앙 정맥 압력 측정의 경피 배치에 대한 초음파 지침을 사용합니다. 초음파 노출 배치^38에 대한 6 단계 접근 방식을 사용
14. 카테터의 탈경탈을 혈압 및 트랜스 심폐 모니터링 하드 및 소프트웨어에 연결합니다. 모든 약물과 주입을 중앙 정맥 카테터로 전환합니다. 진통제, 유체 및 카테콜아민에 다른 루멘을 사용하고 볼륨 로딩 단계 동안 콜로이드를 투여하기 위해 큰 루멘을 절약하십시오.

4. 외과 적 준비

1. 미니 복강경 절제술을 수행하고 방광을 동원하고, 소변 배수를 위해 폴리 카테터를 삽입하고, 식염수로 풍선을 팽창시키고, 주머니 봉합사로 카테터를 고정시하십시오.
2. mL에 소변 양을 표시하는 소변 수집 가방에 카테터를 연결합니다.
3. FiO_{를 2에서} 1.0으로 늘리고 정맥 내 0.1 mg·kg-1 판쿠로늄을 다시 관리합니다.
4. 흉골까지 준비하기 위해 전기 카우터를 사용하여 중앙 분리증을 수행합니다. 주변 조직에서 흉골을 부드럽게 해부합니다. 부상을 방지하기 위해 압축의 복고풍 배치를 수행합니다.
5. 환기를 멈추고 뼈를 진동톱으로 나눕니다. 환기를 계속하고 FiO_2를 0.3으로 줄입니다. 전기 카운스터를 사용하여 출혈을 줄이고 뼈 왁스로 흉골을 밀봉하십시오.
6. 왼쪽 폐의 정점을 조심스럽게 동원하고 다이어프램의 왼쪽 측면 부분을 나누어 수술 노출을 용이하게 합니다.
7. 좌측 폐의 완만한 후퇴로 체강 트렁크에 내림차체 근위를 노출시키고, 방해받지 않고 통풍을 보장하고 왼쪽 폐에 외상을 피하고(도 2A)를 좌측폐(도 2A)로나누고 주변 조직을 나눕니다(도2B). 혈역학 적 안정화가 필요한 경우 7mL·kg-1 하이드록스테틸 전분 콜로이드를 투여한다.
8. 적절한 노출을 보장하기 위해 내림차순 대오르타 주위에 보류를 놓습니다(그림2C).
9. 내림차순 흉부 대역 주위의 유동 프로브를 부착합니다(도2D). 유량 모듈및 신디만 획득 하드 및 소프트웨어에 연결하여 적절한 신호 품질을 보장합니다. 필요한 경우 접기 젤을 사용하여 신호 품질을 개선하십시오.
10. 내림차순 대동맥 주위에 용기 루프를 부착하고, 대동맥 십자가 클램핑 영역을 표시하기 위해 유량 프로브에 단면한다.

5. 평가 및 데이터 수집

1. 올바른 심방 수준에 배치된 유체 채워진 라인을 사용하여 모든 카테터및 레벨 카테터를 제로로 설정합니다.
2. 바늘 심전도 전극을 배치하고 신디만 인수 하드 및 소프트웨어에 연결합니다.
3. 대동맥 유동 및 압력 측정뿐만 아니라 트랜스 심폐 열량의 평가는 이전에 ^34로설명되었다.
4. 폐 동맥 열량 조절을 이용한 심장 출력 측정의 경우, 10mL의 차가운 식염수로 3개의 주사를 수행하고 기본 모니터링 하드웨어에 의해 표시되는 평균 값을 기록합니다.
5. 시작간단히 레이저-도플러 소프트웨어를 시작하고단계별로 M0에서 M5로신중하게 레이블을 지정하여 각 측정 단계에 대한 마크를 설정합니다.

