시작하려면 각 바늘에 5마이크로리터의 Alexa Fluor 표지 GFP 나노바디 용액을 채웁니다. 유리 슬라이드 표면에 25 x 25mm 커버슬립을 놓습니다. 슬라이드에 40마이크로리터의 할로카본 오일을 피펫팅하고 커버슬립 둘레를 따라 펴 바릅니다.
주입 현미경 아래에서 바늘 끝을 오일에 잠긴 커버슬립의 가장자리에 대고 놓습니다. 그에 따라 PicoPump의 분사 공기 압력을 조정하십시오. 빈 유리 슬라이드를 준비된 초파리 배아 슬라이드로 교체합니다.
주사 바늘 끝을 배아의 전방 후방 축에 수직으로 설정합니다. XY 스테이지 매니퓰레이터를 사용하여 팁이 난황 중앙에 도달할 때까지 배아를 바늘 쪽으로 안내하고 2-3회 펌핑하여 노른자에 항체를 주입합니다. XY 스테이지 매니퓰레이터를 사용하여 주입 후 배아를 바늘에서 멀리 떨어뜨리고 다음 배아로 이동합니다.
배아가 원하는 발달 단계에 도달할 때까지 섭씨 25도에서 배양하도록 합니다. 배양 후 명시야 조명이 있는 저배율 렌즈 아래에서 배아를 식별하고 고해상도 형광 라이브 이미징을 위해 40X 또는 63X 렌즈로 전환합니다. 주입 후 노치 수용체의 신호 대 잡음비는 면역형광의 신호 품질과 비교할 수 있도록 크게 개선됩니다.
또한, 항체 주입을 통해 5분의 이미징 기간 동안 신호 강도의 명백한 손실 없이 45초 간격으로 노치 국소화의 시간적 특성 분석이 가능했습니다. 배아 포스포티로신(embryonic phosphotyrosine)의 실시간 이미징은 티로신 인산화(tyrosine phosphorylation)가 삼세포 접합부(tricellular junction)에서 매우 풍부하다는 것을 보여주었습니다. 또한, 포스포티로신 신호의 새로운 두 번째 집단이 정점 막의 중심 아래에서 관찰되었습니다.
이중 색상 이미징은 이 포스포티로신 신호 집단이 내측 미오신 근처에 있음을 밝혔습니다. 또한, 포스포티로신의 내측 모집단은 내측 미오신 (medial myosin)에 대해 나타난 바와 같이 유사한 박동성 유착 및 소산 패턴을 나타냈다.
