<p class="jove_title"> 당신이 시작하기 전에 </p><ol><li> 다음과 같은 솔루션을 준비 : PBT (1X PBS에 0.​​1 %의 트리톤의 X100), PBTB (0.2 % PBT에서 BSA) 및 PBTN (PBTB에서 2 % NGS)을. </li><li> Drosophila의 유충을 해부하다. <strong><em>Drosophila</em> 애벌레 NMJ의 절개를 참조하십시오.</strong> </li></ol><p class="jove_title"> Immunohistochemistry </p><ol><li> PBT를 포함하는 1.5 ML 튜브에 애벌레로 이동합니다. PBT에서 15 분 동안 두 번 애벌레를 씻으십시오. 참고 : 세척하는 nutator 믹서에 1.5 ML 튜브를 놓습니다. pippetor와 액체를 제거하고 신선한 액체로 대체합니다. </li><li> PBT를 제거합니다. 30 분 두 번 PBTB로 씻으십시오. </li><li> PBTB를 제거합니다. 15 분 동안 두 번 PBTN로 씻으십시오. </li><li> 1 시간 또는 밤새 4 º C에서 온도는 실온에서 PBTN에 희석 일차 항체에 품어. </li><li> PBTB로 두 번 씻어. 참고 : 추가적인 솔루션을 씻어 신속하게 제거하실 수 있습니다. </li><li> PBTB에서 1​​5 분 동안 두 번 씻으십시오. </li><li> 30 분 PBTN로 씻으십시오. </li><li> PBTN에 희석 보조 항체 (그리고 하나를 사용하는 경우에는 복합 기본 항체)에 품어. </li><li> 상온에서 1.5 시간 동안 석박과 부화에 커버. </li><li> PBTB로 두 번 씻어. </li><li> PBTB와 함께 15 분 동안 두 번 씻으십시오. </li><li> 설치를 진행합니다. </li></ol><p class="jove_step"> 설치 </p><p class="jove_content"> 참고 : 샘플은 즉시 몇 군데가 될 수 글리세롤에 마운트합니다. 샘플 이미징 전에 저장됩니다 경우 (일주일 이상) 또는 시료가 여러 번 몇 군데해야하는 경우 골드 연장에 탑재합니다. 사용하려면, 2-3 분 동안 65 º C의 물을 욕조에 연장의 병을 넣으십시오. 골드 연장의 나누어지는를 타고 45-50 º C.에 열을 블록에 유의 </p><ol><li> 시계 유리에 PBT의 스테인드 preps 하거라. </li><li> 처리를위한 깨끗한 유리 슬라이드에 일부 글리세롤 놔. </li><li> 포셉을 사용하여 모서리로 시계 유리의 그들을 채취하여 처리 슬라이드로 동물을 이동합니다. 그들은 아래 표피 사이드 있도록. </li><li> 가공 유리 슬라이드에 신선한 면도날로 머리와 꼬리를 제거합니다. 블레이드 # 16과 함께 exacto - 칼로이 일을 잘 작동합니다. </li><li> 다른 슬라이드에 (슬라이드를 장착), 글리세롤의 작은 방울을 넣어 / 청소 집게로 연장하고 확산. </li><li> 그들을 반대로하지 돌보는 그들의 가장자리에 의해 장착 슬라이드를 해부 동물을 이동합니다. 같은 방향으로 행에서 그들을 탑재하려고. 슬라이드마다 6-8 동물을 탑재합니다. </li><li> 연장 / 글리세롤에 우위를 넣어 천천히 그것을 출시하여 표지 용지를 놓습니다. </li><li> 손톱 광택과 슬라이드를 밀봉합니다. 참고 [니스가 마른 때까지 이미지를하지 마십시오. 이것은 일반적으로 10 분 걸립니다. 연장 황금 장착 샘플, 밀폐 또는 영상 이전에 최소한 세 시간은 슬라이드를 건조하게.] </li></ol>

<ol>
	<li>Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+the+larval+neuromuscular+junction+in+Drosophila+Melanogaster.">Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster.</a> <em style='font-style: italic'>J. Physiol</em>. <b>262</b>, 189-214 (1976).</li><li>Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotypic+morphology+of+glutamatergic+synapses+on+identified+muscle+cells+of+Drosophila+larvae.">Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae.</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci</em>. <b>9</b>, 710-725 (1989).</li><li>Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+neuromuscular+junction:+a+model+system+for+studying+synaptic+development+and+function.">The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function.</a> <em style='font-style: italic'>Annu Rev Neurosci</em>. <b>19</b>, 545-575 (1996).</li><li>Collins, C. A., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+development:+insights+from+Drosophila.">Synaptic development: insights from Drosophila.</a> <em style='font-style: italic'>Curr Opin Neurobiol</em>. <b>17</b> (1), 35-42 (2007).</li></ol>

<p class="jove_content"> 그것은 NMJ의 시각화를 가능하게하기 때문에 Immunohistochemistry (IHC)는 NMJ 생물학 연구를위한 중요합니다. 이것은의 연결 멤브레인 (예 : HRP), presynapse (예 : CSP, SYT), 및 / 또는 postsynapse (예 : DLG)를 인식 항체를 사용하여 수행됩니다. 신호 분자, 구조 단백질, 또는 관심있는 소설 단백질도 얼룩 수 있습니다. 그렇다면 유전자가 변이된 또는 missexpressed하고, IHC는 시냅스 구조 및 / 또는의 연결 신호의 섭동?...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Stereomicroscope &#x201C;Stemi&#x201D; 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss MicroImaging Inc.</td>
<td>495101-9804-000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Light Source KL 1500 LCD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss  MicroImaging Inc. </td>
<td>000000-1063-181</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont SS Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools Inc.</td>
<td>11200-33</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont #5 Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools Inc.</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adams&#x2122; Nutator Mixer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton, Dickinson and Company</td>
<td>421105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>No.1 Precision knife</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>X-Acto</td>
<td>3201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>No. 16 Blades</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>X-Acto</td>
<td>216</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ProLong Gold Antifade reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen Corporation</td>
<td>36930</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

<em>drosophila</em> larval nmj immunohistochemistry

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Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

<p class="jove_content">이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.</p>

<em>Drosophila</em> 애벌레 NMJ Immunohistochemistry

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

drosophila-larval-nmj-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

<em>Drosophila</em> Larval NMJ Immunohistochemistry

15.4K 조회수.  Columbia University College of Physicians and Surgeons. 이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry