시작하려면 여과지를 약 17 x 20mm의 직사각형 모양으로 자르고 네 모서리를 제거합니다. 그런 다음 여과지에 약 7 x 10mm의 속이 빈 중심을 만듭니다. 플렉서블 필름층에 시판되는 링을 부착하고 플렉서블 필름층에 중공 중심을 만듭니다.
준비된 링을 35mm 페트리 접시에 넣습니다. 사전 배양 후 인큐베이터에서 계란을 꺼내 계란 상자 트레이의 긴 축에 놓습니다. 달걀 껍질 표면 전체를 70% 에탄올로 세척하고 15분 동안 그대로 둡니다.
계란을 짧은 축으로 잡고 바닥에서 깨뜨립니다. 깨끗한 100mm 페트리 접시 위에 계란을 열어 내용물을 추출합니다. 피펫을 사용하여 약 10mL의 얇은 알부민을 ex-ovo 배양을 위해 15mL 튜브에 옮깁니다.
배양 접시의 중앙 우물을 묽은 알부민으로 채웁니다. 티슈 페이퍼를 사용하여 배아의 유리체 막에 부착된 두꺼운 알부민을 부드럽게 제거합니다. 이제 여과지를 유리체 막에 조심스럽게 부착하여 배아의 몸체 축이 여과지의 중앙 직사각형과 정렬되도록 합니다.
여과지를 둘러싼 멤브레인을 가위로 자릅니다. 핀셋을 사용하여 분리된 여과지를 요크에서 비스듬한 방향으로 부드럽게 잡아당깁니다. 여과지를 거꾸로 뒤집어 배아의 등쪽이 아래로 향하도록 합니다.
장축의 한쪽에서 전체 여과지를 세척제가 들어 있는 100mm 페트리 접시에 조심스럽게 담급니다. 깨끗한 피펫을 사용하여 세척액을 여과지와 평행하게 부드럽게 분사하여 잔여 노른자를 제거합니다. 그런 다음 세척제에서 여과지를 조심스럽게 제거하고 티슈 페이퍼를 사용하여 배아 가장자리에서 여분의 배지를 흡수합니다.
배아가 있는 여과지를 배양 접시에 놓고 배아의 등쪽이 아래를 향하도록 합니다. 배양 접시를 배양 배양을 위해 무대 위 인큐베이터로 옮깁니다. 배양 접시를 따뜻한 세척 배지로 채우십시오.
배아가 원하는 발달 단계에 도달하면 배아가 있는 여과지를 세척액으로 채워진 배양 접시로 옮깁니다. 배양 접시를 무대 위 Brillouin 현미경의 인큐베이터에 놓습니다. 교정 프로세스를 위해 물의 Brillouin 신호를 측정합니다.
그런 다음 메탄올의 Brillouin 신호를 측정합니다. 4배 대물 렌즈를 사용한 명시야 이미징에서 레이저 조명 지점을 두 번째 쌍의 소마이트로 조정합니다. 그런 다음 40배 대물 렌즈로 전환하고 레이저 포인트를 신경관 중앙으로 미세 조정합니다.
레이저 빔의 차단을 해제하고 초점면을 조정합니다. 2차원 병진 단계를 사용하여 배아를 스캔하고 관심 영역의 Brillouin 이미지를 획득합니다. 스캔을 완료한 후 배아와 함께 여과지를 조심스럽게 제거합니다.
티슈 페이퍼를 사용하여 배아에서 과도한 세척액을 흡수하십시오. 연속 배양을 위해 배아를 묽은 알부민으로 채워진 배양 접시에 다시 넣습니다. Brillouin 영상 재구성을 위해 물과 메탄올 신호 데이터를 불러옵니다.
set region(영역 설정)을 클릭하고 보정 매개변수를 계산하기 위해 4개의 점이 있는 영역을 선택합니다. 캘리브레이션 결과를 저장합니다. 배아 스캔 데이터를 로드하고 매개 변수 처리를 위해 시작을 클릭합니다.
마지막으로, 모든 픽셀의 Brillouin 이동을 기반으로 2차원 Brillouin 영상을 재구성합니다. 소마이트 수 및 배양 시간에 대한 신경판의 추정된 종단 계수에서 Brillouin 이동은 신경관 폐쇄 동안 조직의 Brillouin 이동이 증가했음을 보여주었습니다.