6. 실험 프로토콜

1. 기준측정(M0)을 수행합니다.
2. 7mL/kg^-1 하이드록시틸 전분 콜로이드의 부피 로딩 단계를 사용하여 혈역학적 최적화를 수행합니다. 가압 주입을 사용하여 각 볼륨 로딩 단계를 5분 이상 수행합니다. 각 볼륨 로딩 단계를 완료한 후 평형을 위해 5분 간 허용합니다. 심장 출력의 증가가 <15%가 될 때까지 볼륨 로드를 시작합니다.
3. 혈역학 최적화완료 후 M1(반복 측정)을 반복합니다.
4. 표시된 영역에 대동맥 클램프를 배치하여 총 48분 의 초라 체강 대동맥 교차 클램핑에 대한 허혈/레퍼퓨전을 유도한다.
5. 연구 프로토콜 동안 동물의 생존을 개선하기 위해 1, 2, 5, 10- 및 30 분 간격의 오름차순에 대동맥 클램핑을 적용합니다.
6. 대동맥 간절제는 최대 5분 후에 또는 대퇴동맥 흐름을 정상화한 후에 각 간격 후에 계속합니다.
7. 100mmHg 평균 동맥 압력 >의 혈압 상승을 방지하기 위해 열등한 베나 카바의 수동 유입 폐색을 수행합니다.
8. 클램핑 단계에서 노르에피네프린 또는 에피네프린의 볼러스 주사를 투여하여 필요한 경우 40mmHg 미만의 평균 동맥 압력의 감소를 방지합니다.
9. 재퍼퓨전(M2) 전에 30분 클램핑 간격의 끝에서 측정을 반복한다.
10. 점차적으로 클램프를 열어 혈역학적 안정성을 보장합니다. 혈압이 너무 빨리 떨어지면 클램프를 닫고 안정화를 허용하십시오.
11. 7mL·kg-1하이드록스테틸 전분 콜로이드를 투여하고, 안정화를 위해 노레피네프린 및/또는 에피네프린의 10-20 μg의 추가 볼루스 주사를 투여한다. pH가 7.1 이하로 떨어지면 중탄산나트륨의 2mL^kg-1을 투여한다. 노모 카피니아를 보장하기 위해 호흡 속도의 적절한 조정을 보장합니다.
12. 재퍼퓨전(M3) 후 1h의 반복 측정을 반복합니다.
13. 6.2 미만에서 설명된 바와 같이 반복 혈역학 최적화및 반복 측정(M4)을 반복합니다.
14. 허혈/재퍼퓨전(M5)을 유도한 후 4.5h의 최종 측정을 수행한다.

7. 안락사

1. 심실 세동및 아시스톨을 유도하기 위해 안락사를 위해 염화칼륨 40mmol을 정맥 내로 투여하십시오.
2. 환기를 종료하고 모든 카테터를 제거합니다.

8. 장기 수확

1. 동물을 경향이 있는 위치에 놓고, 배수뿐만 아니라 바늘 프로브를 제거합니다.
2. 메스와 집게를 사용하여 피부 절개 및 근육 조직의 제거에 의해 척추를 노출.
3. 진동 톱을 사용하여 양쪽의 척추 아치 파라메디아를 나누고 척추 뼈의 등쪽 부분을 조심스럽게 옆으로 이동하여 나머지 연결을 느슨하게 합니다.
4. 집게를 사용하여 척수를 코덜어 끝에서 두개골 끝으로 조심스럽게 들어 올리고 메스를 사용하여 척수를 제거합니다.
5. 척수를 4% 포르말린에 저장하여 조직병리학적 평가 또는 미세구 정량화를 위해 추가활용까지.

9. 통계 분석

1. 통계 소프트웨어를 사용합니다.
2. 필요한 경우 히스토그램 및 로그 변환 변수를 검사하여 정상적인 분포를 보장합니다.
3. 종속 변수-척수 플럭스, 심장 출력, 심장 박동, 뇌졸중 볼륨, 수축기 동맥 압력, 평균 동맥 압력, 동맥 압력, 중앙 정맥 압력, 전신 혈관 저항 - 뿐만 아니라 위및 하부 척수 미세 퍼퓨전 - 일반적인 선형 선형 현미경 해석을 사용하여 지속적인 정체성 혼합 된 모델을 사용하여.
4. 기준 조정을 사용합니다.
5. 가변 기준 및 측정 점에 고정 효과가 있는 모델을 지정합니다. 측정 점을 동물 내에서 반복된 측정값으로 고려하십시오.
6. 각 매개 변수에 대한 측정 점에 대한 고정 효과의 p 값을 보고합니다.
7. 척수 형광 마이크로스피어 분석을 위해 지역 및 측정 지점 간의 고정 효과 및 상호 작용과 더불어 지역 및 측정 지점 간의 상호 작용과 더불어 지역 간 상호 작용을 사용하고 상호 작용에 대한 고정 효과의 p-값을 보고합니다.
8. 측정 지점 M1-M5의 모든 종속 변수에 대해 95%의 신뢰 구간(CI)을 사용하는 계산 기준조정 한계 수단이 가장 유의한 차이 테스트를 통해 쌍방향으로 비교됩니다.
9. 변수를 평균(95% CI)으로 표현합니다. 표준 편차로 동물의 무게를 ±.
10. 조정되지 않은 p-값을 제시합니다.

