마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

요약

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

초록

급성 심근경색은 사망률이 높은 흔한 심혈관 질환입니다. 심근 재관류 손상은 심장 재흐름의 유익한 효과를 상쇄하고 이차성 심근 손상을 유발할 수 있습니다. 심근 경색 및 심근 허혈 재관류 손상의 간단하고 재현 가능한 모델은 연구자에게 좋은 도구입니다. 여기에서는 미세조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥(LAD)을 정밀하게 결찰하여 심근경색(MI) 모델 및 MIRI를 생성하는 맞춤형 방법을 설명합니다. LAD의 정확하고 재현 가능한 합자 위치 지정은 심장 손상에 대한 일관된 결과를 얻는 데 도움이 됩니다. ST 세그먼트 변경은 모델 정확도를 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 심장 트로포닌 T(cTnT)의 혈청 수치는 심근 손상을 평가하는 데 사용되고, 심장 초음파는 심근 수축기 기능을 평가하는 데 사용되며, Evans-Blue/트리페닐 테트라졸륨 클로라이드 염색은 경색 크기를 측정하는 데 사용됩니다. 일반적으로 이 프로토콜은 시술 기간을 단축하고, 제어 가능한 경색 크기를 보장하며, 마우스 생존율을 향상시킵니다.

서문

급성 심근경색(AMI)은 전 세계적으로 흔한 심혈관 질환이며 사망률이 높습니다¹. 기술의 발전으로 AMI 환자는 조기에 효과적인 혈관재생술을 받을 수 있습니다. 일부 환자에서 이러한 치료 후 심근 허혈 재관류 손상(MIRI)이 발생할 수 있다². 따라서 작용 메커니즘과 MI/MIRI를 개선하는 방법을 이해하는 것이 매우 중요합니다. 마우스는 비용이 저렴하고 번식 시간이 빠르며 유전자 변형이 용이하기 때문에 모델로 널리 사용됩니다³. 학자들 은 동물 4,5,6,7,8,9에서 MIRI와 MI를 모델링하는 다양한 방법을 개발했습니다. 이 전략은 연구를 촉진하지만 채택된 다양한 기준과 방법은 연구 팀 간의 결과 해석을 복잡하게 만듭니다.

마우스에서, MI는 이소프로테레놀<....

프로토콜

동물 연구는 Huazhong University of Science and Technology(중국 우한)의 동물 관리 및 활용 위원회의 승인을 받았습니다.

알림: 수컷 C57BL/6J 마우스(8-10주)가 모델로 사용됩니다. 생쥐는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있으며 특정 병원체가 없는 조건에서 사육됩니다. 실내는 제어된 온도(22°C ± 2°C)와 습도(45%-65%)로 유지됩니다. 생쥐는 이 기관에서 정한 지침에 따라 Tongji Medical School(중국 우한)의 동물 보호 시설에서 12시간 명암 환경에 노출됩니다. 멸균 미세 수술 기구 및 수술 용품을 사용하십시오. 수술 내내 수술용 장갑과 마스크가 필요합니다. 실험 워크플로우는 그림 1A에 나와 있습니다.

1. 수술 전 준비

1. 수술 과정 내내 예열된 가열 패드(37°C)가 있는 직사각형 수술대(OT)를 사용하십시오(그림 1B). 절차를 시작하기 전에 자외선과 70% 알코올로 보드를 소독하십시오.
2. 필요한 마취제의 투여량을 계산하기 위해 모든 마우스의 무게를 ....

결과

실험 워크플로우는 그림 1A에 나와 있습니다. 연구자는 연구 시작 시 실험 설계에 따라 시간 노드를 예약할 수 있습니다. LAD 결찰 기간은 연구 목적에 따라 다릅니다. MI의 경우 연구는 재관류 단계를 무시할 수 있습니다. 심장 초음파는 비침습적이기 때문에 연구의 여러 단계에서 사용할 수 있는 반면, Evans-Blue/TTC 염색은 마우스를 희생한 경우에만 수행할 수 있습니다. 섬유증.......

토론

최근 몇 년 동안 임상 및 과학 연구에서 MI 및 MIRI에 대한 모델 생성이 빠르게 발전했습니다^20,21. 그러나 행동 메커니즘 및 MI/MIRI를 개선하는 방법과 같이 해결해야 할 몇 가지 질문이 여전히 남아 있습니다. 여기서, MI 및 MIRI의 뮤린 모델을 확립하기 위한 수정된 프로토콜이 설명된다. 몇 가지 핵심 사항을 신중하게 고려해야 합니다.

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9 % sodium chloride solution	Kelun Industry Group,China		-
4% paraformaldehyde fixing solution	Servicebio,China	G1101	-
4-0 silk suture	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China	C412	-
8-0 suture	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China	H801	-
Buprenorphine	IsoReag,China	IR-11190	-
Camera	Canon,Japan	EOS 80D	-
Depilatory cream	Veet,French		-
Elecsys Troponin T hs STAT	Roche,Germany		-
Electrochemical luminescence immunoanalyzer	Roche,Germany	Elecsys 2010	-
Evans blue	Sigma,America	E2129	-
Eye scissors	Shanghai Medical Instruments,China	JC2303	-
Haemostatic forceps	Shanghai Medical Instruments,China	J31020	-
High frequency in vivo imaging systems	Visualsonics,Canada	Vevo2100	-
Ibuprofen	PerFeMiKer,China	CLS-12921	-
Intravenous catheter	Introcan,Germany	4254090B	-
Ketamine	Sigma-Aldrich,America	K2753	-
Medical alcohol	Huichang ,China		-
Microneedle holders	Shanghai Medical Instruments,China	WA2040	-
Microscopic shears	Shanghai Medical Instruments,China	WA1040	-
Microsurgical forceps	Shanghai Medical Instruments,China	WA3020	-
Mouse electrocardiograph	Techman,China	BL-420F	-
Needle holders	Shanghai Medical Instruments,China	JC3202	-
operating floor	Chico,China	ZK-HJPT	-
PE-10 tube	Huamei,China		-
Pentobarbital	Merck,America	1030001	-
Rodent Ventilator	Shanghai Alcott Biotech,China	ALC-V8S-P	-
Stereo microscope	Aomei Industry,China	SZM0745-STL3-T3	-
Surgical thermostatic heating pad	Globalebio, China	GE0-20W	-
Triphenyltetrazolium chloride	Servicebio,China	G1017	-
Xylazine	Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China	323004	-