Fly Samples에서 추출한 DNA의 정성적 및 정량적 분석

시작하려면 DNA 추출 키트를 사용하여 파리 샘플에서 DNA를 추출합니다. 그런 다음 마이크로플레이트 리더를 사용하여 OD260 및 OD280 값을 측정하여 DNA 순도와 핵산 농도를 비교합니다. 다음으로, 2개의 0.5밀리리터 원심분리기 튜브에 190마이크로리터의 작업 용액을 추가하여 형광측정기 표준 용액을 준비합니다.

그런 다음 표준 1과 표준 2 각각 10 마이크로 리터를 작업 용액에 첨가하십시오. 튜브를 최소 15분 동안 빛에서 멀리 두십시오. 0.5 밀리리터 원심분리 튜브에 2 마이크로리터의 테스트 DNA와 198 마이크로리터의 작업 용액을 혼합하고 혼합물을 최소 15분 동안 어두운 곳에 보관합니다.

15분 후 형광측정기를 켜고 dsDNA 농도 측정, 장거리 설정을 선택합니다. 표준 곡선을 얻기 위해 표준 1과 표준 2를 테스트합니다. 그런 다음 테스트할 샘플을 분석 웰에 넣습니다.

DNA 스파이킹 부피를 2마이크로리터로 조정하고 측정을 수행합니다. DNA를 시각화하기 위하여는 첫째로 PCR 확대 반응의 20 마이크로리터를 설정하십시오. 튜브를 열 순환기에 넣고 PCR 사이클을 실행합니다.

PCR 후에, 제품을 2%agarose 젤 전기 이동법을 복종시키십시오. 그런 다음 사진 분석을 위해 겔 이미징 시스템에 겔을 놓습니다. Microplate 리더로 추출된 DNA 순도를 평가한 결과, 모든 신선한 샘플과 오래된 샘플의 OD260 대 OD280 비율이 2 이상인 것으로 나타났습니다.

반면, 오래된 샘플 2는 더 낮은 비율을 보였습니다. OD260 판독값에서 파생된 DNA 농도는 신선한 샘플에서 가장 높았고, 오래된 샘플 1이 그 뒤를 이었고 오래된 샘플 2에서 가장 낮았습니다. 전기영동 분석 결과 250에서 400 염기쌍 범위의 띠가 발견되었는데, 이는 오래된 샘플에 비해 새로운 샘플에서 더 뚜렷하게 나타났습니다.