Alkaline Phosphatase Activity, Calcium Deposition, and Young's Modulus Measurements in Decellularized Apple-Derived Scaffolds

알칼리성 인산가수분해효소 분석 및 칼슘 증착 분석의 경우, 적절한 배지에서 배양된 세포 파종된 사과 유래 지지체를 PBS로 세 번 세척하는 것으로 시작합니다. 10% 중성 완충 포르말린으로 비계를 30분 동안 고정합니다. 알칼리성 인산가수분해효소 분석의 경우, 10mL의 탈이온수에 BCIP/NBT 정제 1개를 용해시켜 BCIP/NBT 염색 용액을 준비합니다.

그런 다음 고정 스캐폴드를 0.05%TWEEN 용액으로 세척하고 BCIP/NBT 용액으로 실온에서 20분 동안 염색합니다. 얼룩 스캐폴드를 0.05% TWEEN 용액으로 세척하고 PBS에 보관합니다. 그런 다음 12 메가 픽셀 디지털 카메라로 얼룩진 비계를 이미지화하십시오.

칼슘 침착 분석을 위해 2% 부피 기준 중량 Alizarin Red S 염색 용액을 준비합니다. 그런 다음 고정 스캐폴드를 탈이온수로 세척하고 실온에서 1시간 동안 Alizarin Red S 용액으로 염색합니다. 염색된 지지체를 탈이온수로 세척하고 이미징 전에 PBS에 보관합니다.

12메가픽셀 디지털 카메라로 촬영한 이미지입니다. 영률(Young's modulus) 측정을 수행하려면 각각의 배양 배지에서 세포 시드 스캐폴드를 제거하고 1.5뉴턴 로드셀이 장착된 맞춤형 단축 압축 장치를 사용하여 샘플을 즉시 테스트합니다. 분당 3mm의 일정한 속도로 비계를 비계 높이의 10%의 최대 압축 변형률로 압축합니다.

응력/변형률 곡선의 선형 부분의 기울기에서 영률(Young's modulus)을 결정합니다. BCIP/NBT 염색은 블랭크 또는 비분화 배지 배양 세포 파종 스캐폴드에 비해 분화 배지에서 배양된 세포 시드 스캐폴드에서 알칼리성 인산가수분해효소 활성이 크게 증가한 것으로 나타났습니다. Alizarin Red S 염색에 대해서도 유사한 결과가 얻어졌는데, 이는 분화 배지에서 배양된 세포 종자 스캐폴드에서 더 큰 칼슘 광물화를 나타냅니다.

분화 배지에서 배양된 세포 시드 스캐폴드의 영률(Young's modulus)은 약 192.0 킬로파스칼이었으며, 이는 블랭크 또는 비분화 배지 배양 세포 시드 스캐폴드보다 유의하게 높았으며, 이는 더 높은 강성을 나타냅니다.