결과

여섯 마리의 동물은 모두 프로토콜이 완료될 때까지 살아남았습니다. 동물 중량은 48.2 ± 2.9 kg; 5마리의 동물이 수컷이고, 한 마리의 동물은 암컷이었다. 척수 바늘 프로브 삽입뿐만 아니라 척수 플럭스 측정은 모든 동물에서 가능했다.

허혈 유도를 위한 대동맥 교차 클램핑 동안뿐만 아니라 클램핑 및 재퍼주입 동안 대뇌 미세 ...

토론

척수 허혈에 의해 유도된 SCI는 환자 결과^{1,2,3,4,10,11,12에}엄청난 영향을 미치는 대동맥 수리가 큰 합병증이다. SCI를 예방하고 치료하는 미세 순환 표적 치료법이 가장 유망합니다. 이 프로토콜은 실시간 척수 미세 순환 평가...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
CardioMed Flowmeter	Medistim AS, Oslo, Norway	CM4000	Flowmeter for Flow-Probe Femoral Artery
CardioMed Flow-Probe, 5mm	Medistim AS, Oslo, Norway	PS100051	Flow-Probe Femoral Artery
COnfidence probe,	Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA	MA16PAU	Flow-Probe Aorta
16 mm liners
DIVA Sevoflurane Vapor	Dräger Medical, Lübeck, Germany		Vapor
Hotline Level 1 Fluid Warmer	Smiths Medical Germany GmbH, Grasbrunn, Germany	HL-90-DE-230	Fluid Warmer
Infinity Delta	Dräger Medical, Lübeck, Germany		Basic Monitoring Hardware
Infinity Hemo	Dräger Medical, Lübeck, Germany		Basic Pressure Monitoring and Pulmonary Thermodilution Hardware
LabChart Pro	ADInstruments Ltd., Oxford, UK	v8.1.16	Synchronic Laser-Doppler, Blood Pressure, ECG and Blood-Flow Aquisition Software
LiquoGuard 7	Möller Medical GmbH, Fulda, Germany		Cerebrospinal Fluid Drainage System
Millar Micro-Tip Pressure Catheter (5F, Single, Curved, 120cm, PU/WD)	ADInstruments Ltd., Oxford, UK	SPR-350	Pressure-Tip Catheter Aorta
moor VMS LDF	moor Instruments, Devon, UK		Designated Laser-Doppler Hardware
moor VMS Research Software	moor Instruments, Devon, UK		Designated Laser-Doppler Software
Perivascular Flow Module	Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA	TS 420	Flow-Module for Flow-Probe Aorta
PiCCO 2, Science Version	Getinge AB, Göteborg, Sweden	v. 6.0	Blood Pressure and Transcardiopulmonary Monitoring Hard- and Software
PiCCO 5 Fr. 20cm	Getinge AB, Göteborg, Sweden		Thermistor-tipped Arterial Line
PowerLab	ADInstruments Ltd., Oxford, UK	PL 3516	Synchronic Laser-Doppler, Blood Pressure, ECG and Blood-Flow Aquisition Hardware
QuadBridgeAmp	ADInstruments Ltd., Oxford, UK	FE 224	Four Channel Bridge Amplifier for Laser-Doppler and Invasive Blood Pressure Aquisition
Silverline	Spiegelberg, Hamburg, Germany	ELD33.010.02	Cerebrospinal Fluid Drainage
SPSS statistical software package	IBM SPSS Statistics Inc., Armonk, New York, USA	v. 27	Statistical Software
Twinwarm Warming System	Moeck & Moeck GmbH, Hamburg, Germany	12TW921DE	Warming System
Universal II Warming Blanket	Moeck & Moeck GmbH, Hamburg, Germany	906	Warming Blanket
VP 3 Probe, 8mm length (individually manufactured)	moor Instruments, Devon, UK		Laser-Doppler Probe
Zeus	Dräger Medical, Lübeck, Germany		Anesthesia Machine