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이 프로토콜은 이축 기계적 특성화, 편광 공간 주파수 영역 이미징 기반 콜라겐 정량화 및 트리쿠스피드 밸브 전단지의 미세 해부를 설명합니다. 제공된 방법은 전단지 레이어가 전체 론적 전단지 동작에 어떻게 기여하는지 설명합니다.
트리쿠스피드 밸브 (TV)는 우심방에서 우심실로 산소가 공급되지 않은 혈액의 단방향 흐름을 조절합니다. TV는 세 개의 전단지로 구성되어 있으며 각 전단지는 독특한 기계적 동작을 가지고 있습니다. 세 개의 TV 전단지 사이의 이러한 변형은 심방 (A), 해면첩 (S), 섬유사 (F) 및 심실 (V) 인 네 개의 해부학 적 층을 조사함으로써 더 잘 이해할 수 있습니다. 이 층들은 세 개의 TV 전단지에 모두 존재하지만, 각각의 기계적 거동에 더 많은 영향을 미치는 두께와 미세 구조 구성 요소에는 차이가 있습니다.
이 프로토콜에는 층별 차이점을 설명하는 네 가지 단계가 포함되어 있습니다 : (i) 손상되지 않은 TV 전단지의 기계적 및 콜라겐 섬유 건축 거동을 특성화하고, (ii) TV 전단지의 복합 층 (A / S 및 F / V)을 분리하고, (iii) 복합 레이어에 대해 동일한 특성화를 수행하고, (iv) 사후 촬영을 수행합니다. 조직학 평가. 이 실험 프레임 워크는 고유하게 손상되지 않은 TV 조직을 각각의 복합 층과 직접 비교할 수있게합니다. 결과적으로, TV 전단지의 미세 구조 및 생체 역학 기능에 관한 자세한 정보는이 프로토콜을 통해 수집 될 수 있습니다. 이러한 정보는 잠재적으로 TV 질환의 임상 치료를 위한 지침을 제공하고자 하는 TV 계산 모델을 개발하는 데 사용될 수 있다.
TV는 심장의 우심방과 우심실 사이에 있습니다. 심장 주기 전반에 걸쳐 TV는 TV 전단지 (TVAL), TV 후부 전단지 (TVPL) 및 TV 중격 전단지 (TVSL)의 순환 개폐를 통해 단방향 혈류를 조절합니다. 이 전단지는 복잡하며 심방 (A), 해면질 (S), 섬유사 (F) 및 심실 (V)의 네 가지 해부학 적 층을 가지고 있으며 독특한 미세 구조 구성 요소가 있습니다. 심방과 심실의 엘라스틴 섬유는 기계적 하중 후 변형되지 않은 기하학으로 조직을 복원하는 데 도움이됩니다1. 대조적으로, 섬유사는 전단지2의 하중 지지 능력에 기여하는 물결 모양의 콜라겐 섬유의 조밀 한 네트워크를 함유한다. 주로 글리코사미노글리칸으로 구성된 스폰지오사는 심장 판막 기능3 동안 전단지층 사이의 전단을 가능하게 하는 가설을 세웠다. 세 가지 전단지 유형 모두 해부학 적 층이 동일하지만 층의 두께와 구성 비율에 차이가 있으며 전단지 별 기계적 행동에 영향을 미칩니다.
연구자들은 평면 기계적 특성화, 조직 형태 학적 평가 및 콜라겐 섬유 아키텍처의 광학 특성화를 사용하여 TV 전단지의 특성을 탐구했습니다. 예를 들어, 평면 이축 기계....
여기에 설명 된 모든 방법은 오클라호마 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 동물 조직은 USDA가 승인 한 도살장에서 획득했습니다.
1. 이축 기계적 특성화
미세 해부는 (상용) 이축 테스트 장치에 장착 할 수있는 비교적 균일 한 두께의 A / S 및 F / V 표본을 생산합니다. 무손상 전단지와 두 해부된 층의 조직학 분석은 조직이 해면질과 섬유사 사이의 경계를 따라 정확하게 분리되었는지를 검증할 것이다(도 7). 추가적으로, 조직학 현미경 사진은 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 조직층 두께 및 구성 질량 분율을 결정하는데 사용될 수 .......
프로토콜에 대한 중요한 단계는 (i) 층 미세 해부, (ii) 조직 장착, (iii) 신탁 마커 배치, 및 (iv) pSFDI 셋업을 포함한다. 적절한 층 미세해부는 본원에 기재된 방법의 가장 중요하고 어려운 측면이다. 이 기술을 활용한 조사를 시작하기 전에, 해체(들)는 미세 해부 기술과 세 개의 TV 전단지를 모두 사용하여 장기적인 연습을 해야 한다. 디스섹터는 복합 층 시편이 충분히 크고 (>3.3mm) 균일 한 두께를 갖도.......
저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.
이 연구는 미국 심장 협회 과학자 개발 보조금 (16SDG27760143)과 장로교 건강 재단의 지원을 받았다. KMC는 오클라호마 대학 (OU) 학부 연구 기회 프로그램 및 명예 연구 견습 프로그램에 의해 부분적으로 지원되었습니다. DWL은 National Science Foundation Graduate Research Fellowship (GRF 2019254233)과 American Heart Association/Children's Heart Foundation Predoctoral Fellowship (Award #821298)의 지원을 받았습니다. 이 모든 지원은 감사하게 인정됩니다.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10% Formalin Solution, Neutral Buffered | Sigma-Aldrich | HT501128-4L | |
Alconox Detergent | Alconox | cleaning compound | |
BioTester - Biaxial Tester | CellScale Biomaterials Testing | 1.5 N Load Cell Capacity | |
Cutting Mat | Dahle | B0027RS8DU | |
Deionized Water | N/A | ||
Fine-Tipped Tool | HTI INSTRUMENTS | NSPLS-12 | |
Forceps - Curved | Scientific Labwares | 16122 | |
Forceps - Thick | Scientific Labwares | 161001078 | |
Forceps - Thin | Scientific Labwares | 16127 | |
LabJoy | CellScale Biomaterials Testing | Version 10.66 | |
Laser Displacement Sensor | Keyence | IL-030 | |
Liquid Cyanoacrylate Glue | Loctite | 2436365 | |
MATLAB | MathWorks | Version 2020a | |
Micro Scissors | HTI Instruments | CAS55C | |
Pipette | Belmaks | 360758081051Y4 | |
Polarized Spatial Frequency Domain Imaging Device | N/A | Made in-house using a digital light projector, linear polarizer, rotating polarizer mount, and charge-coupled device camera. See doi.org/10.1016/j.actbio.2019.11.028 (PMCID: PMC8101699) for more details. | |
Scalpel | THINKPRICE | TP-SCALPEL-3010 | |
Single Edge Industrial Razor Blades (Surgical Carbon Steel) | VWR International | H3515541105024 | |
Surgical Pen | LabAider | LAB-Skin-6 | |
T-Pins | Business Source | BSN32351 | |
Wax Board | N/A | Made in-house using modeling wax and baking tray | |
Weigh Boat | Pure Ponta | mdo-azoc-1030 |
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